^（99m）Tc直接标记IgG及其稳定性研究

采用二硫苏糖醇还原ＩｇＧ和合亚锡的药盒还原高锝酸盐法将９９ｍＴｃ直接标记ＩｇＧ。其标记率＞９５％，标记后无需纯化。使用多种弱交换配体（亚锡ＰＹＰ、ＭＤＰ、ＧＨ、Ｐｈｙｔａｔｅ和ＥＨＩＤＡ药盒）获得了高的标记率，但此法不宜用ＤＴＰＡ药盒．体外研究和显像表明９９ｍＴｃ－ＩｇＧ的稳定性良好，可用于局部实验性脓肿的诊断。

^(188)Re直接标记抗体方法研究

以2-巯基乙醇作为抗体的还原剂,葡萄糖酸钠作为中间弱配体,在pH5.0的条件下,以SnCl2快速还原188ReO4-,进行了单克隆抗体IgG的直接标记。探讨了影响标记率的因素。结果显示,优化后的标记条件为pH5.0,室温下标记3 h,SnCl2用量2.66μmol,葡萄糖酸钠用量80μmol。该方法操作步骤简单方便,标记率较高,为94.4%±0.7%,标记物不需分离纯化,且有良好的体外稳定性,室温下可稳定保存8 h。

^(18)F-FDG直接标记GKLVFFGK寡肽的方法探讨

目的探讨采用18F-FDG直接标记含KLVFF序列的寡肽的方法。方法按常规制备18F-FDG,然后用其与上述寡肽进一步反应进行标记,分别采用不同pH值、不同比活度的18F-FDG、无修饰及氨基端HYNIC修饰的寡肽进行反应,分别比较标记产率。结果 pH值和18F-FDG比活度值的变化,及寡肽氨基端是否有HYNIC修饰对标记产率均有明显影响,pH值为3.0,18F-FDG比活度值为37.0 MBq/ml,在GKLVFFGK末端连接HYNIC后标记产率最高(35﹪),产物放射化学纯度达到98﹪。结论采用18F-FDG与氨基端HYNIC修饰的含KLVFF序列的寡肽具有可行性,能获得高标记产率,其合成方法可满足进一步研究和临床应用的需要。

^(99m)Tc直接标记单克隆抗体3H11及其在小鼠体内分布的研究

以二硫苏糖醇（ＤＴＴ）为抗体还原剂，亚锡ＭＤＰ药盒为弱交换配体，进行了９９ｍＴｃ直接标记ＭｃＡｂ３Ｈ１１的研究．用ＨＰＬＣ分析鉴定标记物，标记率大于９５％，标记后不需纯化．体外竞争实验和在小鼠体内分布的研究表明，由标记得到的９９ｍＴｃ－３Ｈ１１和９９ｍＴｃ－ＩｇＧ，在体内和体外均是稳定的．

^（99m）Tc直接标记单克隆抗体片段的改进方法

采用改进法将９９ｍＴＣ直接标记了ＭＣＡＢＣＬ３Ｆ（ａｂ’）２，在０．１ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ＝９．３的缓冲液中，标记率大于９５％．用荷ＬＳ１７４Ｔ瘤裸鼠作了显像和体内分布，在注射后１０ｈ可得清晰图像，该法可用于放射免疫显像。

^(188)Re直接标记octreotide的方法学

188Re标记octreotide可用直接标记法或间接标记法。直接标记法包括预锡化法和分步还原法,分步还原法需先用还原剂还原octreotide,然后用SnCl2还原188ReO4-进行直接标记;预锡化法则直接以SnCl2还原octreotide和188ReO4-,打开octreotide分子内双硫键,使188Re直接标记octreotide。预锡化直接标记法简便快速,能够得到较高的放化纯度,无须进一步纯化,适合用于制备药盒。

