复制缺陷的重组腺病毒载体直接转染猪慢性缺血心肌的研究

目的 建立猪慢性心肌缺血模型 ,评价腺病毒载体的转染效率和持续时间。 方法 应用磷酸钙沉淀法制备携带大肠杆菌 L ac Z基因复制缺陷的重组腺病毒 ( Ad.L ac Z) ,将健康家猪 8条随机分为实验组和对照组 ,每组 4条。两组猪均经左前外侧开胸 ,于冠状动脉左回旋支 ( L CX)放置 Ameroid环 ,2 8天后二次开胸 ,实验组 :在缺血心肌部位每点直接注射 Ad.L ac Z 10 0μl,10 1 0 噬斑形成单位 ,共 10点 ;对照组 :在缺血心肌部位每点注射磷酸盐缓冲液 ( PBS) 10 0μl,共10点。于注射后 3天、7天和 2 8天对缺血心肌进行染色和病理观察。 结果 冠状动脉造影证实 L CX完全闭塞 ,心肌有缺血和小面积心肌梗死 ;实验组注射 Ad.L ac Z后第 3天、7天和 2 8天 X- gal染色有阳性细胞 ,以 7天时明显 ,对照组无阳性细胞。 结论 应用 Ameroid环可成功建立猪慢性心肌缺血模型 ,腺病毒载体转染缺血心肌基因表达可持续 4周。

壳聚糖介导人胰岛素基因在糖尿病鼠体内外表达的研究

目的研究壳聚糖介导人胰岛素基因在糖尿病鼠体内外转染及表达。方法采用壳聚糖体外转染鼠成纤维细胞,对转染后72h的细胞应用免疫组织化学方法检测胰岛素的表达。27只糖尿病大鼠随机分为3组(pCMV.INS组、pCMV组、生理盐水组),体内转染通过尾静脉注射糖尿病大鼠,检测空腹血糖和胰岛素。结果pCMV转染细胞无胰岛素表达,pCMV.INS转染大约10%的细胞有胰岛素表达;pCMV.INS转染大鼠血浆胰岛素显著高于生理盐水对照组(P<0.01)和pCMV对照组(P<0.01)。结论人胰岛素基因可通过壳聚糖直接转染至糖尿病大鼠体内发挥治疗作用及壳聚糖可能是一种很有前途的基因载体。

靶向皮肤树突状细胞可能是有应用前景的疫苗策略

据Medscape．com6月13日报道（原载Immunity2006：24：643—656），慢病毒侵入表皮会直接转染皮肤源性树突状细胞，使编码的抗原出现有效且持久的提呈。

反义AKT2 RNA逆转C6胶质瘤的细胞恶性表型

目的研究反义AKT2RNA逆转C6鼠脑胶质瘤细胞恶性表型。方法将逆转录病毒LXSN为载体的反义AKT2构建体脂质体复合物直接转染人脑胶质瘤细胞系TJ905和鼠脑胶质瘤细胞系C6,LXSN载体转染组为空载对照。随机筛选阳性克隆并应用蛋白印记和原位杂交鉴定转染。MTT法和TUNEL法评价细胞的增殖活性和凋亡,Transwell法分析侵袭能力,划痕实验研究细胞迁移能力,流式细胞法分析细胞周期,并进行GFAP的表达分析。结果转染ASAKT2cDNA后C6细胞AKT2表达显著抑制。与C6对照组和LXSN空载组比较,转染反义AKT2后C6细胞存活率均明显下降(P<0.01),凋亡指数增加(0.33vs13.67,P<0.01),侵袭能力和细胞迁移能力抑制,诱导细胞出现G0/G1细胞周期阻滞,上调GFAP的表达。结论反义AKT2RNA基因治疗通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭与迁移并使G0/G1细胞周期阻滞逆转其恶性表型,AKT2可作为基因治疗胶质瘤的重要优选靶的。