肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体与放、化疗联合应用诱导喉癌Hep-2细胞凋亡途径研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的敏感性及其与放、化疗联用时的凋亡途径。方法采用CCK-8法检测TRAIL、顺铂、紫杉醇作用下Hep-2细胞生长抑制率;流式细胞仪检测Hep-2细胞凋亡率;Westernblot法检测Hep-2细胞内caspase蛋白表达变化。结果Hep-2细胞对TRAIL诱导的凋亡不敏感,24hIC50为596.92μg/L;顺铂、紫杉醇、放射线与TRAIL联合应用时Hep-2细胞凋亡率显著高于单药应用(P<0.05);caspase-9抑制剂Z-LETD-FMK使TRAIL、顺铂、紫杉醇对Hep-2细胞的生长抑制率显著下降(P<0.05);联合用药组caspase-8、caspase-9表达量均有显著升高(P<0.05)。结论人喉癌Hep-2细胞对TRAIL诱导的细胞凋亡不敏感,TRAIL通过内源性途径诱导Hep-2细胞凋亡;活化后的caspase-9、caspase-3通过环状反馈作用激活caspase-8,增强了Hep-2细胞对TRAIL的敏感性,是联合用药对Hep-2细胞发挥协同效应的机制之一。

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体与肿瘤治疗的关系进展

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)能选择性诱导肿瘤细胞和转化细胞凋亡,对机体正常组织细胞无毒副作用,有望成为新型的抗肿瘤制剂。探讨TRAIL的生物学特点及其对肿瘤的治疗策略,能够为其临床应用于肿瘤治疗提供理论基础。

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体在前列腺癌中的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)在前列腺癌发病机制中的作用。方法取石蜡包埋的前列腺癌组织(前列腺癌组)和良性前列腺增生组织(良性前列腺增生组)各50例,免疫组化法测定两组组织中TRAIL蛋白的表达。结果前列腺癌组TRAIL蛋白的阳性表达率和阳性表达强度均显著高于良性前列腺增生组(依次为:86.00%vs 66.00%;0.180±0.043 vs 0.128±0.021 OD值)(P<0.05或P<0.01)。前列腺癌组TRAIL蛋白的阳性表达率和阳性表达强度分别在Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期之间、伴有和不伴有骨/淋巴结转移之间差异均无统计学意义(依次为:88.89%vs 84.38%,0.181±0.051 vs 0.179±0.029;89.47%vs 75.00%,0.182±0.044 vs 0.181±0.036)(均P>0.05)。结论 TRAIL在前列腺癌组织中表达增强,但与TMN分期、骨/淋巴结转移无关,增强表达的TRAIL可能与前列腺组织的恶化有关。

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体及其受体与宫颈癌的关系

宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,其发生率呈明显上升且年轻化的趋势。目前,除传统手术及放化疗方式治疗恶性肿瘤外,肿瘤生物学治疗方法的地位逐渐提高。肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)是近年新发现的肿瘤坏死因子超家族成员之一,与细胞膜表面的特异性受体结合,通过活化天冬氨酸蛋白水解酶或线粒体依赖途径选择性地诱导肿瘤细胞凋亡而正常细胞可凋亡逃逸,这种性质使其被认为是肿瘤治疗中极有潜力的靶向治疗因子,具有十分重要的临床价值。研究发现,TRAIL及其受体在宫颈癌组织中存在异常表达,并成为近年研究的热点。综述TRAIL及其受体的结构、生物学功能,在宫颈癌上皮细胞中的表达情况及其在宫颈癌中的研究进展。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因多态性与糖尿病型牙周炎易感性的关系探讨