直接标记小鼠腹水Mc抗HBc的酶标记物的特性及其初步应用的研究

鉴于单克隆抗体是从单一克隆产生的,具有均一性、特异性、有效抗体含量高等优点,我们用辣根过氧化物酶(HRP)直接标记未纯化的小鼠腹水单克隆抗HBc(Mc抗HBc),对此酶标记物的持性及其初步应用进行了研究。经EIA试验表明未纯化的Mc抗HBc酶标记物与亲和层析纯化的HBsAg、基因工程HBeAg、牛皿清白蛋白及正常人血清均不起反应,仅与乙肝HBcAg起反应,证实具有特异性。并有良好的重现性和稳定性,在一周之内不同时间。

利用^(15)N_(2)直接标记法研究水稻种植对稻田固氮量和固氮活性的影响

稻田固氮对土壤维持肥力有着重要的作用,但水稻种植与固氮菌及其活性之间的关系尚不清楚。本试验利用15N2直接标记法测定了下位砂姜土发育的简育水耕人为土在种水稻和不种水稻条件下的生物固氮量,及其在土壤不同层次(0~1、1~5、5~15 cm)和水稻中的分配,并通过实时荧光定量PCR技术测定了土壤中固氮菌nifH DNA及RNA基因数量。结果表明:种水稻处理显著提高了土壤各层固氮量,尤其提高了1~5 cm和5~15 cm土层土壤固氮量对总固氮量的贡献;种水稻处理的总固氮量是不种水稻处理的10.3倍;水稻植株中生物固定的氮占总固氮量的31.48%;在0~1 cm土层,种水稻处理显著提高了nifH RNA基因数量,而对nifH DNA基因数量的增加不显著。可见,水稻种植没有增加固氮菌的数量,稻田固氮量的增加是因为水稻种植极大地促进了固氮菌nifH基因的表达,提高了固氮菌的固氮活性。

基于直接标记法抗体微阵列的初步构建

目的:初步构建基于直接标记法的抗体微阵列,并评价其应用于临床的可能性。方法:选择白蛋白作为目标蛋白,通过琼脂糖铺片、玻片活化、机器点样、点样后固定等步骤构建抗体微阵列,经封闭非特异位点、标记抗原、加样后对白蛋白进行检测,对关键步骤——抗原标记进行最佳条件摸索,通过对临床标本的检测评价其潜在应用价值。结果:应用BCA蛋白定量试剂盒测定尿液样本总蛋白浓度做出的标准曲线,其R2均大于0.99;温度为37℃时抗原标记效果最佳;标记后抗原存放1周对信号的影响无统计学意义(P<0.01);本方法能够检测出临床检测为阴性的尿微量白蛋白浓度。结论:本研究构建了基于直接标记法的抗体微阵列,并对关键的抗原标记环节进行了最佳工作条件优化,有应用于临床检测的潜力。

^（99）Tc^m直接标记单克隆抗体的研究Ⅰ．用^（99）Tc^m标记Fab（3

总结了一种简便、可靠的直接标记法，并成功地运用此法对含巯基较少的Ｆａｂ片段进行了标记，得到了很好的标记率和体外稳定性以及较好的对荷瘤裸鼠的体内分布和显像结果。

辣根过氧化酶直接标记人巨细胞病毒DNA探针的制备和临床应用

用活化或根过氧化酶复合物直接标记人巨细胞病毒（HCMV）DNA特异片段制备酶标基因探针。与靶DNA杂交后酶催化检测系统中相应的发光剂，再经增强剂作用将光信号放大，杂交信号通过X光自显影。经决缝杂交证明该法标记的基因探针可检测到0．2Pg的同源DNA，且仅与HCMVDNA杂交，与HSV-1、EBV及正常人DNA不杂交。用此探针检测42例巨细胞包涵体（CID）患儿和20例正常同龄儿童尿中HCMVDNA，阳性率分别为550％和35％。与病毒分离相比较，杂交法敏感性为92．3％，符合率为87．1％，临床标本检出率高于病毒分离法，表明用HRP直接标记基因深外经化学发光自显影检测HCMVk安全、快速、敏感和特异的方法，适用于临床诊断和研究。

