TPARM对人结直肠癌细胞株SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的 探讨四肽重复结构域(TTC)12,也被称为TPARM,其表达对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法 将人结肠癌SW480细胞株分为3组:NC组、TPARM-siRNA组和Scr-siRNA组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法和Western印迹法检测各组TPARM mRNA和蛋白表达。细胞计数试剂盒(CCK)8法、平板克隆法测定各组TPARM表达对SW480细胞增殖的影响。Western印迹法检测TPARM表达对各组周期相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达。流式细胞术检测各组TPARM表达对SW480细胞凋亡的影响。Transwell小室侵袭实验和划痕实验观察TPARM表达对SW480细胞侵袭、迁移能力的影响。结果 与NC组、Scr-siRNA组比较,转染TPARM-siRNA后,SW480细胞中TPARM mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。分别与NC组和Scr-siRNA组比较,TPARM-siRNA转染组SW480细胞增殖明显减少(P<0.05),周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、CDK4、CDK6的蛋白表达明显下降(P<0.05);SW480细胞凋亡水平明显增加(P<0.05),髓细胞白血病序列(Mcl)-1、B淋巴细胞瘤(Bcl)-xl及Bcl-2的蛋白表达水平明显下降,Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达明显升高(P<0.05);SW480细胞的侵袭和迁移能力被抑制。结论 TPARM可能通过使结直肠癌细胞增殖增加和凋亡减少及促进结肠癌细胞的侵袭和迁移能力,从而在结直肠癌发生发展中发挥作用。

华蟾毒精通过Wnt/β-catenin信号通路抑制人结直肠癌SW-480细胞活性及迁移能力的机制研究

目的探讨华蟾毒精抑制人结直肠癌SW-480细胞活性及迁移能力的潜在分子机制。方法使用1.0μmol/L华蟾毒精处理后,检测人结直肠癌SW-480细胞的细胞活力和迁徙能力。华蟾毒精处理后,通过高通量测序和信号通路富集分析人结直肠癌SW-480细胞中异常的信号通路。通过实时荧光定量PCR、免疫印迹和分子对接分析华蟾毒精改变人结直肠癌SW-480细胞活性及迁移能力的潜在分子机制。结果华蟾毒精处理后,人结直肠癌SW-480细胞的细胞活力在2、3、4 d时显著下降(P<0.05)。同时,人结直肠癌SW-480细胞的迁移能力显著下降。高通量和信号通路富集分析发现华蟾毒精处理人结直肠癌SW-480细胞后Wnt/β-catenin信号通路中的基因被影响最多。华蟾毒精处理人结直肠癌SW-480细胞后,发现Wnt/β-catenin信号通路下游的关键基COX2、BIRC5、CCND1、MYC、AXIN2、EPCAM、WISP1的mRNA表达水平均显著下降(P<0.05)。华蟾毒精处理人结直肠癌SW-480细胞后,分离细胞的细胞核和细胞浆发现β-catenin在细胞浆中聚集,很少入核。同时,华蟾毒精处理人结直肠癌SW-480细胞后,磷酸化的β-catenin的蛋白增加。通过分子对接发现华蟾毒精与β-catenin的第332位氨基酸T具有潜在的结合能力。通过CRISPR/CAS9技术敲除人结直肠癌SW-480细胞中的β-catenin,并在敲除了β-catenin的SW-480细胞中分别构建野生型β-catenin和突变型β-catenin T332A持续表达的稳转细胞系。华蟾毒精处理具有野生型β-catenin和突变型β-catenin的人结直肠癌SW-480细胞后,发现在野生型β-catenin细胞中Wnt/β-catenin信号通路下游的关键基COX2、BIRC5、CCND1、MYC、AXIN2、EPCAM、WISP1的mRNA表达水平均显著下降(P<0.05),而在突变型β-catenin细胞中Wnt/β-catenin信号通路下游的关键基COX2、BIRC5、CCND1、MYC、AXIN2、EPCAM、WISP1的mRNA表达水平均显著上升(P<0.05)。同时,使用华蟾毒精处理突变型β-catenin的人结直肠癌SW-480细胞后,人结直肠癌SW-480细胞的细胞活力和细胞迁移能力无显著变化。结论华蟾毒素通过结合β-catenin第332位苏氨酸,增加了β-catenin的磷酸化,抑制了β-catenin进入细胞核的量,降低了Wnt/β-catenin信号通路下游的关键基COX2、BIRC5、CCND1、MYC、AXIN2、EPCAM、WISP1的转录,最终抑制人结直肠癌SW-480细胞活性及迁移能力。