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-associated apoptosis-inducing ligand,TRAIL基因多态性与糖尿病型牙周炎易感性的相关性。方法:选择2022年9月—2023年9月收治的150例2型糖尿病患者作为研究对象,根据患者是否合并牙周炎分为合并组(n=50)、非合并组(n=50)和对照组(n=50)。收集患者临床病历资料,检测TRAIL G1525A与C1595T基因多态性,分析2型糖尿病型牙周炎的影响因素。采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析。结果:合并组和非合并组空腹血糖(FBG)、附着丧失(AL)、龈沟出血指数(SBI)和血钙显著低于对照组,糖化血红蛋白(HbA1c)和血清碱性磷酸酶(ALP)显著高于对照组(P<0.05)。合并组TRAIL G1525A基因中GG基因频率显著高于非合并组和对照组(P<0.05)。3组TRAIL C1595T各基因型分布相比,差异无统计学意义(P>0.05)。HbA1c、AL、SBI、ALP和TRAIL G1525A多态性是牙周炎的危险因素(P<0.05)。TRAIL G1525ALeuGG位点在中重度与轻度牙周炎患者中的分布相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TRAIL G1525A基因与糖尿病型牙周炎的易感性相关,GG基因型的2型糖尿病患者患牙周炎风险较高。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与肿瘤放射治疗

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)或称凋亡素2配体(Apo2L),是肿瘤坏死因子(TNF)超家族中的新成员,通过与受体结合而选择性地诱导肿瘤细胞、转化细胞及病毒感染的细胞发生程序性死亡。TRAIL在选择性地诱导肿瘤细胞凋亡同时对正常组织细胞无毒副作用。研究发现,联合药物治疗或者放射治疗可以增强TRAIL对肿瘤细胞诱导凋亡的敏感性,因此目前受到国内外学者的普遍关注。本文以TRAIL与放射治疗的联合应用为切入点进行论述,以期理解其在肿瘤放射治疗中的作用。

血浆肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体水平对脓毒症28天死亡的因果关系:一项两样本孟德尔随机化研究

目的应用两样本孟德尔随机化(MR)法分析血浆肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)水平与脓毒症28 d死亡之间的因果关系。方法以已发表的全基因组关联分析为数据来源,从中筛选与脓毒症28 d死亡显著相关的单核苷酸多态性(SNP)作为工具变量。采用逆方差加权(IVW)法、MR-Egger分析法、加权中位数估计法和加权模式法共4种方法进行两样本MR分析,评估血浆TRAIL水平与脓毒症28 d死亡率之间的因果关系。应用“留一”法进行敏感性分析,应用Cochran Q检验进行异质性检测,应用MR-Egger截距检验分析结果的水平多效性。结果最终选取10个强工具变量进行两样本MR分析。IVW法分析结果显示,血浆TRAIL水平与脓毒症28 d死亡率之间存在因果关系[OR=1.186,95%CI(1.005~1.340),P=0.044];其他三种分析方法结果均支持血浆TRAIL水平与脓毒症28 d死亡率之间存在因果关系。敏感性分析提示MR分析结果稳健,异质性分析结果提示SNP之间不存在异质性,多效性分析结果提示工具变量不存在水平多效性(均P>0.05),漏斗图提示结果无偏倚。结论TRAIL与脓毒症28 d死亡率之间存在因果关系,血浆TRAIL水平升高可增加脓毒症28 d死亡的风险。

血清可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、半乳凝素3、摄食抑制因子-1与慢性阻塞性肺疾病合并抑郁的相关性分析

目的探讨血清中可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(s TRAIL)、半乳凝素3、摄食抑制因子-1与慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并抑郁的相关性。方法选取2019年7月至2021年5月河北北方学院附属第一医院收治的COPD急性加重期住院患者173例,其中单纯COPD组103例,COPD合并抑郁组70例,记录并比较两组临床资料及血清s TRAIL、半乳凝素3、摄食抑制因子-1水平。采用logistic回归模型分析COPD合并抑郁的影响因素,进一步绘制受试者操作特征(ROC)曲线评估预测效能。结果COPD合并抑郁组COPD评估测试评分、治疗依从性差占比、合并慢性病占比、独居占比及血清s TRAIL、半乳凝素3、摄食抑制因子-1水平均高于单纯COPD组,第1秒用力呼气量占用力肺活量百分率(FEV_(1)/FVC)、第1秒用力呼气容积占预计值百分率(FEV_(1)pred)、职工医疗保险占比均低于单纯COPD组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示,FEV_(1)/FVC、FEV_(1)pred、治疗依从性、医疗保险类型及血清s TRAIL、半乳凝素3、摄食抑制因子-1均为COPD合并抑郁的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清s TRAIL、半乳凝素3、摄食抑制因子-1三者单独及联合均对COPD合并抑郁有一定的预测价值(P<0.05)。结论COPD患者发生抑郁与多种因素有关,血清s TRAIL、半乳凝素3、摄食抑制因子-1联合检测对COPD患者合并抑郁诊断有一定价值。

