妊娠合并系统性红斑狼疮患者血清miR-21的相对表达水平及临床意义

目的 探讨妊娠合并系统性红斑狼疮(pSLE)患者血清miR-21的相对表达水平及其临床意义。方法 选取2021年6月至2023年6月于四川大学华西医院诊断为pSLE的48例患者作为pSLE组,另外选取同时期于该院体检的30例健康妊娠期女性作为健康对照组,采用SLE疾病活动指数(SLEDAI),将pSLE组患者分为低活动组(SLEDAI评分为1~9分)和高活动组(SLEDAI评分>9分)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-21相对表达水平,采用红细胞沉降率(ESR)仪检测ESR,采用酶联免疫吸附试验检测血清C反应蛋白(CRP)、抗心磷脂抗体(ACA)和补体C3、C4,以及循环免疫复合物(CIC)水平。统计并比较合并与未合并器官损害pSLE患者的miR-21相对表达水平。采用Pearson相关分析pSLE患者miR-21相对表达水平与ESR、CRP及血清免疫学指标的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-21对pSLE的诊断效能。结果 pSLE组miR-21相对表达水平高于健康对照组,高活动组pSLE患者miR-21相对表达水平高于低活动组,差异均有统计学意义(P<0.05)。健康对照组、高活动组和低活动组ESR、CRP、补体C3、C4、ACA、CIC水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。高活动组和低活动组患者ESR、CRP水平显著高于健康对照组,且高活动组显著高于低活动组,差异均有统计学意义(P<0.05);高活动组和低活动组患者补体C3、C4水平低于健康对照组,且高活动组低于低活动组,差异均有统计学意义(P<0.05);高活动组患者血清ACA和CIC水平显著高于低活动组,差异均有统计学意义(P<0.05)。有肾脏和关节损害的pSLE患者的miR-21相对表达水平高于无损害患者,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,pSLE患者miR-21相对表达水平与补体C3、C4水平呈负相关(r=-0.346、-0.330,P<0.05),与血清ACA、CIC、ESR、CRP水平呈正相关(r=0.499、0.326、0.286、0.389,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-21诊断pSLE的曲线下面积为0.945(95%CI:0.902~0.989)。结论 血清miR-21对pSLE患者的疾病活动具有良好的评估作用,对pSLE的病情预测和诊断具有潜在应用价值。

乳酸菌对獭兔生长性能、肉品质及肌肉胰岛素样生长因子-1、胰岛素样生长因子1受体、生长激素受体mRNA相对表达量的影响

本试验旨在研究乳酸菌对獭兔生长性能、肉品质及肌肉胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）、生长激素受体（GHR）mRNA相对表达量的影响,探讨其对肉品质的调控作用及适宜用量。选取（43±2）日龄断奶、体重为（1.15±0.05）kg的健康白色獭兔80只,随机分为5组,每组4个重复,每个重复4只兔（公母各占1/2）。对照组喂饮生理盐水;试验组（Ⅰ～Ⅳ组）喂饮植物乳杆菌菌液,其水平分别为104、107、1010和1013CFU/mL。每隔1 d喂饮1次,每次10 mL。预试期7 d,正试期60 d。结果表明：1）与对照组相比,Ⅰ、Ⅱ组的失水率分别降低了4.49%和2.27%,差异显著（P〈0.05）。各组獭兔肌肉的pH、剪切力和肉色均无显著差异（P〉0.05）。2）Ⅱ组平均日增重显著高于对照组（P〈0.05）,料重比显著低于对照组（P〈0.05）。各组平均日采食量差异不显著（P〉0.05）。3）Ⅰ组IGF-1 mRNA相对表达量显著高于其他各组（P〈0.05）,Ⅱ组GHR mRNA相对表达量显著高于对照组（P〈0.05）。各组IGF-1R mRNA相对表达量无显著差异（P〉0.05）。由此可知,在饮水中添加乳酸菌能提高獭兔生长性能,促进肌肉IGF-1、GHR mRNA的表达,并改善肌肉的系水力。本试验条件下,乳酸菌的适宜添加水平为107CFU/mL,推荐添加水平为104～107CFU/mL。

荧光定量PCR检测干旱胁迫下长春花Crlea基因的相对表达(英文)

首次从长春花中克隆了Crlea（Crlea for Catharanthus roseus late embryogenesis abundant）的全长基因,采用荧光定量PCR方法对干旱胁迫下长春花叶片和根部Crlea基因的表达模式进行监测,结果表明,在0.5～8h的胁迫时间中,叶片和根部的Crlea基因表现出相似的积累模式.长春花Crlea基因的表达随着胁迫时间的延长而表达增强.在叶片中,在6 h和8 h的干旱处理后,Crlea基因表达显著提高,分别是未处理材料的9.984和20.431倍.在根部, 在8 h的处理后,Crlea基因的表达量显著提高（2.831倍于对照）.初步结果表明Crlea基因的表达没有组织特异性,并且为干旱胁迫正调控.

