原发性结直肠癌氟尿嘧啶代谢相关酶类的表达与临床意义

目的:研究氟尿嘧啶代谢相关酶在原发性结直肠癌的表达及临床意义。方法:收集北京大学临床肿瘤学院2003年8月至2004年2月收治的经病理确诊的61例原发性结直肠癌患者的标本,应用RT PCR方法检测原发性结直肠癌组织和非肿瘤组织中胸苷酸合成酶(thymidylatesynthase, TS)、二氢胸腺嘧啶脱氢酶(dihydropyrimidinedehydrogenase, DPD)、乳清酸磷酸核糖基转移酶(orotatephosphoribosyltransferase, OPRT)的基因表达。结果:每种酶在肿瘤组织和非肿瘤组织中的基因表达水平存在正相关。肿瘤组织与非肿瘤组织相比,TS和DPD表达近似。结直肠癌肿瘤组织中OPRT表达水平是非肿瘤组织中OPRT表达水平的4. 38倍(P=0. 000),OPRT的表达量在黏液腺癌中是最低的,在低分化腺癌中是最高的。肿瘤组织/非肿瘤组织OPRT表达量的比值(TOPRT/NOPRT)与淋巴结转移(r=0. 36;P=0. 005)、脉管转移(r=0. 26;P=0. 041)和组织学分化(r=-0. 33;P=0. 009)具有相关性。结论:采用RT-PCR法检测三种酶在结直肠癌中的表达切实可行,有良好的临床应用前景。提示OPRT可能是潜在的结直肠癌预后指标。

结直肠癌MGMT和TS的表达及其与临床病理因素的关系

目的探讨5-FU疗效相关基因MGMT及TS蛋白在散发性结直肠癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用EnvisionTM鼠/兔-HRP广谱检测系统检测78例原发性结直肠腺癌、26例癌旁正常黏膜、13例低级别上皮内瘤变和11例高级别上皮内瘤变标本。结果MGMT蛋白在正常黏膜、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变和结直肠腺癌中阳性表达率分别为26.9%、53.8%、54.5%和62.8%,组间差异具有统计学意义(P<0.01);TS蛋白在正常黏膜、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变与结直肠癌的阳性表达率分别为23.1%、38.5%、36.4%和61.5%,组间差异亦具有统计学意义(P<0.01);正常黏膜中(23.1%)及结直肠癌组织(61.5%)间蛋白表达差异显著(P<0.01)。MGMT蛋白表达在结直肠癌中与患者的性别(P<0.05)和肿瘤组织学分级(P<0.05)相关,TS蛋白与患者的年龄(P<0.05)和性别(P<0.05)相关。在结直肠腺癌中MGMT和TS蛋白表达存在相关性(P<0.05)。结论MGMT和TS蛋白表达增高在结直肠腺癌发生、发展过程中发挥重要作用。同时检测结直肠腺癌中MGMT和TS蛋白表达水平对预测肿瘤的生物学行为和以5-FU为基础的化疗方案的疗效可能具有应用价值。

Gal-3和MUC1蛋白在结直肠癌中的表达及与预后的关系

目的检测MUC1和Gal-3蛋白在结直肠癌中的表达,探讨与结直肠癌临床病理特征及预后的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测MUC1和Gal-3蛋白在81例结直肠癌组织中的表达,另取癌旁正常组织20例及结直肠腺瘤组织20例作为对照组,并结合临床病理特征及随访资料分析临床意义。结果结直肠癌中MUC1和Gal-3蛋白的表达明显高于癌旁组织和结直肠腺瘤组织(P<0.05)。MUC1和Gal-3蛋白的表达与结直肠癌的浸润、TNM分期、淋巴结转移有关,与患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度和组织学类型均无明显关系(均P>0.05)。两者表达呈正相关(r=0.84,P<0.05);MUC1、Gal-3蛋白阳性表达的患者5年生存率低于阴性表达者(P<0.05)。结论 MUC1和Gal-3与结直肠癌的发生、发展及生存期相关,联合检测可能对结直肠癌的诊断、治疗及预后评价具有一定的临床意义。