全反式维A酸可促进肿瘤相关诱导配体对多种胰腺癌细胞的凋亡作用

目的:观察全反式维A酸(all-trans retinoic acid,ATRA)是否能促进肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis induced ligand,TRAIL)对多种胰腺癌细胞的凋亡作用。方法:将携带TRAIL基因的pCA13质粒分别转染SW1990、Patu8988和Bx-PC3等3种胰腺癌细胞,转染24 h后加入ATRA或等体积溶剂。四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞活性,流式细胞仪检测细胞的凋亡率和TRAIL受体R1、R2的表达,末端脱氧核苷酸转移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase,TdT)介导的dUTP末端标记法(TdT mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)和Hoechst双染色法、透射电镜观察细胞凋亡。结果:转染pCA13/TRAIL质粒后再加入ATRA,细胞生长活性与未加ATRA组相比抑制显著(P<0.05)。流式细胞仪检测发现加入ATRA较未加药组明显促进细胞凋亡(P<0.05)。TUNEL和Hoechst双染色法后透射电镜可观察到细胞凋亡表现。但检测TRAIL-R1、TRAIL-R2的表达发现加入ATRA与未加药组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ATRA可促进TRAIL对多种胰腺癌细胞的凋亡作用,其机制与TRAIL-R1、TRAIL-R2的上调无关。

全人源抗人肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体单克隆抗体蛋白高效表达体系的建立及其功能性分析

目的建立高效表达全人源抗人肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体（TRAIL）-R1单克隆抗体（TR1-404）蛋白体系，并评价TR1-404抗体蛋白功能特性。方法构建pcDNA3．4载体抗体质粒，转染Expi293F^TM细胞，表达抗体蛋白。收集细胞培养上清，使用ProteinA／G纯化抗体蛋白。利用双抗体夹心和间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗体蛋白浓度及特异性。流式细胞分析检测TRl_404与Hela细胞和HCT116细胞表面TRAIL-R1的结合能力。MTT法检测在不同时间点TR1-404、TRAIL及二者联合作用对Hela细胞和HCT116细胞生存和增殖的影响。Annexin V／PI双染色检测Hela细胞和HCT116细胞凋亡。结果成功构建pcDNA3．4载体抗体质粒和建立Expi293F^TM细胞蛋白高效表达系统。精制的TR1-404抗体既与重组TRAIL-R1抗原特异性结合，也能与Hela和HCT116细胞表面的TRAIL-R1结合。发现TR1-404联合TRAIL作用于Hela细胞，肿瘤细胞凋亡效果显著提高。而在HCT116细胞中，TRAIL与TR1-404的联合作用未见显著提高。结论成功建立抗体蛋白高效表达系统。TR1-404抗体特异性与TRAIL-R1抗原结合。TR1-404抗体提高TRAIL诱导的Hela细胞凋亡作用。本研究为TRAIL—R1靶向的抗肿瘤治疗研究提供新方法。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体单核苷酸多态性及其血清水平在食管癌检验中的应用

目的探讨食管癌检验中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)单核苷酸多态性及其血清水平的应用。方法回顾性选取2020年2月至2021年2月本院食管癌患者156例为观察组,健康体检人员50例为对照组。统计分析两组基因型与等位基因频率、血清TRAIL(sTRAIL)水平,并统计分析观察组不同病理分期、细胞分化程度患者的TRAIL基因型及血清sTRAIL水平。结果观察组患者基因型1525GG/1588GG/1595CC、1525GA/1588GA/1595CT的比率均高于对照组,1595AA/1588AA/1595TT的比率低于对照组(P<0.05),等位基因1525G/1588G/1595C的比率高于对照组,1525A/1588A/1595T的比率低于对照组(P<0.05),血清sTRAIL水平低于对照组(P<0.05),Ⅰ~Ⅱ期患者的血清sTRAIL水平高于Ⅲ~Ⅳ期患者(P<0.05),基因型1525GG/1588GG/1595CC、1525GA/1588GA/1595CT、1595AA/1588AA/1595TT患者的血清sTRAIL水平逐渐升高(P<0.05),但高分化、中分化、低分化患者的血清sTRAIL水平之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论食管癌检验中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体单核苷酸多态性及其血清水平具有较高的应用价值。