大豆叶片异黄酮含量与PAL基因相对表达量的关系

苯丙氨酸解氨酶(PAL)是苯丙氨酸代谢途径的进入点酶,也是异黄酮合成的关键酶之一。为了分析大豆叶片中异黄酮含量与苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因表达量的关系,采用砂培试验,测定了不同生育时期大豆叶片总异黄酮及大豆黄素、黄豆黄素、染料木素的含量,同时测定了相应各生育时期大豆叶片中苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因的相对表达量。结果表明:大豆叶片中大豆异黄酮总含量及3种苷元组份含量与叶片中苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因的相对表达量有一个协同增减的趋势;在初花期(R1)大豆叶片中的异黄酮总含量和三种苷元组份含量及苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因相对表达量均出现一个峰值。

蒙古绵羊输卵管上皮细胞β-防御素mRNA相对表达水平的实时荧光定量PCR检测

为了检测培养的蒙古绵羊输卵管上皮细胞内sBD-1 mRNA表达水平,运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术进行了相对定量测定。首先,建立蒙古绵羊输卵管上皮细胞培养体系作为体外试验模型,提取细胞总RNA,根据GenBank中羊β-防御素基因序列,设计合成引物,进行实时荧光定量PCR。以β-Actin基因为内参基因,对sBD-1 mRNA进行均一化处理,利用荧光阈值(Ct值)计算sBD-1 mRNA的相对表达量。经测序分析,扩增产物为β-防御素。结果显示,SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术可以测定蒙古绵羊β-防御素mRNA表达水平的相对含量。

利用实时定量RT-PCR测定肉鸡组织中CaBP基因的相对表达

试验旨在利用实时定量RT—PCR技术建立肉鸡组织钙结合蛋白（CaBP）基因相对表达量的测定方法．为进一步研究肉鸡钙吸收和利用的分子生物学机理以及骨骼的发育奠定技术基础。根据GenBank中鸡的CaBP基因序列，设计合成引物，进行SYBR Green Ⅰ实时定量RT—PCR。以管家基因B—Actin为内参基因，对组织Total RNA进行均一化处理，利用循环阈值（Ct值）的变化计算CaBP基因的相对表达量。结果表明，肉鸡十二指肠及胫骨组织CaBP基因相对表达量分别在2^7.78～2^-4.60和2^-2.46～2^-17.20范围。表明利用实时定量RT—PCR技术对肉鸡组织CaBP基因相对表达水平进行检测是可行的。

氧化鱼油对草鱼幼鱼抗氧化酶mRNA相对表达量的影响

旨在研究氧化鱼油对草鱼幼鱼抗氧化酶mRNA相对表达量的影响。以过氧化值(POV)为9.07(新鲜鱼油)、49.72、144.64、345.45 meq O_2/kg的鱼油配制4种等氮等能的草鱼配合饲料,分别为对照组、轻度氧化组、中度氧化组和重度氧化组。挑选草鱼幼鱼(30±2.68)g 204尾,随机分成4组,每组3重复,分别饲喂上述4种草鱼饲料,饲养8周:以β-actin为内参基因,采用RT-PCR法检测组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和谷胱甘肽合成连接酶催化亚基(GCLC)mRNA相对表达量。结果表明:氧化鱼油显著降低3种组织SOD mRNA表达量(9<0.05);显著降低肾脏和背肌CAT mRNA表达量(P<0.05);轻度和中度氧化鱼油组GPx mRNA表达量显著升高(P<0.05);氧化鱼油显著降低3种组织GCLC mRNA表达量(P<0.05)。氧化鱼油对草鱼幼鱼抗氧化酶mRNA相对表达量的影响具有组织差异性,鱼油氧化程度越严重,对SOD、CAT和GCLC mRNA表达的抑制作用越强。

