泛素E3连接酶膜相关锌指蛋白2高表达与胃癌临床分期、侵袭性及预后的相关性

目的研究泛素E3连接酶膜相关锌指蛋白2(MARCH2)高表达与胃癌分期、侵袭及预后之间的关系。方法将96例行胃癌根治术的胃癌患者纳为研究对象,免疫组织化学法检测患者胃癌组织及癌旁组织内MARCH2表达情况,分析MARCH2阳性表达与患者临床病理特征之间的关系。术后随访5~47个月,采用Kaplan-Meier法分析胃癌组织内MARCH2表达情况与患者生存时间的关系。结果胃癌组织内MARCH2阳性表达率高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织内MARCH2阳性表达与胃癌浸润深度以及淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期以及分化程度无关(P>0.05)。将胃癌组织内MARCH2中、强阳性表达者纳为MARCH2强阳性表达组,其余患者纳为对照组,随访5~47个月,平均(34.51±6.16)个月,绘制生存曲线发现,强阳性组患者生存时间短于对照组,差异具有统计学意义(Rank=8.923,P=0.003)。结论胃癌组织内MARCH2阳性表达率明显上升,且MARCH2阳性表达与肿瘤浸润深度及淋巴结转移间存在密切联系,MARCH2高表达者预后生存时间更短,提示MARCH2可能参与胃癌的发生及发展。

紧密连接相关蛋白Claudin-5、ZO-1在大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的表达及意义

目的通过观察大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑皮层紧密连接相关蛋白Claudin-5、ZO-1表达的变化及JNK抑制剂SP600125对其表达的影响,探讨SAH后早期脑损伤的机制。方法成年雄性SD大鼠75只,随机分成假手术组(sham组)、SAH组、SAH+DMSO组、SAH+SP600125(10 mg/kg)组和SAH+SP600125(30 mg/kg)组5组。采用血管内穿刺法建立大鼠SAH模型,在SAH后24 h时,应用电镜观察各组脑皮层微血管血脑屏障形态学变化;应用Western blot检测各组中脑皮层Claudin-5、ZO-1表达的变化。结果 SAH后早期脑皮层微血管发生明显损伤改变;与sham组相比,SAH组出血后24 h Claudin-5、ZO-1的表达水平明显降低(P<0.05),c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125明显改善了脑皮层微血管形态学损伤程度,并抑制了Claudin-5、ZO-1表达水平的降低。结论大鼠SAH后早期血脑屏障结构破坏是早期脑损伤关键性机制之一;SP600125可能通过抑制细胞凋亡、保护血脑屏障发挥SAH早期脑损伤的神经保护作用。

黄芪对创伤性脑损伤大鼠脑紧密连接相关蛋白表达及血脑屏障通透性的影响

目的探讨黄芪对创伤性脑损伤后紧密连接相关蛋白(claudin-5)表达和血脑屏障通透性的影响。方法 70只SD大鼠按随机数字表法分为对照组和黄芪组各35只,两组各30只采用自由落体致伤原理造模成功。黄芪组在制作大鼠脑损伤模型前7 d至处死时,每隔12 h腹腔注射黄芪,对照组用等量生理盐水腹腔注射。两组分别于大鼠脑损伤模型制成后6 h、1 d、3 d、5 d、7 d各取2只大鼠,用Western Blot法测定脑组织claudin-5的表达,采用伊文蓝(EB)法测定血脑屏障通透性。结果脑损伤后各个时间点黄芪组脑组织claudin-5蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05),脑组织EB含量均明显低于对照组(P<0.05)。结论调节claudin-5的表达,进而调节血脑屏障的通透性可能是黄芪抑制脑水肿形成的机制。