茶多酚对人γδT淋巴细胞和结肠癌细胞株SW-480的影响

目的:观察茶多酚对人γδT细胞杀伤肿瘤细胞活性的影响和诱导人结肠癌细胞株(SW-480)凋亡和死亡的作用。方法:在体外用不同浓度的茶多酚诱导人γδT细胞和SW-480细胞株,然后测定人γδT细胞杀瘤活性和对肿瘤细胞的作用。用不同浓度的茶多酚分别诱导SW-480细胞4 h后,弃含有茶多酚的培养液再继续培养24 h,然后测定其死亡和凋亡数,用γδT细胞作对照组。结果:茶多酚浓度350 mg/L,作用γδT细胞4 h后能明显增强γδT细胞的杀伤肿瘤细胞活性,与未诱导组和其他浓度组相比,P<0.01;γδT细胞对经茶多酚处理后的SW-480细胞杀伤活性也明显高于对照组(P<0.01)。各种浓度的茶多酚分别与γδT和SW-480细胞作用4 h,弃诱导液再继续培养24 h后,均能诱导其死亡和凋亡,在茶多酚浓度350 mg/L、诱导时间4 h时最明显;同一浓度的茶多酚诱导SW-480细胞死亡和凋亡率明显高于γδT细胞组。结论:茶多酚在一定浓度时能明显提高γδT细胞对肿瘤的杀伤活性;经茶多酚处理的SW-480细胞更易被γδT细胞杀伤。茶多酚浓度在350 mg/L时能诱导SW-480细胞凋亡而对人γδT细胞无影响。

柴胡皂苷D通过诱导自噬抑制人结直肠癌细胞SW480增殖的实验研究

目的:研究柴胡皂苷D(saikosaponin-D,SSD)对人结直肠癌细胞SW480自噬的影响,并探讨诱导的自噬对细胞增殖的影响。方法:Western-blot检测SSD对自噬相关蛋白LC3A/B和p62表达的影响,LC3翻转实验和GFP-RFP-LC3荧光实验验证自噬流的发生。Western-blot检测3-MA对SSD所诱导自噬的抑制作用,MTT和细胞计数实验研究3-MA抑制自噬后SSD对SW480细胞增殖的影响。结果:SSD能够诱导SW480细胞发生自噬,表现在LC3A/B II及LC3A/B II/I比值的增高、自噬经典底物蛋白p62的减少、LC3翻转试验阳性以及LC3荧光实验中黄色和红色荧光颗粒的增多(P<0.05)。自噬抑制剂3-MA能够抑制SSD所诱导自噬的发生(P<0.05),且3-MA抑制自噬后,SSD对SW480的增殖抑制效应减弱(P<0.05),提示SSD诱导的自噬对细胞的增殖起抑制作用。结论:SSD通过诱导自噬抑制人结直肠癌细胞SW480的增殖。

5-FU对SW480细胞Musashi-1基因表达的影响

目的:观察5-氟尿嘧啶(5-FU)对人结直肠癌细胞株SW480的作用与Musashi-1基因表达变化的关系。方法:用MTT法检测不同时间5-FU对SW480细胞增殖的影响,流式细胞术检测侧群(SP)细胞和CD34+CD44+细胞比例,RT-PCR半定量检测Musashi-1基因表达。结果:5-FU作用于SW480细胞24、48、72 h的半数抑制率依次为32.12、16.2和6.8 mg.L-1,SP细胞比例、CD34+CD44+细胞以及Musashi-1 mRNA表达在5-FU作用后均增加。结论:正常肠道干细胞标记物Musashi-1有可能成为结直肠癌干细胞样肿瘤细胞特异性标记,CD34、CD44可能具有类似的潜力。

白首乌提取物C_(21)甾体苷对结直肠癌细胞株SW480的影响

目的:探讨白首乌提取物C_(21)甾体苷对人结直肠癌细胞株SW480生长、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:体外常规培养人结直肠癌细胞株SW480,以不同浓度的C_(21)甾体苷作用于细胞,分别培养24 h、48 h、72 h,采用溴化二甲噻唑二苯四氮法检测不同浓度的C_(21)甾体苷对人结直肠癌细胞株SW480生长的抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Transwell小室法检测细胞的侵袭和迁移能力。结果:C_(21)甾体苷以时间和浓度依赖性抑制人结直肠癌细胞株SW480的生长,促进人结直肠癌细胞株SW480凋亡,抑制人结直肠癌细胞株SW480的侵袭和迁移。结论:C_(21)甾体苷可抑制人结直肠癌细胞株SW480的生长,该抑制作用与诱导其凋亡及降低其侵袭和迁移能力有关。

