利用直接原位PCR法探讨柯萨奇B3病毒与心肌炎的病原学关系

目的 探讨柯萨奇 B3病毒 (CVB3 )感染与急性心肌炎的病原学关系。方法 应用生物素标记的核苷酸直接掺入法 ,建立了直接法原位逆转录 -聚合酶链式反应 (RT-PCR)技术 ,分别对感染的 He L a细胞、病毒性心肌炎鼠心肌样本及临床心肌炎的心肌活检标本中的 CVB3进行检测。结果 病毒感染的 He L a细胞可见阳性信号 ,细胞呈蓝紫色 ,而未感染的 He L a细胞无阳性信号 ,细胞不着色。在 CVB3感染的病毒性心肌炎小鼠心肌组织中可检测到病毒 RNA的存在。 16例病理学及临床诊断为心肌炎的患者心肌组织中 ,7例检测到 CVB3 RNA,而 16例正常心肌标本中均为阴性。结论

石蜡包埋组织直接原位PCR法的优化方法

目的探索一种行之有效的石蜡包埋组织直接原位PCR反应体系和反应条件的优化方法。方法采用免疫组化Envision法筛选出κ抗体表达阳性的霍奇金淋巴瘤1例,采用直接原位PCR法,5’-生物素标记的Vκ1/Jκ124、Vκ2/Jκ124、Vκ3/Jκ3、Vκ4/Jκ124、Vκ5/Jκ5、Vκ6/Jκ混合等6对κ家族特异性引物对该例霍奇金淋巴瘤组织中H/R-S细胞的κ轻链基因重排情况进行检测。结果①免疫组化Envision法筛选出κ抗体表达阳性结节硬化型霍奇金淋巴瘤1例;②直接原位PCR法检测该例霍奇金淋巴瘤组织中H/R-S细胞表达Vκ3/Jκ3,探索出了一种行之有效的石蜡包埋组织直接原位PCR反应体系和反应条件的优化方法,并有效的减少了干片、脱片现象的发生。结论本实验采用的直接原位PCR法的优化方法,在石蜡包埋组织中进行直接原位PCR是切实可行和有效的。

建立检测大鼠原位腹主动脉移植细胞嵌合的直接原位法探讨

目的 :建立直接原位PCR法检测受者细胞迁移于移植腹主动脉形成的细胞嵌合。方法 :采用异性别大鼠腹主动脉原位移植模型 ,收集术后 1天、 7天、 2周、 3周、 4周、 2月的腹主动脉 ,建立Digoxigenin - 11-dUTP直接掺入法检测雄性受者来源细胞。结果 :在 7天、 2周、 3周、 4周、 2月移植腹主动脉增殖的内膜中检测到受者来源细胞 ,并与阴性和阳性对照相比有显著意义。结论 :直接原位PCR法可用于移植后受者细胞嵌合的检测。

原位PCR方法在霍奇金淋巴瘤研究中的应用

目的1.探索在石蜡切片上进行直接法原位PCR的可行性。2.探讨霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’sLym-phoma,HL)H/R-S细胞的性质。方法建立一种5’-标记引物直接原位PCR方法,采用该方法对3例福尔马林固定石蜡包埋的HL的H/R-S细胞IgH基因重排情况进行检测,综合分析结果。结果2例结节硬化型HL(NSHL)中,1例有VH2、VH3、FR3基因重排,1例有VH1、VH基因重排;1例混合细胞型HL(MCHL)的H/R-S细胞有VH2、VH3、FR2a基因重排。背景的部分小淋巴细胞核内也出现了阳性信号。结论1.在石蜡切片上行直接法原位PCR是可行和有效的。2.VH1、VH2、VH3、FR2a、FR3基因重排的出现,提示NSHL和MCHL的H/R-S细胞来源于不同分化阶段的B细胞,NSHLa同时出现FR1、FR3基因重排;MCHL同时出现FR1、FR2基因重排;提示NSHL和MCHL的H/R-S细胞可能为多克隆性增生。背景的部分小淋巴细胞核内也可观察到阳性信号,提示周围部分背景小淋巴细胞有可能与H/R-S细胞来自同一B细胞克隆。

原位PCR技术及其应用

目的阐述原位PCR技术的基本原理、进展、应用及存在问题。方法通过检索国内、外相关文献,归纳整理;结合实践操作经验,展开分析。结果原位PCR技术是一种特异性、敏感性较高的靶序列检测定位技术,作为研究基因信息和细胞、染色体等的形态信息的有力工具,尤其是专用原位PCR仪在医学研究(医学检验、病理学领域)上的广泛应用。结论原位PCR技术的应用推广及研究深入,也存在其技术应用不完善之处。

κ基因重排在霍奇金淋巴瘤H-RS细胞性质中的研究

目的:采用直接原位PCR法,对霍奇金淋巴瘤的恶性成分——H/R-S细胞的克隆性及其与背景淋巴细胞的相关性进行研究。方法:采用直接原位PCR法,5′-生物素标记的Vκ/Jκ1124、Vκ/Jκ2124、Vκ/Jκ、Vκ/334Jκ124、Vκ/Jκ、Vκ/Jκ556混合等6对κ家族特异性引物对3例霍奇金淋巴瘤组织H/R-S细胞的κ轻链基因重排情况进行检测。结果:(1)1例结节硬化型霍奇金淋巴瘤(NSHL)组织中,部分H/R-S细胞重复出现Vκ/Jκ33基因重排,亦有部分H/R-S细胞重复出现Vκ/Jκ基因重排,且阳性信号分别重复出现于其周围部分背景1124淋巴细胞核内,少数H/R-S细胞未检测出κ基因重排;(2)2例混合细胞型霍奇金淋巴瘤(MCHL)组织中,所有H/R-S细胞均未检测出κ轻链基因重排。结论:(1)本例NSHL的H/R-S细胞可能为多克隆性增生,且H/R-S细胞与其周围部分背景淋巴细胞间可能存在克隆相关性,即可能来自同一个B细胞克隆;(2)2例MCHL的H/R-S细胞发生了λ基因重排或是采用的κ家族特异性引物法覆盖其Igκ轻链的基因重排方式。