续命汤对局灶性脑缺血中风大鼠紧密连接相关蛋白(Zo-1)和水通道蛋白4 (AQP4) mRNA表达的影响

目的:观察续命汤对局灶性脑缺血中风大鼠紧密连接相关蛋白(Zo-1)和水通道蛋白4(AQP4)mRNA表达的影响。方法:将清洁级SD大鼠分为分假手术组、模型组、尼莫地平组、续命汤低剂量组、中剂量组、高剂量组6组,通过栓线法制备局灶性脑缺血中风大鼠模型,观察并记录SD大鼠造模后神经功能评分、免疫组化法检测脑缺血大鼠脑组织紧密连接相关蛋白(Zo-1)和水通道蛋白4(AQP4)mRNA表达。结果:造模后大鼠神经行为学评分显著升高,Zo-1蛋白阳性表达降低,AQP4 mRNA的表达增加,续命汤各治疗组能拮抗以上作用,以续命汤中、高剂量组为显著,其疗效优于或与尼莫地平组相当。结论:续命汤能减少Zo-1蛋白的损失,维持紧密连接复合体结构的完整性,抑制AQP4 mRNA的过度释放与表达,减轻脑缺血和水肿,进而实现保护血脑屏障的作用。

RhoA参与缓激肽调节紧密连接相关蛋白occludin分布和表达的作用

目的探讨RhoA参与缓激肽(BK)调节紧密连接相关蛋白occ lud in分布和表达的作用。方法参考文献分离培养大鼠脑微血管内皮细胞(RBMECs),建立体外血肿瘤屏障(BTB)。应用RhoA选择性抑制剂C3胞外酶抑制大鼠RhoA活性后,检测其跨内皮细胞电阻抗(TEER),分析BTB通透性变化;W estern-b lot法检测RBMECs膜上的occ lud in表达;免疫荧光法观察occ lud in分布和表达改变。结果 C3胞外酶能阻断BK诱导的TEER降低;明显抑制细胞膜上的occ lud in表达,抑制occ lud in由细胞膜向细胞质重新分布。结论 RhoA信号分子参与BK对oc-c lud in的分布和表达调节,使BTB通透性升高。

紧密连接相关蛋白对血脑屏障通透性影响的研究进展

血脑屏障作为机体中重要的组织结构,对于维持脑组织的安全及稳定具有十分重要的作用,紧密连接是血脑屏障的重要组成部分,其相关蛋白在维持紧密连接的稳定性和血脑屏障通透性方面同样至关重要。

局部亚低温对大鼠脑出血模型脑组织中紧密连接相关蛋白-5表达的影响

目的:探讨局部亚低温对大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)模型紧密连接相关蛋白-5(Claudin-5)表达的影响以及局部亚低温减轻ICH后水肿的可能机制。方法:选取雄性SD大鼠216只,采用自体血注入法制备ICH模型,并随机分为ICH组和ICH加局部亚低温(ICH+H)组。每组又分为假手术组以及ICH后6 h、12 h、24 h、3 d、7 d组共6个亚组。ICH+H组于注血后给予局部亚低温治疗。采用免疫组织化学法检测Claudin-5的表达,采用伊文思蓝法进行血脑屏障通透性的检测,采用干湿质量法进行脑组织含水量的检测。结果:ICH组大鼠血肿周围脑组织中Claudin-5表达在ICH后6 h开始减少,ICH后24 h下降最显著,ICH后7 d时仍低于假手术组(P<0.05);ICH组大鼠在ICH后6 h开始出现血脑屏障通透性及脑组织含水量增加(P<0.05),在ICH后3 d达到高峰,然后逐渐消退。ICH+H组大鼠ICH后各时间点Claudin-5表达均高于ICH组(P<0.05),而血脑屏障通透性、脑组织含水量则低于ICH组(P<0.05)。结论:局部亚低温可能通过提高Claudin-5的表达来抑制ICH后脑水肿的形成。

整合素连接激酶相关磷酸酶(ILKAP)抗体的制备及其特异性分析

以整合素连接激酶相关磷酸酶(ILKAP)全蛋白为抗原,采用腿部肌肉注射和耳缘静脉注射相结合的方法对新西兰大白兔进行免疫,共免疫6次,最终获得ILKAP抗血清.采用Protein A agrose柱纯化抗体,获得ILKAP的多克隆抗体.免疫印迹分析表明,所获得的ILKAP多克隆抗体具有较高的特异性,间接ELISA方法测定ILKAP多克隆抗体的滴度为1∶1 600.免疫荧光分析表明,所获得的ILKAP多克隆抗体在细胞水平应用效果较好.