miR-142-3p在结直肠癌组织与细胞中的表达及对细胞增殖影响研究

目的:观察微小RNA-142-3p在结直肠癌组织与细胞中的表达,及其对人结直肠癌细胞增殖的影响。方法:通过组织原位杂交的方法,检测miR142-3p在结直肠癌患者组织中的表达。通过Realtime-PCR检测结直肠癌细胞系中的miR142-3p表达。构建pSliencer 4.1-CMV-miR142-3p过表达载体,并转染结直肠癌细胞Caco2,通过Realtime PCR检测重组质粒pSilencer4.1-CMVmiR142-3p载体在结直肠癌细胞系的表达情况。通过Western Blot检测细胞周期相关蛋白CyclinD1的表达变化。结果:miR142-3p主要定位于细胞的胞浆,在癌组织和癌旁组织中miR142-3p的表达存在差异。miR142-3p结直肠癌细胞系中呈低表达。在结直肠癌细胞系中过表达miR142-3p可下调细胞周期相关蛋白CyclinD1,抑制细胞增殖。结论:miR142-3p抑制结直肠癌Caco2细胞的增殖,下调细胞周期相关蛋白CyclinD1,有望成为结直肠癌诊断和治疗的潜在靶点。

miRNA-145在结直肠癌中的作用及临床应用价值研究进展

结直肠癌是第三大肿瘤致死性疾病。微小核糖核酸(microRNA,miRNA)表达的改变在肿瘤的生长、凋亡、侵袭和转移中发挥重要作用。miRNA-145与结直肠癌关系较为密切。本文结合近年研究,从miRNA-145在结直肠癌中的表达及调控机制、抑制结直肠癌生长/侵袭/转移的作用、对结直肠癌早期诊断的价值以及在结直肠癌化疗和放化疗敏感性等方面的作用展开论述,并对其潜在临床应用价值进行分析,为miRNA-145的临床应用转化提供理论支持。

缺氧诱导因子1α和CD133预测直肠癌患者新辅助放化疗疗效的临床研究

目的:评估缺氧诱导因子1α(1IIF-1α)和CD133在接受新辅助放化疗的直肠癌患者病理缓解及预后中的意义。方法:选取2010年1月至2015年12月浙江省金华市中心医院收治的114例病理学检查结果证实为直肠癌的患者,获取放疗前后肿瘤组织标本,RT-PCR检测放化疗前后肿瘤组织HIF-1α和CD133mRNA表达,免疫组织化学方法检测放疗后肿瘤组织HIF-1α和CD133蛋白的表达。Spearman秩相关方法分析HIF-1α与CD133 mRNA表达相关性,单因素及多因素方法分析与直肠癌患者病理学缓解相关的因素,Logistic和Cox回归方法分析与患者总存活率及无病存活率相关的临床病理因素。结果:HIF-1α和CD133mRNA的表达与临床T分期、新辅助放化疗后TNM分期、病理学完全缓解、复发及转移相关,与性别、年龄、体质指数等其他临床因素无关。新辅助放化疗后,HIF-1α与CD133 mRNA表达呈显著正相关(α=0.579,P=0.000)。免疫组织化学检测显示,CD133高表达肿瘤细胞中HIF-1α也呈高表达。单因素分析发现,HIF-1α mRNA(P=0.001)和CD133mRNA表达(P=0.022)与病理学完全缓解相关;多因素分析发现,HIF-1α mRNA(P=0.012)和CD133 mRNA(P=0.047)表达是患者病理学完全缓解的独立预测因子。Cox多因素回归分析发现,HIF-1α mRNA表达(P=0.025)与CD133 mRNA表达(P=0.033)是患者无复发存活的独立预测因子,HIF-1α mRNA表达是患者总存活的独立预测因子(P=0.046)。结论:HIF-1α和CD133与接受新辅助放化疗的直肠癌患者病理学完全缓解及存活显著相关,对两者的研究可能在新辅助放化疗患者的选择及改善患者预后方面具有意义。

术前介入化疗对进展期结直肠癌FAK和α-catenin表达的影响

目的探讨术前介入化疗对进展期结直肠癌黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)和α-连接蛋白(α-catenin)表达的影响及两者与进展期结直肠癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组化方法检测34例术前介入化疗及根治手术(术前介入化疗组)的结直肠癌组织FAK和α-catenin蛋白表达水平,并与同期未行介入化疗直接根治手术(对照组)42例作比较。结果对照组FAK阳性表达率为71.4,介入化疗组阳性表达率为35.3、两组间差异有统计学意义(P<0.05)。对照组α-catenin表达率为45.2,介入化疗组阳性表达率29.4,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。FAK和α-catenin在TNM分期、浸润深度、和有无淋巴转移方面差异有统计学意义,α-catenin在肿瘤的病理组织分化程度方面差异亦有统计学意义。结论FAK和α-catenin的表达与进展期结直肠癌的侵袭转移有关,术前介入化疗可通过降低进展期结直肠癌FAK的表达,抑制术中术后肿瘤细胞的侵袭转移,但对α-catenin的表达影响无统计学意义。