^(188)Re直接标记单克隆抗体TGLA及其生物学评价

单克隆抗体TGLA是一种特异性靶向CD20的嵌合抗体,能有效杀伤肿瘤细胞和抑制肿瘤细胞增长,已用于B细胞淋巴瘤的临床治疗。本研究采用直接标记法,制备188 Re-TGLA,并优化了标记条件。在最佳标记条件下,标记率可达93%,体外放置24h后,放化纯度≥85%,体外稳定性良好。荷淋巴瘤裸鼠体内分布结果表明,188 Re-TGLA在肿瘤的摄取较高,在24h时为(6.46±2.01)ID%/g,提示188 Re-TGLA可以作为一种有效的显像剂,但是为了更好的显像效果,可使用抗体片段进行标记,以缩短抗体的体内半衰期,更好地与188 Re匹配。

肺癌单抗的^(99m)Tc直接标记及其生物分布研究

本文从还原剂SnCl_3用量,反应体系pH值,McAb使用浓度等方面研究了^(99m)Tc直接法标记单克隆抗体的最佳条件,并探讨了VitC对标记反应的影响。β-ME法还原单抗,三氯乙酸沉淀法测定标记率,上行纸层析法测定标记产物胶体含量。结果表明,(99m)Tc直接标记中还原剂SnCl_2浓度以0.01～0.04mg/ml为宜,反应最适pH值在5.6～6.8,McAb最低使用浓度应为500μg/ml以上,适量的VitC对标记反应有促进作用。^(99m)Tc-2F_7McAb在荷瘤裸鼠的肾、肝、脾、肿瘤中分布较高,其它器官内放射性相对较低。瘤/血比在24hr后可达2.0左右,有一定的诊断应用价值。

利用^(99m)Tc直接法标记单克隆抗体及其HPLC分析

比较了２－巯基乙醇（２－ＭＥ）、二硫苏糖醇（ＤＴＴ）和抗坏血酸（ＡＡ）做为抗体还原剂进行９９ｍＴｃ直接标记ＩｇＧ的结果．以ＤＴＴ做为抗体还原剂进行了９９ｍＴｃ标记单克隆抗体３Ｈ１１及其Ｆａｂ片段研究．建立了分析鉴定９９ｍＴｃ标记抗体的ＨＰＬＣ方法．采用ＴＳＫ４０００ＳＷ为色谱性（１３μｍ，７．５ｍｍ×３００ｍｍ）和０．１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ（ｐＨ７．０）为流动相，同时进行紫外检测和放射性检测，可快速地同时测定样品的蛋白质含量和标记率．

^(99)Tc^(m)直接法标记单克隆抗体的研究Ⅱ.抗坏血酸在直接法标记过程中的作用

分析和比较了在^（９９）Ｔｃ~ｍ直接法标记单克隆抗体过程中，抗坏血酸在各个环节中的作用和影响。结果表明，在抗体还原完成后加入防氧化剂抗坏血酸可以防止还原后的—ＳＨ重新氧化，得到的标记产物在标记率和体外稳定性方面均优于不加抗坏血酸的标记法。该方法已成功地用于对Ｆ（ａｂ＇）＿２片段的标记并进行了荷瘤裸鼠体内分布和肿瘤显像测定，得到了很好的体外显像结果。

^(188)Re直接法标记抗人结肠癌单克隆抗体CL-3的研究

本工作对 188Re直接标记抗人结肠癌单克隆抗体 CL- 3的方法进行了详细的研究。以抗坏血酸作为抗体的还原剂 ,以 Sn Cl2 -柠檬酸还原 188Re O4 -溶液 ,进行抗体的直接标记。本方法操作简单、方便 ;标记率高 ( >95% )胶体含量小 ( <5% ) ;标记完后不需纯化分离 ;标记物有良好的体外稳定性和较高的免疫活性 。