呼吸道合胞病毒感染对气道上皮细胞表皮生长因子受体、紧密连接相关蛋白及黏蛋白表达的影响

目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染气道上皮细胞后对表皮生长因子受体(EGFR)、紧密连接相关蛋白occludin及E-cadherin、黏蛋白MUC5AC表达的影响,并探讨可能的机制。方法体外实验分两组,以人气道黏液上皮细胞NCI-H292细胞为研究对象,紫外线下灭活的RSV加入NCI-H292细胞培养基中作为对照组,迅速解冻的RSV感染NCI-H292细胞为RSV感染组。48 h后通过Western blot法检测occludin、E-cadherin、磷酸化EGFR(p-EGFR)及EGFR的蛋白表达水平;采用细胞免疫荧光技术观察两组细胞occludin、E-cadherin的分布及表达;采用RT-PCR法检测两组MUC5AC mRNA的表达。结果 RSV感染组occludin、E-cadherin的蛋白表达水平较对照组下降(P<0.05)。RSV感染组p-EGFR及EGFR蛋白的表达水平较对照组升高(P<0.05)。RSV感染组MUC5AC mRNA表达水平较对照组增加(P<0.05)。结论 RSV可破坏气道上皮细胞间的紧密连接,促进黏蛋白的分泌,影响气道的屏障功能。EGFR的磷酸化在上述过程中起重要作用。

缝隙连接及缝隙连接相关疾病研究进展

缝隙连接（gapjunction，OJ）介导的细胞间通讯是最主要、最直接的细胞间信号传导形式，可以快速、可逆地促进相邻非刺激细胞对外界信号的协同反应。c-J由相邻的两个细胞各提供一个连接子或称缝隙连接蛋白（connexin，Cx）两两对接而成，组成GJ通道的缝隙连接蛋白可以是一种，或者一种以上，通过其介导的GJ蛋白通讯（gapJunction intercellular commu—nication，GJIC）从而实现细胞间信息交流和能量传递，调控细胞的增殖、分化、代谢等过程，对维持机体的内环境稳定和生长发育具有重要意义。近年来关于（GJ与GJ相关疾病的发病机制探讨日益受到人们的重视，本文对其综述如下。

粘合连接相关蛋白1在脑胶质瘤中的研究现状及进展

粘合连接相关蛋白1(adherens junction associated protein-1,AJAP1),也称为SHREW1,最初发现是在上皮细胞粘合连接有关的一种新奇的跨膜蛋白,位于染色体1p36.32区域。大量的人类癌症病例研究证明,1p36是一个突变热点,在肿瘤发生过程中,肿瘤抑制功能的丧失与1p36区域有关。脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤,研究显示AJAP1缺失与脑胶质瘤进展有重要关系。在胶质瘤中,AJAP1能够与β-连环蛋白(β-catenin)结合,易位至细胞核内,调节基因转录,影响细胞周期、凋亡及改变细胞骨架结构和细胞极性,抑制细胞的运动及迁移。AJAP1可能是胶质瘤重要的抑制相关靶点,与胶质瘤的发生发展、增殖、凋亡、侵袭及迁移及预后密切相关,但其机制尚未明确。本文就胶质瘤中AJAP1的研究现状及进展进行综述。