分泌型卷曲相关蛋白1、β联蛋白、上皮钙黏着蛋白在结直肠癌中的表达及意义

目的：探讨Wnt信号通路抑制因子分泌型卷曲相关蛋白1（SFRP1）在结直肠癌组织中的表达，及其与β联蛋白（β—catenin）和上皮钙黏着蛋白（E-cadherin）蛋白表达的关系，并探讨其临床意义。方法：应用逆转录PCR检测60份结直肠癌及其癌旁正常黏膜中SFRP1、β—catenin和E-cadherin基因mRNA表达水平；同时应用免疫组织化学染色法（Elivision法）检测相同组织中SFRP1、β—catenin和E—cadherin蛋白的表达，并探讨其相关性及与临床病理因素的关系。结果：60份组织中，52份结直肠癌组织及其癌旁正常黏膜中RNA提取成功；SFRP1 mRNA相对表达量分别为0．4837±0．1532和0．7170±0．1830；B-catenin mRNA相对表达量分别为0．9293±0．3705和0．6469±0．3166；E—cadherin mRNA相对表达量分别为0．5556±0．2535和0．9422±0．2372，两组比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）；SFRP1 mRNA表达与肿瘤淋巴结转移有关（P〈0．05）。SFRP1蛋白在结直肠癌中的阳性表达率为31．67％（19／60），显著低于癌旁正常结直肠黏膜组织75．00％（45／60）的阳性表达率；SFRP1蛋白表达与临床病理各因素无关。β—catenin、E-cadherin在结直肠癌中的异常表达率分别为75．00％（45／60）、58．33％（35／60），显著高于癌旁正常结直肠黏膜组织1．67％（1／60）、6．67％（4／60）的异常表达率；β—catenin和E—cadherin异常表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移和Dukes分类有关。结直肠癌中SFRP1蛋白的表达与β—catenin和E—cadherin的异常表达呈负相关（r=-0．517，r=-0．442，均P〈0．01）。结论：结直肠癌中SFRP1的表达下调导致Wnt信号通路出现异常活化，并引起β-catenin和E-cadherin异常表达增加。提示SFRP1失活及水平下调是结直肠癌启动及促进的重要因素。

siRNA靶向抑制MACC_1对结直肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:采用小干扰RNA(siRNA)靶向抑制结直肠癌细胞中MACC_1的表达,观察其对肿瘤细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:Real time-PCR检测MACC_1在结直肠癌组织和细胞株中的表达水平;利用Lipofectmin2000将MACC_1特异性siRNA转染进入结直肠癌细胞株LoVo和SW620;利用Real time-PCR和Western blot法明确细胞中MACC_1在mRNA和蛋白水平上的表达变化;通过CCK-8法检测肿瘤细胞增殖水平的变化,并利用Transwell系统检测肿瘤细胞体外迁移和侵袭能力的变化。结果:MACC_1在结直肠癌中表达较正常肠黏膜显著升高;与阴性对照比较,MACC_1siRNA能够特异性抑制LoVo和SW620细胞中MACC_1基因的表达,并引起肿瘤细胞的增殖水平降低,迁移和侵袭能力减弱。结论:利用siRNA特异性抑制MACC_1的表达,可以降低结直肠癌细胞的增殖水平和侵袭能力。MACC_1是抗肿瘤转移治疗的重要潜在靶点。

Id-2和E-cadherin在直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨分化抑制因子‐2（Id‐2）和上皮性钙粘附素（E‐cadherin）在人直肠癌中的表达水平及其与临床病理特征的关系。方法用免疫组织化学方法观察邯郸市中心医院经手术切除的原发性直肠癌组织标本60例中Id‐2和E‐cadherin在直肠癌和直肠癌旁正常组织中的表达水平，Spearman相关检验检测Id‐2与E‐cadherin表达的相关性，分析Id‐2与E‐cadherin表达与直肠癌临床病理学指标之间的关系。结果60例直肠癌中Id‐2的阳性表达率在直肠癌旁正常黏膜组织和直肠癌组织中分别为：48．33％和71．67％，E‐cad‐herin的阳性表达率分别为：71．67％和46．67％。Id‐2与E‐cadherin表达水平存在负相关性；Id‐2和E‐cad‐herin表达在直肠癌不同分化程度、TNM分期和有无淋巴结转移之间差异有统计学意义（P＜0．05）；而与年龄、性别差异无关（P＞0．05）。结论Id‐2和E‐cadherin的表达水平与直肠癌的发生、发展存在着密切的关系，直肠癌组织中Id‐2高表达可能是通过E‐cadherin途径来实现对肿瘤侵袭转移的促进作用。

