副溶血性弧菌溶血相关毒素基因原核融合表达载体的构建

目的:实现副溶血性弧菌溶血相关毒素TRH基因在大肠杆菌中的融合表达,以获得纯度较高的蛋白产物。方法:构建trh基因的原核融合表达系统PRⅡ(trh/pGEX—3X/DE3),并在31℃条件下,用0.6mmol/L IPTG诱导表达。用SDS-PAGE分析蛋白表达。结果:PRⅡ在上述条件下诱导后,目的蛋白呈高效、可溶、融合性表达。薄层扫描显示,细菌的周质腔中的蛋白量最高,SDS-PAGE表明,融合蛋白的相对分子量(Mr)为49Kda,与预期结果一致。结论:trh基因在原核融合表达系统pGEX-3X/DE3中获得成功表达,为基因工程大规模制备高纯度TRH抗原、构建基因工程菌苗、阐明该菌的致病机制奠定了基础。

核糖体灭活蛋白及相关毒素的生物学活性研究进展

核糖体灭活蛋白及相关毒素的生物学活性研究进展奚正德综述马宝骊审阅（上海第二医科大学免疫学教研室，上海市免疫学研究所基础免疫一室２０００２５）核糖体灭活蛋白（ｒｉｂｏｓｏｍｅ－ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＲＩＰｓ）是一类能抑制蛋白质生物合...

副溶血性弧菌直接溶血相关毒素蛋白的纯化及性质初探

目的 纯化副溶血性弧菌直接溶血相关毒素 (TRH)蛋白 ,鉴定表达产物的生物学活性和免疫原性 ,为构建副溶血性弧菌快速检测方法奠定物质基础。方法 构建trh基因的原核融合表达系统PRⅡ (trh/pGEX 3X/DE3) ,在 31℃条件下 0 6mmol/LIPTG诱导表达。用SDS PAGE分析蛋白表达 ,溶血试验检测表达蛋白的溶血活性。将表达产物皮下注射免疫兔 ,溶血抑制实验检测该抗体体外对TRH溶血活性的抑制作用。结果 PRⅡ在上述条件下诱导后 ,TRH呈可溶性、融合性表达。溶血试验表明 ,表达的蛋白具有溶血活性。用表达的蛋白免疫兔产生的相应抗体 ,在体外具有抑制TRH溶血活性的作用。结论 trh基因在原核融合表达系统pGEX 3X/DE3中获得成功表达 ,并得到纯度较高的TRH蛋白 ,为基因工程大规模制备高纯度TRH抗原、制备抗TRH的多克隆和 (或 )单克隆抗体、构建基因工程菌苗。

Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物1在肺部疾病中作用及机制的研究进展

Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,RAC1)是Ras GTPase超家族的重要成员,在细胞的运动、增殖、黏附等方面发挥核心作用,同时还参与调节血管通透性以及细胞屏障功能。近年来,RAC1在多种肺部疾病发生、发展过程的作用逐渐受到关注,并逐渐成为肺部疾病研究的新方向。本文系统阐述了RAC1的生物学特性并总结了其在肺肿瘤、慢性阻塞性肺疾病、肺损伤和动脉型肺动脉高压中的功能及分子机制,以期为肺部疾病的治疗提供新思路。

妊娠期糖尿病孕妇幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A-IgG抗体、Omentin-1、sVCAM-1表达及与糖脂代谢和妊娠结局的关系

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)孕妇幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A-IgG抗体(Hp-CagA-IgG)、脂肪因子网膜素-1(Omentin-1)、可溶性血管内皮细胞黏附分子-1(sVCAM-1)表达及与糖脂代谢和妊娠结局的关系。方法选取2021年6月至12月在甘肃武威凉州医院就诊的GDM孕妇118例和健康孕妇118例作为研究对象,分别记为GDM组和对照组。比较两组孕妇Hp感染率,检测血清Hp-CagA-IgG抗体、Omentin-1、sVCAM-1水平,糖脂代谢相关指标[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)]水平,Pearson相关性分析CagA-IgG抗体、Omentin-1、sVCAM-1表达与糖脂代谢的关系。记录两组产妇妊娠结局,Logistic回归分析GDM孕妇CagA-IgG抗体、Omentin-1、sVCAM-1表达与妊娠结局的关系。结果GDM组孕妇Hp感染阳性率明显高于对照组(χ^(2)=11.232,P=0.001)。GDM组血清Hp-CagA-IgG抗体、sVCAM-1表达高于对照组,血清Omentin-1表达低于对照组(均P<0.001)。GDM组FPG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C高于对照组,HDL-C低于对照组(均P<0.05)。血清Hp CagA-IgG抗体、sVCAM-1与FPG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C呈正相关,与HDL-C呈负相关(均P<0.001);血清Omentin-1与FPG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C呈负相关,与HDL-C呈正相关(均P<0.001)。GDM组不良妊娠结局发生率明显高于对照组(χ^(2)=34.236,P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示血清Hp-CagA-IgG抗体、Omentin-1、sVCAM-1表达与不良妊娠结局具有显著相关性(P<0.05)。结论GDM孕妇血清Hp-CagA-IgG抗体、omentin-1、sVCAM-1表达与糖脂代谢显著相关,高水平Hp-CagA-IgG抗体和sVCAM-1表达、低水平omentin-1表达是GDM孕妇不良妊娠结局的独立危险因素。