基于节点连接模式相关性的链接预测方法

作为复杂网络分析中的一个研究热点,链接预测在许多领域中都有重要的应用价值,得到了广泛的关注。使用网络中的已知结构信息来计算未连接的节点对之间的相似性,进而评估其存在链接的可能性是目前最常用的方法。不同网络具有不同的结构特征,节点之间的特征对链接的形成具有重要影响。为了提高链接预测的性能,文中定义了节点的连接模式,并基于节点连接模式的相关性(Correlation of Nodes’Connecting Patterns,CNCP)设计了一个新的链接预测模型。该模型将CNCP与基本相似性指标相结合,通过综合节点的相似性与节点连接模式的相关性进行链接预测。文中将CNCP与CN(Common Neighbors),RA(Resource Allocation),AA(Adamic-Adar)及PA(Preferential Attachment)4个相似性指标相结合,提出了CNCP-CN,CNCP-RA,CNCP-AA和CNCP-PA 4个新的链接预测指标。在6个真实数据集上的实验结果表明,所提方法在AUC和Precision 2个评价标准上的性能优于对比方法。

紧密连接相关蛋白在肾癌中的表达情况及其临床意义

目的:对紧密连接相关蛋白闭锁小带蛋白-1(Zonula occluden-1,ZO-1)在肾癌中的表达情况及其临床意义进行探讨。方法:使用上海芯超生物科技有限公司肾癌芯片(HKidE150CS03)进行ZO-1表达情况检测,对ZO-1在癌与癌旁、不同分期、不同分化程度癌组织中表达水平进行对比。结果:癌与癌旁组织的ZO-1阳性表达率存在数据差异(P<0.05);从疾病分期看,Ⅰ-Ⅱ期肾癌患者的ZO-1阳性表达率较Ⅲ-Ⅳ期患者高,数据间有统计学差异存在(P<0.05);从疾病分化程度看,低分化程度肾癌患者ZO-1阳性表达率与中、高分化肾癌患者数据间未见显著统计学差异(P>0.05)。结论:ZO-1在不同肾脏组织中的表达情况各不相同,可作为肾癌分期参照指标之一,在此基础上展开疾病诊治工作,以延长患者生存期,改善预后。

应用FoxPro的SQL语言在多重数据库中进行相关范例查询

多重数据库系统的相关范例查询是进行数据处理中最常见的问题之一,有多种方法可以进行这种查询,本文介绍一种比较快捷的查询方法。

透射电镜在糖尿病大鼠肠上皮细胞连接分析中的应用

探讨透射电镜技术在糖尿病大鼠肠上皮细胞连接分析中的应用。采用高脂饮食联合链脲佐菌素(STZ)腹腔注射方法建立糖尿病大鼠模型,采用罗氏血糖仪检测大鼠尾血血糖,采用透射电镜观察大鼠回肠上皮细胞连接的病理学改变,采用免疫印迹检测大鼠回肠组织claudin、occludin、ZO-1蛋白表达水平。成功构建糖尿病大鼠模型。糖尿病大鼠肠上皮细胞间紧密连接与正常对照组比较稍感松弛,电子密度有所降低;中间连接、缝隙连接则出现缝隙异常增宽现象。与正常对照组比较,模型组细胞连接相关蛋白claudin、occludin、ZO-1表达水平显著降低。透射电镜技术可应用于糖尿病大鼠肠上皮细胞连接病理形态学分析,对糖尿病大鼠肠黏膜屏障功能评价具有重要意义。

中药清肠栓对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1、occludin的影响

目的:探讨复方中药清肠栓对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的UC大鼠结肠黏膜上皮紧密连接相关蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)的修复作用.方法:清洁级♂SD大鼠36只,随机分为正常组、模型组、SASP组、清肠栓高、中、低剂量组,每组6只.选用TNBS诱导的UC大鼠模型.采用免疫荧光的方法观察各组大鼠结肠黏膜上皮ZO-1、occludin和F-actin的表达,并运用图像分析软件进行平均光密度测定,考察了中药清肠栓对UC大鼠结肠黏膜上皮屏障的修复作用.结果:UC发病会对结肠紧密连接和细胞骨架系统造成严重的损害,模型组大鼠结肠黏膜上皮ZO-1、occludin几乎完全被破坏,不规则的分散在细胞外围,荧光染色暗淡.图像分析测其平均光密度较正常组明显降低(1.802±1.304vs3.145±0.110;0.568±0.063vs1.538±0.220,均P<0.01).清肠栓能不同程度减轻UC对紧密连接的破坏,使上述两种蛋白表达升高(P<0.01),从而保护肠道屏障功能,抑制结肠通透性的增加.结论:清肠栓能有效地调节肠黏膜屏障功能,有效抑制UC大鼠结肠通透性的升高,改善肠黏膜屏障功能,促进溃疡愈合.