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体联合化疗药物治疗膀胱癌的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 (TRAIL)治疗膀胱肿瘤的作用 ,以及与化疗药物的协同作用。方法 将T2 4及 5 63 7膀胱肿瘤细胞接种至 96孔培养板后分别加入浓度为1、10、10 0 μg/L的TRAIL ,0 .1、1.0、10 .0mg/L的阿霉素 (ADM )和丝裂霉素 (MMC) ,不同浓度的TRAIL、ADM、TRAIL和MMC ,噻唑蓝比色 (MTT)法分别检测肿瘤细胞的生存率。将膀胱肿瘤细胞接种至 12孔板 ,培育 2 4h后加入不同浓度的TRAIL、ADM、MMC、TRAIL联合ADM、MMC。用流式细胞术检测不同处理组肿瘤细胞的凋亡率和死亡率。结果 10 0 μg/LTRAIL引起T2 4、5 63 7细胞的凋亡率分别为 2 0 .1%、45 .3 % ,与无药物组 1.1%、3 .5 %的凋亡率比较差异有非常显著性(P <0 .0 1)。单独运用 10mg/LMMC、ADM对T2 4、5 63 7的抑制率分别为 3 6.0 %、44 .1%、2 6.7%、3 0 .2 % ;而 10 0 μg/LTRAIL和 10mg/LMMC、ADM联合后对T2 4、5 63 7的抑制率分别达到 5 8.4%、73 .7%、90 .7%、88.2 % ,两者有明显的协同作用 (P <0 .0 5 )。结论 在体外实验中 ,TRAIL可通过诱导肿瘤细胞的凋亡而产生抗膀胱肿瘤的作用 ;TRAIL与化疗药物ADM。

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体联合长春瑞滨联合干预诱导肺癌A549细胞凋亡及其机制

目的探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）与长春瑞滨联合诱导肺癌细胞A549细胞凋亡可能的分子机制。方法利用噻唑蓝（MTT）及Western blot的方法，研究TRAIL对A549细胞增殖的抑制，以及其与死亡受体（DR）4、DR5、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-8、Caspase-3表达之间的关系。采用流式细胞术检测TRAIL联合长春瑞滨等肿瘤化疗药物对A549细胞凋亡的影响。结果TRAIL可以明显抑制肿瘤细胞A549的细胞增殖作用，提高A549细胞中DR5、Caspase-8、Caspase-3的蛋白表达水平，诱导细胞凋亡的发生。长春瑞滨在不同浓度的单药及与TRAIL联合给药的条件下，诱导的A549细胞的凋亡性分别为5．1600±0．5022、10．2600±0．4063、20．6100±1．4026；12．9200±1．0401、17．7700±0．8298、37．6700±2．0787。TRAIL联合长春瑞滨可以明显促进A549细胞的凋亡（P〈0．05）。结论TRAIL通过DR5、Caspase-8、Caspase-3信号通路诱导肺癌细胞A549发生凋亡。同时，TRAIL联合长春瑞滨可以明显提高A549细胞对药物敏感性，促进细胞凋亡的发生。

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体联合蛋白酶抑制剂MG132对人肺腺癌细胞GLC-82血小板衍生生长因子受体α-磷脂酶Cγ1-蛋白激酶Cα信号转导的研究