生长激素诱导的跨膜蛋白基因(GHITM)在东方蜜蜂(Apis cerana)幼虫不同发育阶段的相对表达分析

蜜蜂社会中,工蜂与蜂王基因型相同但由于基因的表达差异、表观遗传差异及营养控制等因素造成工蜂和蜂王表型有很大的不同。GHITM基因是参与家蚕蜕皮与变态发育的pgdr基因的直系同源物,但关于其在蜜蜂中的研究目前未见报道。本研究利用实时荧光定量PCR技术研究了此基因在东方蜜蜂工蜂蛹和幼年工蜂以及蜂王蛹期的mRNA相对表达量,目的是为了探究GHITM基因在东方蜜蜂级型分化分子机理及预测可能由该基因产生的蜜蜂成虫的行为。结果表明:在工蜂蛹及工蜂成虫中GHITM基因表达量随日龄而增加;在蜂王蛹中GHITM的表达量从封盖蛹到2日龄蛹中呈下降趋势,2日龄后表达量随日龄增加。本研究结果可为东西方蜜蜂基因表达差异及级型分化分子水平的研究和GHITM基因功能的研究提供一定的理论依据。

尿毒症血液透析患者预后与甲状旁腺素相对表达量之间的相关性研究

目的探讨甲状旁腺素(PTH)的表达与尿毒症血液透析的发生发展之间的作用关系。方法纳入尿毒症维持性血液透析患者96例,采用逆转录实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)的方法对PTH的相对表达量进行检测,分析PTH的相对表达量与临床病理特征之间的相关性;应用Mann-whitney U检验法对患者PTH表达的高低与生存率之间的关系进行分析。结果 PTH相对表达量与患者的年龄、性别等并不存在相关性(P>0.05);左心室舒张期内径(LVDd)、室间隔厚度(IVST)、左心室收缩期内径(LVDs)、左室质量指数(LVMI)、水肿、摄入量、血肌酐、收缩压升高与血清PTH水平呈正相关(P<0.05);而左心射血分数(LVEF)、血红蛋白(Hb)、白蛋白(Alb)、Ca与血清PTH水平呈负相关(P<0.05)。42例PTH相对表达量明显下调的患者中并发糖尿病肾病的患者有18例(42.86%),而54例PTH高表达的患者并发糖尿病肾病仅有6例(11.11%),两组比较差异具有统计学意义,PTH表达的高低与并发糖尿病肾病着一定的相关性。结论 PTH相对表达量水平与并发糖尿病肾病及预后有相关性,PTH相对表达量作为尿毒症血液透析诊断和预后的新型标志物需要进一步的研究验证。

齐口裂腹鱼肌肉品质及其PPARγ、PGC-1α相对表达量分析

通过对不同质量的齐口裂腹鱼肌肉品质的相关指标进行分析,并采用实时荧光定量PCR技术对其组织中过氧化物酶体增殖物激活受体辅激活子1α(PGC-1α)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的相对表达量开展研究。结果表明:不同质量的齐口裂腹鱼肌肉中蛋白质、粗脂肪含量存在显著性差异(p<0.05),其水分、灰分含量差异不显著(p>0.05);肌肉的pH没有差异,大鱼的失水率高于中鱼与小鱼,小鱼与中鱼肌肉中氨基酸总量、必需氨基酸和鲜味氨基酸的含量均高于大鱼;中、小鱼的肌肉品质高于大鱼。在不同质量齐口裂腹鱼的头肾、肝脏、肌肉中,PPARγ的相对表达量均存在显著性差异(p<0.05);PGC-1α在头肾中相对表达量存在显著性差异(p<0.05),在肝脏、肌肉中差异不显著(p>0.05);PPARγ、PGC-1α在组织中的相对表达量与肌肉中粗脂肪含量有一定关联。

蒙古绵羊β-防御素基因相对表达水平实时定量PCR方法的建立

为了利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术对蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素基因表达水平进行相对定量测定,建立蒙古绵羊β-防御素基因相对表达水平的实时荧光定量PCR方法,试验根据GenBank中羊β-防御素基因序列设计合成引物,进行实时荧光定量PCR,同时以β-Actin为内参基因对β-防御素基因进行均一化处理,利用荧光阈值(C t值)计算β-防御素基因的相对表达量。结果表明:扩增产物为β-防御素;利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术可以测定蒙古绵羊β-防御素基因表达水平相对含量。

黄瓜CMV复制酶基因相对表达定量PCR方法的建立

为了对黄瓜感染CMV植株体内CMV复制酶基因表达水平进行测定,建立CMV复制酶基因的相对表达定量检测技术,并用该方法开展黄瓜植株CMV抗性鉴定试验,以18SrRNA基因为对照,CMV复制酶基因为目标基因,设计引物,探索SYBRGreen实时荧光定量PCR反应体系,同时对CMV复制酶基因进行均一化处理,利用荧光阈值(Q值)计算p-防御素基因的相对表达量。结果表明:利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术测定黄瓜CMV复制酶基因相对表达定量具有较高的准确性,耗时短,该技术可应用于CMV抗性植株的筛选。