川芎嗪注射液对腹膜透析大鼠腹膜功能及相关蛋白的影响

目的:研究川芎嗪注射液对腹膜透析大鼠腹膜组织结构和功能的影响及与水通道蛋白1(aquaporin-1,AQP-1)和紧密连接相关蛋白1(zonula occluden-1,ZO-1)的关系。方法:将56只SD大鼠分为7组,即正常对照组、低糖腹透液(peritoneal dialysis solution,PDS)组(1.5%PDS)、高糖腹透液组(4.25%PDS)、低糖腹透液+低浓度川芎嗪组(1.5%PDS+2‰川芎嗪注射液)、低糖腹透液+高浓度川芎嗪组(1.5%PDS+4‰川芎嗪注射液)、高糖腹透液+低浓度川芎嗪组(4.25%PDS+2‰川芎嗪注射液)、高糖腹透液+高浓度川芎嗪组(4.25%PDS+4‰川芎嗪注射液)。大鼠腹腔注射腹膜透析液8周后,检测腹透超滤量、腹膜对毒素的清除率以及腹透液漏出的蛋白含量;在光镜和电镜下观察腹膜结构变化;检测腹膜间皮细胞ZO-1和AQP-1蛋白表达。结果:与正常对照组比较,低糖PDS组和高糖PDS组大鼠腹膜结构和功能发生改变,腹膜的病理改变明显,超滤量减少(P<0.05),对肌酐清除能力下降(P<0.01),AQP-1蛋白表达增加(P<0.05),其中高糖PDS组ZO-1蛋白表达减少(P<0.05);低糖PDS+川芎嗪注射液组大鼠腹膜结构和功能较单纯腹透液组改善,表现为病理改变缓解,腹膜超滤量以及肌酐和尿素氮清除率提高。与1.5%PDS组比较,1.5%PDS+2‰川芎嗪注射液组及1.5%PDS+4‰川芎嗪注射液组腹膜AQP-1蛋白表达量减少(P<0.05)。4.25%PDS+2‰川芎嗪注射液组较高糖腹透液组ZO-1表达量显著增加(P<0.05)。结论:川芎嗪注射液可能通过下调AQP-1、促进ZO-1表达,增加腹膜超滤量,提高腹膜对毒素的清除率,拮抗腹透液对腹膜组织结构和功能的损伤。

紧密连接蛋白claudin-1及Z0-1在胰腺癌中的表达

目的:探讨紧密连接蛋白claudin-1及ZO-1在胰腺癌中的表达及在胰腺癌侵袭转移中的意义。方法:应用免疫组织化学方法检测claudin-1和ZO-1在胰腺癌不同侵袭位点(与非肿瘤胰腺组织相交界的胰腺癌侵袭前沿区、肿瘤中央区、与周围间质相交界的胰腺癌侵袭前沿区)及淋巴结转移灶和正常胰腺组织中的表达、结果:claudin-1与ZO-1蛋白正常定位于胰腺腺泡细胞和导管上皮细胞胞膜上,而在胰腺癌组织中,claudin-1与ZO-1蛋白定位从细胞膜异位至细胞浆或表达缺失,重度异位表达率分别为66.7%和69.2%。在与非肿瘤胰腺组织相交界处的胰腺癌组织中,低-未分化胰腺癌的claudin-1重度异位表达率(91.7%)明显高于高-中分化胰腺癌(55.6%,P<0.05);与周围间质相交界处的胰腺癌侵袭前沿区claudin-1重度异位表达率(89.7%)高于与非肿瘤胰腺组织相交界处的胰腺癌侵袭前沿区(66.7%,P<0.05);淋巴结转移灶重度异位表达率最高(92.3%,P<0.05)。同样与周围间质相交界处的胰腺癌侵袭前沿区ZO-1重度异位表达率(94.9%)也高于与非肿瘤胰腺组织相交界处的胰腺癌侵袭前沿区(64.2%,P<0.05),淋巴结转移灶最高(100%,P<0.05);原发胰腺癌组织各个位点中claudin-1与ZO-1表达呈正相关关系。结论:claudin-1和ZO-1异位表达对胰腺癌的发生起促进作用;clauclin-1异位表达与胰腺癌的分化有关;claudin-1和ZO-1异位表达率增加促进胰腺癌的侵袭与转移。