长链非编码RNA SNHG16在结直肠癌癌组织中的表达及其对SW480细胞株增殖的影响

目的研究长链非编码RNA(Lnc RNA)SNHG16在结直肠癌(CRC)癌组织中的表达及其对SW480细胞株增殖的影响。方法收集于该院接受肛肠科手术切除的38例CRC患者,分别检测患者癌组织和癌旁组织中lnc RNA SNHG16表达情况;体外培养结直肠癌SW480细胞,并将结直肠癌SW480细胞分为对照组和干扰组;干扰组使用siRNA敲低SNHG16的表达,使用RT-PCR检测二组SNHG16表达情况;采用克隆形成实验检测二组细胞的增殖情况。采用蛋白质印迹法检测二组增殖相关蛋白Ki-67、PCNA表达情况;采用流式细胞仪检测二组细胞周期情况。结果与癌组织比较,癌旁组织中SNHG16表达高(P <0.05);与对照组比较,干扰组SNHG16mRNA表达、Ki67蛋白相对表达、PCNA蛋白相对表达均较低(均P<0.05)。干扰组克隆形成率为(7.36±4.55)%,明显低于对照组(49.36±8.21)%(P <0.05)。干扰组SW480细胞G0/G1期细胞比例为(62.21±1.70)%,明显高于对照组(53.16±1.68)%;干扰组SW480细胞G2/M期和S期细胞比例为(15.80±0.50)%和(21.99±1.08)%,低于对照组(18.35±0.88)%和(28.49±1.25)%(P<0.05)。结论结直肠癌组织中长链非编码RNA SNHG16呈高表达,敲低SNHG16的表达可以通过降低增殖相关蛋白的表达并阻滞SW480细胞于G0/G1期,实现抑制SW480细胞的恶性增殖。

Kruppel样因子4对人结肠癌细胞SW480迁移侵袭能力的影响

结直肠癌是我国高发的恶性疾病之一,结直肠癌的局部浸润侵袭及远处迁移是导致肿瘤转移和复发并难以治愈的关键原因.目前的研究表明,核转录因子Kruppel样因子4（KLF4）参与调节正常细胞的增殖、分化、凋亡等过程[1].我们在前期实验中发现KLF4在人结肠癌细胞株SW480中呈低表达,故推测KLF4可能作为抑癌基因影响SW480迁移侵袭能力.我们通过转染质粒过表达KLF4来观察KLF4对SW480侵袭迁移能力的影响.

阿司匹林对人γδT细胞和消化系统肿瘤细胞的作用比较

目的:比较阿司匹林对人γδT细胞和5株消化系统肿瘤细胞株的作用。方法:用不同浓度的阿司匹林诱导γδT细胞和消化系统肿瘤SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116、LOVO细胞株,用MTT法检测阿司匹林对这些细胞的抑制率和用乳酸脱氢酶法测定γδT细胞的杀伤活性,用流式细胞术检测诱导前后的γδT细胞和SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞凋亡率。结果:培养前γδT细胞数为5.12%,CD44表达5.13%;培养10d时γδT细胞数为91.27%,CD44为94.00%。阿司匹林在3.2mmol·L-1时对γδT细胞的生长抑制率达41.3%,明显高于对SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株抑制率(分别为19.6%,11.8%,9.2%,6.4%和1.6%)。0.4～1.6mmol·L-1阿司匹林诱导24h后的γδT细胞对5种肿瘤细胞的杀伤活性最高,浓度超过3.2mmol·L-1时杀伤活性呈下降趋势;SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞经不同浓度的阿司匹林诱导24h后γδT细胞对其杀伤活性除SW-1116和LOVO细胞株略有增强外,其他组与对照组比较无明显变化。3.2mmol·L-1阿司匹林对γδT细胞诱导24h的凋亡率(52.7%)显著高于SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株(分别为7.9%,8.9%,6.2%,4.5%和3.7%)。结论:阿司匹林在临床常规使用的药物浓度时对5种肿瘤细胞株和γδT细胞无抑制作用,但能增强γδT细胞杀伤5种肿瘤细胞株活性,超过这一浓度可明显抑制γδT细胞的增殖能力和杀伤活性及增加γδT细胞的凋亡率,而对5种肿瘤细胞株作用不明显。这一结果为临床阿司匹林预防消化道肿瘤的用量提供了一定的参考价值。

龙须菜藻红蛋白亚基分离及抗肿瘤活性研究

目的研究藻红蛋白不同亚基对人直肠癌SW-480细胞的抑制作用。方法通过盐析和DEAE-Sepha-rose FF柱层析从龙须菜中获得高纯度藻红蛋白,然后通过脲变性、CM-Sepharose F F阳离子交换层析与透析复性,获得具活性的PE亚基,采用MTT法检测藻红蛋白亚基对SW-480细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测藻红蛋白亚基对SW-480细胞凋亡的影响。结果 PE亚基对SW-480有较强的生长抑制作用,其中以β亚基最为显著,当β亚基剂量为20μg/mL,作用时间48 h时,其对SW-480细胞的抑制率达72.64%。结论藻红蛋白及其亚基对SW-480细胞株的生长具有较强的抑制作用,β亚基效果最好,预示其具有一定的抗肿瘤潜力。