目的 观察肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）联合蛋白酶抑制剂MG132对人肺腺癌细胞GLC-82增殖的抑制和血小板衍生生长因子受体α（PDGFRα）-磷脂酶Cγ1（PLCγ1）-蛋白激酶Cα（PKCα）信号转导通路的影响.方法 用噻唑蓝（MTT）法检测TRAIL联合蛋白酶抑制剂MG132对GLC-82细胞生长的抑制作用;采用流式细胞仪技术检测TRAIL联合蛋白酶抑制剂MG132对GLC-82细胞凋亡的影响,采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）免疫组织化学法检测TRAIL联合蛋白酶抑制剂MG132相关蛋白PDGFRα、PLCγ1、PKCα的表达,Western blot测定TRAIL联合蛋白酶抑制剂MG132对GLC-82细胞PDGFRα、PLCγ1、PKCα蛋白表达的影响.结果 MTI法显示TRAIL联合蛋白酶抑制剂MG132作用GLC-82细胞株后,抑制率较单独应用TRAIL和MG132均显著增高,抑制率分别为（34.92±3.95）％、（33.17±1.78）％和（76.96±1.28）％（P＜0.05）;流式细胞仪细胞凋亡检测结果显示,TRAIL联合蛋白酶抑制剂MG132作用GLC-82细胞48 h后TRAIL联合蛋白酶抑制剂MG132能明显诱导GLC-82细胞凋亡（P＜0.05）,免疫组织化学检测结果显示TRAIL联合蛋白酶抑制剂MG132作用GLC-82细胞株后能使PDGFRα、PLCγ1、PKCα蛋白表达降低,Western blot结果显示TRAIL联合蛋白酶抑制剂MG132明显抑制PDGFRα、PLCγ1、PKCα蛋白的表达.结论 TRAIL联合蛋白酶抑制剂MG132对人肺腺癌GLC-82细胞的生长有明显的抑制作用,能降低GLC-82细胞PDGFRα-PLCγ1-PKCα信号通路各蛋白表达的水平,肺腺癌的发病和PDGFRα-PLCγ1-PKCα转导通路信号增强关系密切.

荷载肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体基因复制缺陷型腺病毒联合表柔比星对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响

目的观察荷载肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）基因复制缺陷型腺病毒（Ad—TRAIL）联合表柔比星（EPB）对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响。方法将T24细胞分为Ad—TRAIL联合EPB组、Ad—TRAIL组、EPB组和PBS组。干预细胞后，应用结晶紫法检测细胞毒性；Westernblot法检测TRAIL蛋白表达；细胞计数试剂盒（CCK一8）法检测细胞增殖；膜联蛋白V（An—nexinV）一异硫氰酸荧光素（FITC）和原位末端转移酶标记（TUNEL）法检测细胞凋亡。结果结晶紫结果表明Ad—TRAIL联合EPB较单一等剂量Ad—TRAIL、EPB对T24细胞毒性明显；Westernblot结果表明Ad—TRAIL联合EPB作用的T24细胞仍高效表达TRAIL；CCK一8结果表明10．0病毒滴度（MOI）的Ad．TRAIL联合2．0mg／L的EPB干预4d后细胞抑制率为（56．8±3．5）％，与单一等剂量Ad—TRAIL、EPB比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。TUNEL结果表明10．0MOI的Ad—TRAIL联合2．0mg／L的EPB干预48h后凋亡率为（56．4±3．6）％，与对应剂量的Ad—TRAIL（34．1±3．3）％、EPB（21．3±2．2）％比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；AnnexinV—FITC显示10．0MOI的Ad．TRAIL联合2．0mg／L的EPB干预48h后凋亡细胞数分别为Ad—TRAIL、EPB的2．2、2．0倍，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Ad—TRAIL联合EPB有明显的抑制T24细胞增殖和促进凋亡的作用，同时具有显著协同效果。