E6AP通过调节糖酵解促进胃癌细胞增殖和迁移的机制研究

背景肿瘤细胞的快速增殖和远处转移是胃癌患者的主要死因,探索胃癌发生发展机制、寻找新的诊断及治疗靶点具有重要意义。目的探讨E3泛素连接酶E6相关蛋白(E3 ubiquitin ligase E6-associated protein,E6AP)对胃癌细胞增殖、迁移以及有氧糖酵解能力的影响。方法免疫组化检测胃癌组织和癌旁组织中E6AP的表达情况;分析E6AP的表达与胃癌患者预后的关系;Western blot检测E6AP在胃癌细胞系及胃正常黏膜上皮细胞系中的表达情况;检测HK2、ENO1等糖酵解相关蛋白在胃癌细胞中的表达情况;采用5-Ethynyl-2’-deoxyuridine(EdU)实验和Transwell实验分别检测E6AP对胃癌细胞增殖和迁移能力的影响;用糖酵解相关检测指标反映胃癌细胞有氧糖酵解能力。结果E6AP在胃癌组织中的表达高于在癌旁组织中的表达(P<0.05)。Western blot及糖酵解相关实验结果显示,与NC-E6AP组比较,sh-E6AP组胃癌细胞乳酸水平、丙酮酸水平、ATP水平及葡萄糖摄取率均降低(P<0.05)。EdU和Transwell实验结果显示,sh-E6AP组细胞增殖和迁移能力低于NC-E6AP组细胞(P<0.05)。结论E6AP在胃癌组织中高表达。E6AP通过增强胃癌细胞有氧糖酵解水平提升其增殖和迁移能力。E6AP或可成为预测胃癌患者预后的新型分子标志物和治疗靶点。

丹黄散对糖尿病小鼠皮肤创面愈合的促进作用及调节细胞自噬机制

目的:探讨丹黄散对糖尿病小鼠溃疡创面愈合过程中自噬相关蛋白管连接蛋白轻链3(LC3)及苄氯素1(Beclin1)表达的影响。方法:18只自发2型糖尿病db/db小鼠随机分为模型组、生长因子组、丹黄散组,空白组为6只db/m小鼠,制备糖尿病创面模型后空白组、模型组仅清创,不予药物处理,生长因子组、丹黄散组清创后予以相应药物外敷,每日1次,连续干预21d。造模后第7、14、21天观察比较创面愈合情况、HE染色观察创面病理情况、透射电镜下组织线粒体与自噬小体情况、免疫组化法检测创面组织LC3/Beclin1的表达。结果:观察第7、14、21天空白组、生长因子组、丹黄散组创面愈合率均较模型组高(P<0.05);HE染色结果,丹黄散组与模型组、空白组相比较,丹黄散组新生血管和成纤维细胞增多、炎性细胞浸润较轻;透射电镜下发现,与模型组、空白组相比较,生长因子组和丹黄散组创面胞浆中出现较多自噬小体;免疫组化法检测发现空白组、生长因子组、丹黄散组小鼠创面组织LC3、Beclin1蛋白表达增强。结论:丹黄散可能通过上调组织中LC3/Beclin1表达,达到改善小鼠溃疡创面愈合效果。