^（99m）Tc直接法标记鼠／人嵌合抗体ccM_4及在动物体内分布研究和初步临床应用

ＳｎＣｌ２还原９９ｍＴｃＯ４后与２－巯基乙醇还原的ｃｃＭ４混合标记．薄层层析测定标记率为９８％．ｃｃＭ４嵌合抗体标记前后免疫活性没有明显变化（Ｐ＞０．０５）。动物体内分布实验结果显示：注射９９ｍＴｃ－ｃｃＭ４后１２ｈ．其放射性主要分布在肾（８．１７±１．０９ＩＤ％／ｇ）．肝（６．９４±１．７９ＩＤ％／ｇ）和血液（４．０３±１．０ＩＤ％／ｇ）；荷瘤裸鼠实验显示，１２５Ｉ－ｃｃＭ４瘤体内聚集量最多。９９ｍＴｃ－ｃｃＭ４初步应用于１０例胃癌患者．

生物分子的放射性碘标记方法研究进展

放射性碘标记靶向分子得到的放射性药物一直是核医学领域的研究热点,放射性碘标记药物在其药代动力学研究方面也有明确的应用需求。放射性碘标记方法有直接标记法和间接标记法,直接标记法具有反应快速、操作简便、放化产率高等优点,但存在适用范围较窄及体内脱碘的问题;间接标记法提高了体内稳定性,但存在反应过程复杂、放化产率偏低的问题。本研究介绍放射性碘标记方法的进展、适用范围以及这些方法的优缺点,并对放射性碘标记方法的发展进行展望,以期为放射性碘标记药物研发和同位素药代动力学研究提供参考。

猪病毒性腹泻检测基因芯片的两种样品标记技术比较

对猪病毒性腹泻检测芯片的两种样品标记方法进行比较。分别选取猪流行性腹泻病毒(PEDV)的S和M基因,猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的N和S基因,A型猪轮状病毒(GAR)的VP7和NSP4基因设计引物,用PCR扩增制备靶基因,纯化后制备猪病毒性腹泻联合检测基因芯片。提取样品核酸,采用Cy3直接标记法和间接标记法进行PCR扩增标记,标记的样品再与芯片杂交、扫描和数据分析,同时对两种标记方法的特异性、敏感性等进行了比较。结果表明,两种方法标记的样品均能与基因芯片特异性杂交,但直接法的中位信号值(median)均高于间接法的中位信号值,直接法的芯片杂交信噪比是用间接法的5倍以上。两种标记方法制备样品特异性好,猪蓝耳病毒、猪瘟病毒、猪乙型脑炎病毒、猪伪狂犬病毒验证检测为阴性;直接法和间接法的最低检测浓度分别为10~5和10~7 copies·μL^(-1),前者的灵敏性是后者的100倍。应用优化的直接标记法处理56份临床样品,进行芯片的检测应用,结果与RT-PCR一致。本研究结果表明直接法荧光标记样品可明显提高病毒性腹泻检测芯片的检测效果。

谷胱甘肽包被的CdSe/CdS纳米粒子对前列腺癌细胞的荧光标记

目的:以谷胱甘肽(GSH)作为稳定剂,在水溶液中制备稳定的CdSe/CdS核/壳结构的纳米量子点。方法:将CdSe/CdS量子点与前列腺癌特异性抗原(PSA)连接,制备水溶性CdSe/CdS-IgG复合物探针,采用直接和间接两种方法对前列腺癌细胞进行标记成像。结果:用该探针对前列腺癌细胞成像清晰,与传统的异硫氰酸荧光素(FITC)相比,具有更强的荧光强度和光稳定性。结论:间接标记法利用一抗和二抗之间的结合降低了非特异性吸附,量子点探针在细胞表面呈现出明显的荧光信号。