CagA阳性幽门螺杆菌感染与中年无症状人群CIMT相关性研究

目的探讨细胞毒素相关蛋白A(cytotoxin-associated protein A,CagA)阳性Hp感染与中年无症状人群颈动脉粥样硬化(carotid atherosclerosis,CAS)的相关性。方法选取在我院就诊的CAS患者578例作为CAS组,选取无CAS患者578例作为对照组,比较2组CagA阳性Hp感染比例,并作Logistic回归分析。比较CagA阳性Hp感染患者与CagA阴性患者颈动脉内-中膜厚度(carotid intima-media thick-ness,CIMT)。结果CAS组CagA阳性Hp感染患者比例高于对照组(P<0.05)。CagA阳性Hp感染是CAS的独立危险因素(OR=1.813,95%CI:1.379~2.384,P<0.05)。CagA阳性Hp感染患者CIMT大于CagA阴性患者(t=28.046,P<0.05)。结论在中年无症状人群中,CagA阳性Hp感染是CAS的独立危险因素,CagA阳性Hp感染患者CIMT大于CagA阴性Hp感染患者。因此,CagA阳性Hp感染与CAS的发生、发展有关。

多重PCR检测霍乱弧菌的毒素相关基因

目的探索建立一种快速、敏感地检测霍乱弧菌O1群、O139群、非O1/非O139群的毒素相关基因的方法。方法针对霍乱弧菌霍乱肠毒素A亚单位基因(ctxA)、小带联结毒素基因(zot)、辅助霍乱肠毒素基因(ace)、霍乱弧菌毒素共调菌毛A基因(tcpA)、毒素表达调控蛋白基因(toxR)分别设计引物,建立多基因PCR方法;通过一次扩增反应之产物经琼脂糖凝胶电泳,可检测出菌株的毒素相关基因的携带情况。结果阳性对照菌株MO45(霍乱弧菌O139群)检出5种毒素相关基因,结果符合设计要求;其他不同来源的霍乱弧菌(O1群、O139群、非O1/非O139群)检出1～5种不等的毒素相关基因;根据毒素相关基因携带情况,可将菌株分为5个基因型,并可区分为产毒株和非产毒株;多重PCR敏感度可达102cfu/ml。结论该方法快速、特异、敏感,具有较大的应用价值。

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白与胃窦黏膜炎症程度、细菌定植密度的关系

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)细胞毒素相关蛋白(CagA)与慢性胃炎患儿胃窦黏膜炎症程度、Hp定植密度的关系。方法对79例Hp相关性慢性胃炎患儿采用免疫印迹法检测血清CagA抗体,并行胃镜检查,取胃窦黏膜经HE及改良Giemsa 染色后观察胃窦黏膜炎症程度及Hp定植密度。结果79例Hp相关性慢性胃炎患儿血清CagA抗体阳性67例(84.81%),其中胃窦黏膜轻度炎症9例(13.43%),中重度炎症58例(86.57%),而12例血清CagA抗体阴性患儿胃窦黏膜轻度炎症7例(58 33%),中重度炎症5例(41 67%),两者差异有显著性(x2=10.076 P=0.002),而两组胃窦黏膜Hp定植密度无明显差异(H=0.246 P-0 884)。结论CagA与慢性胃炎患儿胃窦黏膜炎症程度有关.而与Hp在胃窦部的定植密度无关,CagA 阳性Hp菌株能引起胃窦黏膜较重炎症。