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体联合顺铂对荷PC-9肺癌小鼠肿瘤生长的影响

目的观察肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）联合顺铂对荷PC-9肺癌小鼠肿瘤生长的影响。 方法将60只荷PC-9肺癌肿瘤的裸鼠随机分为对照组、TRAIL组、顺铂组和联合治疗组，每组15只，TRAIL组经腹腔注射TRAIL 10 mg/kg，顺铂组经腹腔注射顺铂1.5 mg/kg，联合治疗组经腹腔分别注射TRAIL 10 mg/kg和顺铂1.5 mg/kg，对照组经腹腔注射等体积的生理盐水。所有小鼠每隔1 d给药1次，连续治疗30 d，测定每组小鼠肿瘤的生长情况和体重的变化。并采用原位缺口末端标记法（TUNEL）染色法分析4组小鼠肿瘤组织中细胞的凋亡水平。采用Western blot分析4组小鼠肿瘤组织细胞中p53、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3等凋亡相关蛋白的表达水平。 结果与对照组比较，TRAIL组、顺铂组和联合治疗组小鼠肿瘤生长受到显著抑制（P＝0.030、0.026、0.009），而联合治疗组小鼠肿瘤生长速度明显缓于TRAIL组和顺铂组（P＝0.036、0.018）。与对照组比较，顺铂组和联合治疗组小鼠体重明显下降（P＝0.030、0.038），而TRAIL组小鼠体重变化差异无统计学意义（P＝0.070）。与对照组比较，TRAIL组、顺铂组和联合治疗组小鼠肿瘤组织中细胞凋亡比例明显增加（P＝0.023、0.034、0.027）。与顺铂组比较，TRAIL组和联合治疗组小鼠肿瘤组织细胞凋亡比例明显增加（P＝0.028、0.013）。Western blot结果显示与对照组比较，TRAIL组、顺铂组和联合治疗组p53和Caspase-3表达水平明显增加，而联合治疗组增加水平更加显著（P＝0.018）。 结论TRAIL联合顺铂能显著抑制荷PC-9小鼠肿瘤的生长，这一现象是通过促进肿瘤细胞凋亡相关基因表达，进而促进肿瘤细胞凋亡来实现的。

携带肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体基因的溶瘤腺病毒联合表柔比星对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察携带肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）基因的溶瘤腺病毒（ZD55-TRAIL）联合表柔比星（EPB）对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响.方法 将转染倍数（MOI）=10.0的ZD55-TRAIL联合1 mg/L的EPB、MOI=10.0的ZD55-TRAIL、1 mg/L的EPB、MOI=10.0的ZD55-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）和磷酸盐缓冲液（PBS）分别作用于膀胱癌T24细胞.反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测TRAIL基因mRNA的表达;Western blot法检测腺病毒TRAIL蛋白的表达;细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞存活率;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）法检测细胞凋亡.结果 RT-PCR结果示：ZD55-TRAIL成功的将TRAIL基因转入到膀胱癌细胞中,并且ZD55-TRAIL联合EPB组和ZD55-TRAIL组mRNA表达差异无统计学意义（P＞0.05）.Western blot结果表明ZD55-TRAIL联合EPB作用的T24细胞能高效表达TRAIL.CCK-8法检测结果表明干预4d后,MOI=10.0的ZD55-TRAIL＋1 mg/L EPB细胞存活率为（18.44±2.38）％,与对应剂量的ZD55-TRAIL （40.75±4.12）％、EPB（53.62±1.41）％、ZD55-EGFP（61.65 ±4.53）％比较,差异有统计学意义（P＜0.01）.单独使用EPB在2d要达到与联合治疗（MOI=10.0的ZD55-TRAIL＋1 mg/L EPB）相同的效果,其浓度需达到2 mg/L;在3d则需更高的浓度4 mg/L.细胞凋亡检测结果ZD55-TRAIL联合EPB组晚期凋亡细胞数目分别为ZD55-TRAIL、EPB、ZD55-EGFP的2.01、2.21、2.95倍,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 携带TRAIL基因的溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL联合化疗药物EPB对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡有协同作用.

