呋喃它酮代谢物直接竞争化学发光酶免疫分析法的建立

采用以对碘苯酚为增强剂的鲁米诺-辣根过氧化物酶-过氧化氢化学发光检测体系,建立检测动物组织中呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-2-氨基-2-僫唑烷基酮（AMOZ）残留的直接竞争化学发光酶免疫分析法（dc-CLEIA）。结果表明：此方法IC50为0.62 ng/m L,检测限为15.52 pg/m L,线性范围0.038~9.78 ng/m L,变异系数均小于10%;该方法中抗体除了与呋喃它酮原药有一定交叉外,与其他结构类似物无交叉,表现了良好的特异性;鸡肉样品添加回收率为83%~94%,验证了该方法的准确性,为实际动物组织中AMOZ残留提供了便捷、准确、快速筛查的手段。

直接化学发光免疫分析法作为传染四项快速检测方法的应用探讨

目的评价直接化学发光免疫分析法（chemiluminescence immunoassay,CLIA）作为消化性内镜前传染性指标：乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎抗体（抗-HCV）、梅毒螺旋体抗体（抗-TP）和人类免疫缺陷病毒抗体（抗HIV-1/2）四个项目快速检测方法的价值。方法对本院2015年4月13日~4月20日共561例急诊筛查传染性指标四项的住院门诊患者,同时用免疫层析法和直接化学发光免疫分析法平行检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎抗体（抗-HCV）、梅毒螺旋体抗体（抗-TP）和人类免疫缺陷病毒抗体（抗HIV-1/2）,对上述两种方法检测出的阳性结果用ELISA方法复检,比较两种方法的检测结果。结果 561例标本免疫层析法检测阳性标本数HBsAg11例（1.96%）,抗-HCV11例（1.96%）,抗-TP19例（3.39%）,抗-HIV-1/2 5例（0.89%）,直接化学发光免疫分析法检测阳性标本数HBsAg11例（1.96%）,抗-HCV4例（0.71%）,抗-TP8例（1.43%）,抗-HIV-1/2 3（0.53%）例。两种方法阳性标本经ELISA方法复检后阳性标本例数分别为：免疫层析法HBsAg11例（100%）,抗-HCV2例（18.18%）,抗-TP8例（42.11%）,抗-HIV-1/2 0例（0）,直接化学发光免疫分析法HBsAg11例（100%）,抗-HCV2例（50%）,抗-TP6例（100%）,抗-HIV-1/2 0例（0）。结论在临床快速筛查HBsAg、抗-HCV、抗-TP、抗-HIV-1/2时,直接化学发光免疫分法较免疫层析法复检率低,复检后阳性率高,相对更为经济、高效、准确。

直接化学发光免疫分析法定量检测鳞状细胞癌抗原SCC-Ag试剂研究

目的:研制可定量检测人血清中鳞状细胞癌抗原SCC-Ag的直接化学发光免疫分析法试剂。方法:采用表面羧基修饰的磁性微球作为固相载体包被SCC-Ab1,以吖啶磺酰胺为信号标记物标记SCC Ab2;待测物SCC-Ag与试剂混合后,形成双抗体夹心复合物结合在磁珠上,清洗分离,复合物在激发液的作用下发光,相对发光强度(RLU)与样本中的SCC-Ag浓度呈正相关。结果:试剂性能分析显示,最低检出限不高于0.1 ng/mL;批内变异系数≤5%、批间变异系数≤10%;线性范围是1.2~200 ng/mL,线性相关系数R≥0.999;试剂热稳定性变化幅度≤10%、长期稳定性变化幅度≤15%;平均加样回收率98.7%;检测100例临床标本与罗氏SCC-Ag检测试剂盒对比,相关性系数为R2=0.9894。结论:该试剂具有灵敏度高、线性范围广、稳定性好、特异性高、准确度高等特点,为临床人血清鳞状细胞癌抗原SCC-Ag定量检测提供坚实的基础。

保健食品中西地那非化学发光免疫分析方法研究

针对保健食品中西地那非药物的非法添加问题,该研究采用辣根过氧化物酶(HRP)与鲁米诺为信号输出系统,结合直接竞争模式探索了保健食品中西地那非的直接竞争化学发光酶免疫分析方法。基于特异性多克隆抗体,通过逐步优化策略,确定最佳免疫分析条件为:包被原质量浓度为41.67 ng/mL,酶标抗体质量浓度为1.25μg/mL,封闭液和洗涤液的吐温-20含量为0.05%,稀释液的甲醇添加量为5%,竞争反应时间为40 min。在该条件下,建立了西地那非的直接竞争化学发光免疫分析方法,该方法对西地那非的半抑制浓度(IC_(50))为0.17 ng/mL,线性检测范围(IC_(20)~IC_(80))为0.024~1.21 ng/mL,检出限(IC_(10),LOD)为0.008 ng/mL。与他达那非等功能类似物无显著交叉;西地那非样品的加标回收率为82.0%~114%,相对标准偏差均小于15%。盲样检测结果与HPLC-MS/MS确证方法具有良好一致性,说明该方法准确可靠,适用于样品中西地那非的快速筛查。

应用直接化学发光法调查竹山县县域内成人血清T3、T4、TSH的参考范围

目的调查竹山县县域内成人血清T3、T4、TSH的参考范围。方法空腹采集经临床体检和实验室筛查均正常的不同性别（男162例、女128例）、年龄（18～63岁）的健康人群血清，使用德国西门子ADVIACentaurCP全自动直接化学发光法测定T3、T4、TSH，参考范围采用P2．5～P97．5表示。结果T3的参考范围是0．85～2．64nmol／L，T4的参考范围是53．5～136．2nmol／L，TSH的参考范围是0．60～4．45／μIu／mL。结论竹山县城地区成人血清T3、T4、TSH的正常值水平与厂家试剂盒给定的参考范围存在差异，建立本地区的参考范围更适宜于作临床诊断甲亢（甲减）的参考标准。