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白、空泡毒素基因与儿童胃十二指肠疾病的关系

目的 探讨幽门螺杆菌 (Hp)细胞毒素相关蛋白 (cagA)、空泡毒素 (vacA)与儿童胃十二指肠疾病类型及胃黏膜炎症程度的关系。方法 采用免疫印迹法测定 88例Hp相关性慢性胃炎 (CG)、4 6例Hp相关性消化性溃疡 (PU)患儿血清cagA、vacA抗体 ,并观察胃黏膜病理变化。 结果 1.CagA、vacA抗体总检出率分别为 85 .0 7%、91.0 4 % ,cagA抗体在CG与PU中检出率分别为 84 .0 9%与 86 .96 % ,两组相比无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;vacA抗体在CG与PU中检出率分别为 89.77%与 93.4 8% ,两组相比无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 2 .134例Hp感染患儿cagA、vacA抗体均阳性 (Ⅰ型菌 ) 113例 ,cagA、vacA抗体均阴性 (Ⅱ型菌 ) 11例 ,cagA、vacA抗体仅一项阳性 (中间型 ) 10例 ,各型菌株在CG、PU中的检出率无明显差异 (P均 >0 .0 5 )。 3.113例Hp Ⅰ型菌株感染引起胃黏膜中重度炎症占 88.5 0 % ,而Ⅱ型菌株、中间型菌株感染引起胃黏膜中重度炎症分别为 4 5 .4 5 %及 5 0 .0 0 % ,两组有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 CagA、vacA与CG、PU发病均有关 ,不能作为区分Hp感染致不同胃十二指肠疾病的特异性指标。本地区儿童感染的Hp主要为cagA和vacA阳性的Ⅰ型菌株 。

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A与胃癌关系的病例对照研究

目的:探讨幽门螺杆菌(Hp)细胞毒素相关蛋白A(CagA)阳性Hp感染与胃癌发病的关系。 方法:采用病例对照研究的方法,选择可能与胃癌发生有关的危险因素制定统一的调查表,胃癌组与对照组进行配比,配比比例为1:2。患者末梢血中HP-CagA抗体的检测采用斑点金免疫渗滤法。胃癌的危险因素分析采用单因素及多因素Logistic回归分析、双因素分层分析。 结果:(1)不同年龄段的胃癌患者CagA阳性Hp感染率差异较大,年龄越小感染率越高,小于50岁胃癌患者100％感染CagA阳性Hp,随着年龄增长,感染率下降,呈显著的负相关(P<0.01)。(2)CagA阳性Hp感染率在高、中、低分化腺癌中分别为8。5％,28.5％,63.0％,彼此间相比,差异有显著性(P<0.05),CagA阳性Hp感染与低分化腺癌关系最密切。(3)胃癌组与对照1组及对照2组的1:1配比的单因素Logistic回归分析中,食酸辣食物、吸烟、进食不规律、精神因素、身体状况较差、饮酒、Ⅰ级亲属共患病及CagA阳性Hp感染等因素与胃癌的发生呈正相关,其中以CagA阳性Hp感染的OR最大,关系最为密切。进食新鲜蔬菜、水果与胃癌发病呈负相关,为胃癌的保护性因素。(4)多因素Logistic回归分析中,CagA阳性Hp感染、吸烟、饮酒、进食不规律、精神因素等因素与胃癌的发生呈明显的正相关。

JAK2、ERK1干扰对幽门螺杆菌毒素相关蛋白CagA调控胃泌素基因表达的影响

目的:探讨JAK/STAT3和MAPK/ERK两条信号转导通路在分析和推断CagA调控胃泌素基因表达机制中的作用.方法:将含cagA基因的表达质粒和幽门螺杆菌(CagA阳性)株分别转染和感染胃癌细胞AGS和SGC-7901,同时用siRNA阻断jak2及erk1基因的表达,48h后通过RT-PCR、Western blot检测细胞中有无CagA蛋白表达,实时荧光定量PCR检测胃泌素的变化.结果:转染组和感染组中均检测到CagA蛋白的表达,与对照相比胃泌素mRNA在转染组分别增加了26.58倍(AGS细胞)和5.59倍(SGC-7901),在感染组分别增加1.88倍(AGS细胞)和8.59倍(SGC-7901),表达量显著增高;siRNA干扰JAK2和ERK1后胃泌素mRNA表达量降低,在转染组JAK2干扰抑制率分别为81.50%(AGS)和99.00%(SGC-7901),ERK1干扰抑制率分别75.55%(AGS)和97.00%(SCG-7901).在感染组JAK2干扰抑制率分别为55.30%(AGS)和90.00%(SGC-7901),ERK1干扰抑制率分别38.30%(AGS)和92.00%(SGC-7901).结果显示ERK/MAPK和JAK/STAT通路阻断,抑制了CagA调控的胃泌素mRNA表达.结论:CagA上调胃泌素基因的表达,siRNA干扰阻断JAK/STAT和ERK/MAPK这两个信号通路,可以抑制CagA对胃泌素mRNA表达的调控.

