呋喃唑酮代谢物直接竞争化学发光检测方法的建立

目的:建立呋喃唑酮代谢物(AOZ)直接竞争化学发光检测方法,用于新疆水产品呋喃唑酮残留检测。方法:采用碳二亚胺法将AOZ与对醛基苯甲酸反应生成物CPAOZ与HRP偶联成酶标物CPAOZ-HRP,加之CPAOZ单克隆抗体,建立AOZ直接竞争化学发光检测方法(CLIA);运用高效液相色谱法(HPLC)和AOZ-CLIA检测新疆罗非鱼样品中AOZ的残留情况。结果:以1∶6000CPZOA单克隆抗体稀释度为最佳包被浓度,1∶64000CPAOZ-HRP稀释浓度为最佳检测浓度,建立AOZ-CLIA方法,其标准曲线呈线性,线性范围0.0527~8.5ng/mL,IC50为0.235ng/mL;该方法能特异性检测AOZ,与其他药物无交叉反应;样品最低检出限为0.0509μg/kg,样品添加回收率为87.2%~95.0%;新疆罗非鱼AOZ-CLIA检测结果与HPLC结果完全一致,均未检测出超标样本。结论:建立的AOZ-CLIA检测方法能满足新疆水产品呋喃唑酮残留检测。

直接竞争化学发光酶免疫法检测猪肉中磺胺嘧啶

建立一种检测猪肉中磺胺嘧啶的简便、快速、高特异性的直接竞争化学发光酶免疫法。采用改良的过碘酸钠法制备酶标抗体,以辣根过氧化物酶催化鲁米诺-过氧化氢作为化学发光体系。经优化该方法检测条件为:利用柠檬酸缓冲液稀释抗原包被质量浓度为0.8μg/mL,酶标抗体2000倍稀释,竞争反应25min;所建立的方法分析灵敏度为2.96ng/mL,批内变异系数小于8.32%,批间变异系数小于13.4%,以猪肉为样品的分析回收率为75.6%～103.7%,与其他结构类似物未见明显交叉,所建立的标准曲线相关系数为0.9922、检测线性范围为4.14～244ng/mL、检测时间为25min,可在实际生产中应用。

呋喃它酮代谢物直接竞争化学发光酶免疫分析法的建立

采用以对碘苯酚为增强剂的鲁米诺-辣根过氧化物酶-过氧化氢化学发光检测体系,建立检测动物组织中呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-2-氨基-2-僫唑烷基酮（AMOZ）残留的直接竞争化学发光酶免疫分析法（dc-CLEIA）。结果表明：此方法IC50为0.62 ng/m L,检测限为15.52 pg/m L,线性范围0.038~9.78 ng/m L,变异系数均小于10%;该方法中抗体除了与呋喃它酮原药有一定交叉外,与其他结构类似物无交叉,表现了良好的特异性;鸡肉样品添加回收率为83%~94%,验证了该方法的准确性,为实际动物组织中AMOZ残留提供了便捷、准确、快速筛查的手段。

呋喃它酮代谢物直接竞争化学发光检测方法的建立

将呋喃它酮代谢物(AMOZ)与对醛基苯甲酸反应生成CPAMOZ,采用碳二亚胺法将CPAMOZ和HRP偶联得到酶标物CPAMOZ-HRP,在该酶标物和CPAMOZ单克隆抗体的基础上,建立AMOZ的直接竞争化学发光(CLIA)检测方法。结果显示,CPAMOZ-HRP经紫外扫描鉴定偶联成功;以单克隆抗体稀释度1∶8 000为最佳包被浓度,CPAMOZ-HRP稀释浓度1∶64 000为最佳工作浓度建立CLIA方法,其标准曲线呈线性,线性范围0.062 5~8 ng/m L,回归方程为y=-0.397x+0.286(R^2=0.992),IC_(50)为0.289 ng/m L;AMOZ单克隆抗体能特异性识别NPAMOZ(AMOZ的对硝基苯甲醛的衍生物),除AMOZ外与其他参试的化学品或药物无交叉反应;样品最低检出限为0.059 6 g/kg;样品添加回收率在85%~91.93%之间,检测值的变异系数≤10%;实际样品检测结果与进口试剂盒检测结果呈线性相关(y=0.935x+0.556,R^2=0.997),表明本试验建立的方法可靠性等同于进口试剂盒,可满足AMOZ实际检测的需要。

家禽饲料中玉米赤霉烯酮化学发光酶联免疫分析方法的建立

为了建立比较间接竞争化学发光酶联免疫分析法（ic-CLEIA）与直接竞争化学发光酶联免疫分析法（dc-CLEIA）检测家禽饲料中玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEN）的方法,采用二因子交叉试验优化确定最佳包被原浓度和抗体稀释度,建立ic-CLEIA和dc-CLEIA。结果显示：icCLEIA在0.05-5 ng/m L范围内线性关系良好,线性回归方程为y=-0.383 5x＋0.417 9（R^2=0.994 6）,灵敏度（IC50）为0.611 ng/m L,检出限（LOD）为15 pg/m L,平均批内和批间变异系数为1.79%和1.02%,家禽饲料添加样品回收率为91.9%-112.1%,变异系数小于10.5%;dcCLEIA在0.025-5 ng/m L范围内线性关系良好,线性回归方程为y=-0.386 5x＋0.334 1（R^2=0.991 8）,灵敏度（IC50）为0.372 ng/m L,检出限（LOD）为3 pg/m L,平均批内和批间变异系数为1.16%和1.20%,添加样品回收率为87.3%-119.3%,变异系数小于9.8%。结果表明：两种方法精确,灵敏度高,均可作为定量检测ZEN的有效手段;与ic-CLEIA相比,dc-CLEIA更适用于检测家禽饲料中的ZEN。