Livin与EGFR、VEGF在结直肠癌中的表达及相关性研究

【目的】探讨Livin基因在结直肠癌中的表达及其与表皮生长因子受体（EGFR ）、血管内皮生长因子（VEGF）的相关性。【方法】采用免疫组织化学染色方法检测结直肠癌、大肠正常黏膜组织各50例中Livin、EG‐FR、VEGF的表达，并分析Livin表达与EGFR、VEGF的相关性。【结果】结直肠癌组织中Livin蛋白的阳性表达率明显高于大肠正常黏膜组织（ P ＜0．01）；Livin蛋白阳性表达率与淋巴结转移及Duke分期有关，而与结直肠癌患者的年龄、性别、分化程度无关；结直肠癌组织中 EGFR蛋白的阳性表达率明显高于正常黏膜组织（ P ＜0．01）；EGFR阳性表达率与结直肠癌中肿瘤的分化程度、Duke分期及淋巴结转移密切相关，与结直肠癌患者的年龄、性别无统计学意义；大肠正常黏膜组织中VEGF的阳性表达率低于结直肠癌组织中VEGF的阳性表达率（ P ＜0．01），其差异有统计学意义，VEGF蛋白表达与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤分化程度无关，与肿瘤的Duke分期及有无淋巴结转移有关；在结直肠癌组织中Livin蛋白阳性表达与 EGFR ，VEGF蛋白阳性表达无相关性，而EGFR蛋白阳性表达与VEGF蛋白阳性表达呈正相关。【结论】Livin在结直肠癌组织中过表达，阳性表达率明显高于大肠正常黏膜组织，推测Livin促进了结直肠癌的发生、发展。EGFR、VEGF蛋白在结直肠癌组织中表达呈正相关，推测EGFR、VEGF在结直肠癌的发生发展过程中起着至关重要的作用。

结直肠癌患者血清lncRNA H19表达水平与术后化疗效果的相关性分析

【目的】探讨结直肠癌患者血清长链非编码RNA(lncRNA)H19表达水平与其预后的相关性。【方法】选取2013年1月至2015年12月于本院行根治术+辅助化疗的86例结直肠癌患者为研究对象(观察组),选取同期于本院健康体检的90例志愿者对照组。采用qRT-PCR检测两组血清lncRNA H19表达水平,分析观察组患者血清lncRNA H19表达水平与化疗后效果的相关性。【结果】qRT-PCR结果显示,观察组术前血清lncRNA H19水平为(1.63±0.35)显著高于对照组(1.00±0.11),差异具有统计学意义(t=16.259,P<0.01)。以观察组血清lncRNA H19表达水平的中位数2.03为临界值.将患者分为高表达组和低表达组,两组各43例。高表达组肿瘤最大径、低分化、淋巴结转移、侵及浆膜、Ⅲ-Ⅳ期的比例、术前CEA水平显著高于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。高表达组和低表达组化疗后胃肠道不适、骨髓抑制、肝肾功能损伤、神经毒性、黏膜炎发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。高表达组患者中位总生存时间(OS)、无进展生存期(PFS)分别为33.6个月、22.9个月显著低于低表达组的55.8个月、43.3个月,差异均有统计学意义(P<0.05)。【结论】结直肠癌患者的血清lncRNAH19水平高表达者的生存状况较差,术后化疗的敏感性更低.但与化疗耐受性未见明显相关性。

miR494对结直肠癌细胞迁移能力的影响及其分子机制

目的探究miR494对结直肠癌细胞迁移能力的影响及其分子机制。方法采用慢病毒包装系统建立miR494-Lovo细胞株(转染miR494前体载体)和NC-Lovo细胞株(转染对照载体)。采用定量RT-PCR检测转染率和上皮间质转化标志物E-cadherin、N-cadherin、matrix metallopeptidase 2(MMP2)、MMP9、vimentin和snail表达情况。通过transwell和划痕实验检测细胞迁移能力。结果与NC-Lovo细胞比较,miR494-Lovo细胞中miR494高表达(P<0.05)。与NC-Lovo细胞比较,转染24 h后,miR494-Lovo细胞的迁移能力增强(P<0.05)。转染48 h后,miR494-Lovo细胞E-cadherin表达升高,N-cadherin、MMP2、MMP9、vimentin和snail表达下降(均P<0.05)。结论miR494促进结直肠癌细胞迁移能力,并可能与EMT发生有关。