胶体金免疫层析法检测抗幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体

目的 建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌（ Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白 Ａ（ ＣａｇＡ） 抗体的胶体金免疫层析法（ＧＩＣＡ） ．方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记葡萄球菌Ａ 蛋白（ＳＰＡ） ，将重组的ＣａｇＡ 抗原划线固定于硝酸纤维素膜上，制成免疫层析检测试条． 血清中ＩｇＧ 与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条．结果 用ＧＩＣＡ 与ＥＬＩＳＡ 试剂盒对比检测了３２６ 份血清标本中抗ＣａｇＡ 抗体，本方法的特异性为９５－８ ％ ，敏感性为９７－３ ％ ，两法符合率为９６－６ ％ ．结论 ＧＩＣＡ 检测血清中的抗ＣａｇＡ 抗体特异性强、灵敏度高、简便快速，无需特殊仪器设备，有广泛应用价值．

细胞毒素相关蛋白基因A与胃粘膜组织恶变的研究

目的:研究细胞毒素相关蛋白基因A(cagA)阳性幽门螺杆菌(Hp)在胃粘膜组织恶性化转变中的作用。方法:以含Hp细胞毒素相关蛋白基因A的质粒(P^(MC3))为外参照品,在微孔板上对PCR扩增cagA的产物作探针杂交及辣根过氧化物酶酶促显色分析,定量榆测不同组织中cagA阳性Hp。结果:往50份Hp尿素酶B基因阳性的临床标本中检测到28份cagA亦阳性(56％),其中5份浅表性胃炎组织,12份癌前病变组织及11份胃癌组织。浅表性胃炎组织cagA阳性的Hp感染率(31％)及每毫克组织感染的平均拷贝数(12.8)均显著低于(P<0.01或P<0.05)癌前病变组织(60％;77.1)或胃癌组织(79％;57.6),二者在后两种组织间均无显著性差别(P>O.05)。结论:cagA阳性的Hp感染可能有助于胃粘膜组织的恶性化转变,这种转变与cagA阳性Hp的感染量有关。

幽门螺杆菌及其细胞毒素相关蛋白A与胃癌形成的关系及可能机制

目的通过检测慢性浅表性胃炎(CSG)、慢性萎缩性胃炎(CAG)、肠上皮化生(IM)、不典型增生(DYS)、胃癌(GC)组织幽门螺杆菌(Hp)和细胞毒素相关蛋白A(CagA)基因、P53、一氧化氮合成酶(iNOS)的表达,探讨Hp、CagA基因、P53、iN-OS与胃癌相关性及其参与胃癌形成的可能机制。方法应用快速尿素酶试验和组织切片革兰氏染色和血清HpCagA抗体检测Hp表达,用PCR检测HpCagA基因表达,用免疫组化SP法检测上述组织的突变P53蛋白、iNOS表达。结果 CSG、CAG、IM、DYS、GC组织中Hp检出率分别为46.7%、67.2%、70.0%、75.3%和53.8%,相应组织中HpCagA检出率分别为34.3%、59.0%、65.7%、69.1%和76.8%,GC组Hp感染率与DYS组相比差异显著(P<0.05),而CAG、IM、DYS组与CSG组Hp感染率相比差异显著(P<0.05)。IM、DYS、GC组CagA+株感染率则高于CSG组(P<0.01-P<0.05),GC组CagA+株感染率则高于CAG组(P<0.05)。从CSG到GC胃粘膜演变中,CagA基因阳性组中的突变P53、iNOS表达逐渐升高;除CSG外,CAG、IM、DYS、GC组CagA基因阳性组突变P53表达明显高于CagA基因阴性组突变P53表达(P<0.005-P<0.05);CSG、CAG、IM、DYS、GC组CagA基因阳性组iNOS表达均高于CagA基因阴性组iNOS表达(P<0.005-P<0.05)。结论 Hp特别是CagA基因与胃癌形成有关,Hp、CagA引起iNOS表达增高,P53基因突变,在形成胃癌中发挥作用,但P53基因突变在胃癌形成中属于较晚期事件。