乙醛脱氢酶1和肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体在膀胱癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨乙醛脱氢酶1(ALDH-1)和肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)在膀胱癌组织中的表达及其临床意义。方法:选取2015年3月到2018年1月在河北北方学院附属第一医院进行治疗的膀胱癌患者70例,收集其手术切除的癌组织和癌旁正常组织,采用免疫组化法检测癌组织和癌旁正常组织中ALDH-1、TRAIL表达情况,分析ALDH-1、TRAIL的表达与膀胱癌患者的临床病理特征的关系及癌组织中ALDH-1、TRAIL表达的相关性。结果:癌组织中的ALDH-1的阳性表达率高于癌旁正常组织,TRAIL的阳性表达率低于癌旁正常组织(P<0.05)。膀胱癌患者的ALDH-1阳性表达率与年龄、性别、分化程度、肿瘤数量无关(P>0.05),临床分期为T2-T3期、有淋巴结转移的膀胱癌患者ALDH-1阳性表达率高于临床分期为Ta-T1期、无淋巴结转移的膀胱癌患者(P<0.05)。膀胱癌患者的TRAIL阳性表达率与年龄、性别、临床分期、淋巴结转移、肿瘤数量无关(P>0.05),高分化的膀胱癌患者TRAIL阳性表达率高于中低分化的膀胱癌患者(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,癌组织中ALDH-1、TRAIL表达无明显的相关性(P>0.05)。结论:膀胱癌组织中ALDH-1的表达偏高且与临床分期和淋巴结转移有关,TRAIL的表达偏低且与分化程度有关,但ALDH-1和TRAIL之间无相关性,需进一步探讨与研究。

吉非替尼与TRAIL协同诱导A549人肺腺癌细胞系凋亡的作用研究

目的:本论文旨在探讨吉非替尼与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL (TNF-Related Apoptosis Inducing Ligand)的协同抗人肺癌作用并阐明两者协同的机制。方法:实验采用人A549肺癌细胞。实验分为对照组、吉非替尼处理组、TRAIL处理组及吉非替尼和TRAIL共同处理组。分别采用MTT实验,流式细胞术,Western-blot检测吉非替尼和TRAIL对A549细胞的存活、凋亡以及凋亡相关蛋白等方面的影响。结果:吉非替尼和TRAIL共同处理组的细胞存活率相较于空白对照组和各单独处理组均有显著变化。流式细胞术检测结果显示:对照组诱导的A549细胞凋亡比率分别为2.7%,15 μM吉非替尼单独处理组诱导的凋亡率为8.5%,100 ng/ml TRAIL单独处理组诱导的凋亡率为17.5%,而两者共同处理组诱导的凋亡比例为69.8%。相较与对照组或各单独处理组都有显著升高(P < 0.01)。Western-blot实验结果表明:吉非替尼和TRAIL显著诱导凋亡相关蛋白的水解。结论:吉非替尼和TRAIL可协同抑制肺癌细胞存活,促进细胞凋亡。

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体及其I型受体单克隆抗体联合体内外抗肿瘤作用

目的建立高效表达肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（tumor necrosis factor related apoptosis—inducing ligand，TRAIL）单克隆抗体和TRAIL蛋白的方法，并验证抗体TR1-419与TRAIL的体内外联合抗肿瘤作用。方法利用Expi293蛋白表达系统表达抗体，采用ProteinG进行抗体蛋白的纯化。利用原核表达系统表达SUMO-Strep—TRAIL蛋白并通过N^2＋“柱及Strep两步亲和层析获得高纯度的TRAIL蛋白。流式细胞术检测抗体与肿瘤细胞表面TRAIL—R1的特异性结合能力。采用MTT法验证制备的TRAIL联合TR1-419单抗蛋白对肿瘤细胞的杀伤活性。通过Western blot初步检测TRAIL联合TR1-419抗体体外杀伤肿瘤的机制。建立裸鼠肿瘤模型，验证TRAIL联合TR1-419体内抗肿瘤作用。结果成功建立了Expi293抗体蛋白高效表达系统及TRAIL蛋白原核表达系统。TR1-419单抗特异性结合表达TRAIL—R1的HeLa细胞；TRAIL显示抗肿瘤作用。TRAIL联合TR1-419作用于HeLa细胞，明显提高TRAIL杀伤肿瘤细胞的活性，同时激活Caspase8，启动凋亡信号转导通路。体内实验证明了TR1-419可增强TRAIL的抑制肿瘤生长作用。结论通过建立高效表达方法制备TR1-419抗体及TRAIL蛋白，并验证TR1-419可通过活化Caspase-8提高TRAIL在体内外抗肿瘤作用，为抗肿瘤免疫治疗提供新策略。