HR-8348直肠癌细胞系自分泌现象的初步观察

肿瘤细胞的自主性生长一般被认为与其自分泌现象有关。本研究利用HR-8348细胞系的培养上清经离心、透析、浓缩等步骤,制成肠癌细胞条件培养基(CM),并对CM与不同浓度小牛血清(NCS)的生长支持作用作比较。结果发现,CM对HR-8348细胞有一定的生长支持和促进作用,可明显促进其DNA合成,但其促贴壁效应较NCS为差。作者认为,HR-8348直肠癌细胞系具有一定的自分泌能力,其自分泌的生长因子为一种透析不能除去的大分子物质,但其性质及生物学效应尚需进一步研究。

端粒酶在膀胱肿瘤中活性表达及临床意义

目的:探讨端粒酶在膀胱癌中活性表达及其与膀胱肿瘤临床生物学行为的关系。方法:利用TRAP银染法对32例膀胱癌组织和10例正常膀胱粘膜端粒酶活性进行检测,并结合临床资料分析。结果:32例膀胱肿瘤中有26例表达阳性(81.25%),而10例正常膀胱组织均无端粒酶表达。差异有显著性(χ2=18.018,P<0.05)。G 1级肿瘤阳性结果为7/11,G 2级为12/13,G 3级为7/8;T a^T 1期阳性者为15/20,T 2~T 4期为11/12,统计学分析证实与分期分级不相关。结论端粒酶活性表达与膀胱肿瘤的发生有关,是一个重要的肿瘤标记物。

转录调节因子Ets-1在结直肠癌组织中的表达

目的:研究Ets-1在结直肠组织中的表达,探讨其与结直肠癌发生和发展的关系。方法:采用免疫组织化学S-P法,检测Ets-1在80例病理活检和手术切除结直肠癌标本中的表达。结果:Ets-1蛋白在结直肠癌组织中的表达明显高于其正常黏膜组织(P<0.05),在癌深度浸润组的表达明显高于浅度浸润组(P<0.05),而与肿瘤的分化程度和淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:Ets-1蛋白的高表达可能与结直肠癌的癌变及浸润的发生有关。

结直肠癌中VEGF-C与TAM表达及临床意义

目的:探讨结直肠癌组织中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的表达与肿瘤相关巨噬细胞(TAM)定量的关系及在淋巴结转移过程中的作用和可能机制。方法:采用免疫组织化学SP法检测50例结直肠癌组织及正常黏膜组织中VEGF-C蛋白的表达,并在光镜下进行巨噬细胞计数。结果:在结直肠癌组织中,VEGF-C阳性表达率为62%(31/50),显著高于正常肠黏膜的表达(P<0.01);TAM计数平均为(29.42±6.11)个/HP,显著高于正常肠黏膜(P<0.01)。结直肠癌VEGF-C的表达和TAM计数均与淋巴结转移密切相关(P<0.01),与Dukes分期显著相关(P<0.01),而与病理分级无关(P>0.05)。VEGF-C的表达和TAM计数呈正相关(rs=0.83,P<0.05)。结论:在结直肠癌组织中VEGF-C的表达和TAM浸润有关,两者在淋巴结转移中有协同作用,联合检测VEGF-C及TAM为评估结直肠癌预后提供了重要的参考指标。

Skp2与其底物CDKN1B(p27)在结直肠癌中的作用

结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是全球高发恶性肿瘤之一,居癌症患者致死第4位。对结直肠癌的发生、发展中的信号通路和与之相关的细胞因子的相关研究较多。S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)的过表达在结直肠癌的发生与发展的过程中扮演至关重要的角色。F-box蛋白Skp2是Skp1-Cullin 1-F-box(SCF)泛素连接酶(E3)复合物的组成元件,具有调节细胞增殖的作用,同时能通过调控多种细胞周期的泛素化和26S蛋白酶体降解来调控肿瘤细胞的进展与转移。Skp2与其蛋白基质细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B(cyclin-dependent kinase inhibitor 1B,CDKN1B),也被称为p27kip1间通过SCF-Skp2复合体和细胞周期蛋白依赖性激酶亚基1(cyclin-dependent kinase subunit 1,Cks1)辅因子的激活而进行有效的链接。Skp2的过表达、Cks1和CDKN1B(p27)表达的变化对结直肠癌的发生、发展起到重要的作用,三者可能是结直肠癌独立的预后指标。Skp2可能是结直肠癌治疗中有前景的靶标,其抑制剂的研发对结直肠癌的治疗起关键性作用。本文将对Skp2与其泛素-蛋白酶体途径在结直肠癌中的作用进行综述。