颈动脉粥样硬化斑块内幽门螺杆菌-细胞毒素相关蛋白A-IgG抗体的表达与颈动脉粥样硬化性脑梗死的关系

目的探讨人颈动脉粥样硬化斑块内幽门螺杆菌-细胞毒素相关蛋白A(Hp-CagA)-IgG抗体的表达水平与颈动脉粥样硬化性脑梗死之间的关系。方法选择24例因颈动脉粥样硬化狭窄行颈动脉内膜切除术且合并Hp-CagA阳性菌株感染的患者,分为有缺血性脑卒中事件组(16例)和无缺血性脑卒中事件组(8例),采用酶联免疫吸附试验检测颈动脉粥样硬化斑块内Hp-CagA-IgG抗体浓度。结果有缺血性脑卒中事件组的颈动脉粥样硬化斑块内Hp-CagA-IgG抗体浓度显著高于无缺血性脑卒中事件组(P<0.05)。结论颈动脉粥样硬化斑块内Hp-CagA-IgG抗体表达的增高可能通过影响斑块的稳定性,导致颈动脉粥样硬化性脑梗死的发生。

细胞毒素相关蛋白A阳性的幽门螺杆菌感染与缺血性脑卒中及其亚型的关系的Meta分析

目的探讨细胞毒素相关蛋白A(CagA)阳性的幽门螺杆菌感染与缺血性脑卒中(IS)及其亚型的关系。方法检索MEDLINE、EMbase、Cochrance Collaboration database、中国期刊全文数据库及维普中文科技期刊全文数据库,纳入相关的病例-对照研究的文献。采用RevMan5.0软件进行Meta分析;同时进行文献的异质性检验、敏感性分析以及发表偏倚分析。结果共纳入8篇相关文献,其中与大动脉硬化性脑卒中(LAA)相关文献5篇。Meta分析结果显示,CagA阳性菌株感染有增加IS发病风险的趋势(OR=2.31,95%CI:1.89～2.82,P<0.01),CagA阴性菌株感染亦与IS相关(OR=0.57,95%CI:0.47～0.70,P<0.01)。进一步分析显示,CagA阳性及阴性菌株均与LAA亚型相关(OR=2.87,95%CI:2.19～3.77,P<0.01;OR=0.51,95%CI:0.39～0.67,P<0.01)。对纳入的各文献中混杂因素进一步校正后再次合并OR总效应值显示,CagA阳性菌株感染与IS及LAA仍存在相关性(OR=2.36,95%CI:1.84～3.02,P<0.01;OR=3.10,95%CI:2.29～4.19,P<0.01)。异质性检验示CagA阳性菌株与IS及其亚型的研究不存在异质性(均I2=0%)。敏感性分析示结果较稳定。漏斗图分析示存在发表偏倚。结论 CagA阳性的幽门螺杆菌感染是IS的危险因素之一,尤其是LAA亚型。

幽门螺杆菌感染患儿胃黏膜炎症程度与菌株定植密度及细胞毒素相关蛋白的关系

目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori)相关性慢性胃炎患儿胃窦黏膜炎症程度、H.pylori定植密度及其细胞毒素相关蛋白(CagA)三者之间的关系。方法:对79例H.pylori相关性慢性胃炎患儿行胃镜检查,取胃窦黏膜经HE及改良Giemsa染色后观察胃窦黏膜炎症程度及H.pylori定植密度,并采用免疫印迹法检测患儿血清CagA抗体。结果:63例胃窦黏膜中重度炎症患儿血清CagA抗体阳性58例(占92.06%),而16例胃窦黏膜轻度炎症患儿血清CagA抗体阳性9例(占56.25%),两者差异有显著性(χc2=10.076,P=0.002),而两组患儿胃窦黏膜H.pylori定植密度无明显差异(rs=0.097,P=0.394);胃窦黏膜不同H.pylori定植密度患儿血清CagA抗体检出率无明显差异(H=0.246,P=0.884)。结论:H.pylori相关性慢性胃炎患儿胃窦黏膜炎症程度与CagA有关,而与H.pylori在胃窦部的定植密度无相关,CagA阳性的H.pylori菌株能引起胃窦黏膜较重的炎症;H.pylori在胃窦部的定植密度与CagA无相关。

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A与脑梗死发生的关系

目的 :探讨幽门螺杆菌 (HP)及幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白 A(Cag A)与脑梗死发生的关系。方法 :用酶联免疫法 (EL ISA)和斑点金渗滤试验 (DIGFA)对 83例连续住院的脑梗死患者血清中幽门螺杆菌 Ig G抗体 (HP- Ig G)和幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白 AIg G抗体 (HP- Cag- Ig G)进行测定并设对照组比较。结果 :脑梗死组幽门螺杆菌感染率为 78.3% ,幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白 A阳性 HP感染率为 45 .8% ,而对照组分别为 5 6 .3%和 19.7% ,两组比较有显著差别。结论 :慢性 HP感染尤其是 Cag A阳性 HP菌株感染与脑梗死的发生有关 ,而且可能是脑梗死的独立危险因素。