氨基末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)化学发光免疫冻干微球定量检测试剂研究

目的:研制可定量检测人血清中氨基末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)的化学发光免疫冻干微球。方法:采用直接化学发光免疫分析法,混合预先添加好试剂储存液的磁微粒包被原料和吖啶酯标记原料,利用液氮点样仪器点样,形成冷冻微球并转入冻干机,最后真空冷冻干燥后用保护气体进行分装保存。检测时,加入纯化水与待测样本,等到待测物中的NT-proBNP抗原与试剂混合,形成双抗体夹心复合物结合在磁珠上后,清洗分离。结果:试剂性能分析显示,最低检出限≤20 pmol/mL;批内变异系数(CV)≤5%;线性范围20~35000 pmol/mL,线性相关系数R2≥0.999;试剂45℃储存90 d稳定性变化幅度≤10%;试剂可常温(25℃±5℃)储存5个月,稳定性变化幅度≤10%;平均加样回收率95.7%;应用本实验中获得的试剂对100例样本进行检测并与罗氏NT-proBNP检测试剂盒检测过的标本进行比较,结果表明相关性系数R2为0.9764。结论:该试剂具有灵敏度高,线性范围广,准确度高,稳定性好可常温储存,可实现单人份包装等特点,为临床人血清NT-proBNP定量检测提供坚实的基础。

家禽饲料中玉米赤霉烯酮化学发光酶联免疫分析方法的建立

为了建立比较间接竞争化学发光酶联免疫分析法（ic-CLEIA）与直接竞争化学发光酶联免疫分析法（dc-CLEIA）检测家禽饲料中玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEN）的方法,采用二因子交叉试验优化确定最佳包被原浓度和抗体稀释度,建立ic-CLEIA和dc-CLEIA。结果显示：icCLEIA在0.05-5 ng/m L范围内线性关系良好,线性回归方程为y=-0.383 5x＋0.417 9（R^2=0.994 6）,灵敏度（IC50）为0.611 ng/m L,检出限（LOD）为15 pg/m L,平均批内和批间变异系数为1.79%和1.02%,家禽饲料添加样品回收率为91.9%-112.1%,变异系数小于10.5%;dcCLEIA在0.025-5 ng/m L范围内线性关系良好,线性回归方程为y=-0.386 5x＋0.334 1（R^2=0.991 8）,灵敏度（IC50）为0.372 ng/m L,检出限（LOD）为3 pg/m L,平均批内和批间变异系数为1.16%和1.20%,添加样品回收率为87.3%-119.3%,变异系数小于9.8%。结果表明：两种方法精确,灵敏度高,均可作为定量检测ZEN的有效手段;与ic-CLEIA相比,dc-CLEIA更适用于检测家禽饲料中的ZEN。

新生儿先天性甲状腺功能低下症筛查分析

目的 分析和总结 2 0 0 2年新生儿先天性甲状腺功能低下症 (CH)筛查状况。方法 泉州市 2 0 0 2年活产的新生儿出生后 72小时足跟采血 ,滴在特殊的滤纸 (美国S&S 90 3滤纸 )片上 ,用时间分辨荧光免疫分析法 (TRFIA)测定促甲状腺素 (TSH)浓度。对TSH超过切割值者召回复查 ,取静脉血采用直接化学发光免疫分析法 (CLIA)测定T3 、T4、FT3 、FT4及TSH浓度。结果 全年共筛查新生儿 386 0 0例 ,疑似CH 5 6 8例 ,确诊CH 16例。CH发病率 1/ 2 4 12 ,甲状腺发育异常是先天性甲状腺功能低下症的首要病因。结论 新生儿筛查是CH患儿早期诊断的有效方法 ,是开展CH早期治疗 ,防治智力低下残疾儿发生的有效手段。

拜耳ADVIA Centaur测定血清抗甲状腺过氧化物酶抗体浓度的方法学评价

目的评价拜耳ADVIA Centaur直接化学发光法测定血清抗甲状腺过氧化物酶抗体(anti-TpoAb);方法用AD-VIA Centaur进行特异性评价实验,功能灵敏度实验,方法学相关性评价实验,稀释回收率实验和加样回收率实验;结果体内生物学活性类似的物质对测试方法无干扰,方法最低的功能灵敏度为25 U/ml,直接化学发光法测定anti-TpoAb与经典的放射免疫分析法有良好的相关性,稀释回收实验和加样回收实验结果均满足实验要求;结论拜耳的ADVIA Centaur所采用的直接化学发光法是一种先进的检测anti-TpoAb的方法,具有较经典放免分析法简单、快速、灵敏度高,检测速度快、无放射性污染等优点。

淄博市新生儿先天性甲状腺减低症筛查分析

目的分析和总结新生儿先天性甲状腺功能低下症(CH)筛查状况。方法淄博市2009—2010年活产的新生儿出生后72h足跟采血,滴在特殊的滤纸(美国S&S 903滤纸)片上,用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)测定促甲状腺素(TSH)浓度。对TSH超过切割值者召回复查,取静脉血采用直接化学发光免疫分析法(CLIA)测定T3、T4、FT3、FT4及TSH浓度。结果共筛查新生儿85000例,疑似CH 552例,确诊CH 20例。CH发病率1/4250,甲状腺发育异常是先天性甲状腺功能低下症的首要病因。结论新生儿筛查是CH患儿早期诊断的有效方法,是开展CH早期治疗,防治智力低下残疾儿发生的有效手段。