山西地方猪种肉质相关基因相对表达量比较分析

为研究山西地方猪种的肉质相关基因表达量,选取30 kg左右的山西黑猪和晋阳白猪各30头,按品种分为山西黑猪组和晋阳白猪组,每组5个重复,每个重复6头猪,进行驱虫和健胃后,开始正式试验,饲喂相同的饲粮,猪瘟、口蹄疫、蓝耳病等免疫程序按常规进行。体重达110 kg左右时屠宰,从背最长肌取样,提取基因组,进行PCR扩增,检测钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)、猪心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、肌细胞生成素(MyoG)、ATP合成酶(ATP5B)、脂蛋白脂肪酶(LPL)、磷酸果糖激酶(PFK)、己糖激酶同工酶(HK)等7个肉质相关基因的相对表达量。结果表明,山西黑猪HK、MyoG基因的相对表达量极显著高于晋阳白猪(P<0.01);山西黑猪H-FABP、CAST基因的相对表达量显著高于晋阳白猪(P<0.05);山西黑猪ATP5B、PFK、LPL基因的相对表达量与晋阳白猪差异不显著(P>0.05)。

保山猪IGF2基因相对表达量与肉质性能的关联分析

本研究旨在探究IGF2基因在保山猪3个组织中的相对表达量对其肉质性能的影响。利用荧光定量PCR技术(RT-qPCR)检测IGF2基因在保山猪背最长肌、背脂、肝脏3个不同组织中的相对表达量,并与保山猪肉质性状进行关联分析。结果表明:IGF2基因在3个组织中的表达量为肝脏>背脂>背最长肌;IGF2基因在保山猪背最长肌中的相对表达量与肌肉化学成分中的粗灰分呈显著负相关,与肌纤维密度呈显著正相关;在背部脂肪中的相对表达量与保山猪熟肉率成显著正相关,与肌肉pH1h和pH24h均呈显著负相关;在肝脏中的相对表达量与保山猪肌肉中的色差a(红度)呈显著负相关。研究表明IGF2基因相对表达量与保山猪肉质性状存在相关关系,但能否作为调控保山猪肉质性能的关键基因还需要进一步深入研究。

蒙古马母体与胎儿胃肠道NF-κB信号通路相关基因mRNA相对表达水平研究

[目的]研究蒙古马母体与胎儿胃肠道不同区段NF-κB信号通路相关基因的mRNA相对表达水平。[方法]选取3匹体况良好的妊娠蒙古马进行屠宰,屠宰过程中取出胎儿,分别采集母体及胎儿的胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、大结肠、小结肠和直肠组织;采用实时荧光定量PCR方法(qPCR),对NF-κB信号通路上6个相关基因(NF-κB p50、NF-κB p65、NFKBIA、IL-1β、TNF-α和IL-8)的mRNA相对表达量进行分析,比较母体和胎儿胃肠道不同区段组织中各基因的表达差异。[结果]NF-κB信号通路上6个基因在蒙古马母体和胎儿胃肠道不同区段8个组织中均有表达;总体来看,NF-κB p50、NF-κB p65和NFKBIA基因的mRNA相对表达量在母体和胎儿上均较高,IL-1β、TNF-α和IL-8基因的mRNA相对表达量均较低。在胃肠道区段8个组织中,6个基因的mRNA相对表达量基本呈现母体高于胎儿的特征;在回肠和盲肠组织中,母体NF-κB p50基因的mRNA相对表达量显著(P<0.05)高于胎儿;在大结肠组织中,母体NF-κB p65基因和NFKBIA基因的mRNA相对表达量显著(P<0.05)高于胎儿。[结论]NF-κB信号通路上6个基因在蒙古马母体和胎儿胃肠道8个组织中均有表达,且存在一定差异;母体部分肠道区段组织中的NF-κB p50、NF-κB p65、NFKBIA基因mRNA相对表达量显著高于胎儿。

日粮能量类型对昆明小鼠泌乳相关酶mRNA相对表达的影响

本试验通过给予试验期昆明小鼠玉米淀粉和豆油比例不同的日粮,研究日粮能量类型对乳腺三种泌乳相关酶(脂肪酸合成酶,FAS;α-乙酰辅酶A羧化酶,α-ACC;半乳糖转移酶,GT)mRNA相对表达的影响。结果表明,日粮处理对各采样期小鼠乳腺半乳糖转移酶mRNA的相对表达均无显著影响(P>0.0 5);日粮处理对泌乳期试验小鼠1、10、20泌乳日乳腺脂肪酸合成酶相对表达影响显著(P<0.05),且以高脂肪日粮组试验小鼠乳腺脂肪酸合成酶mRNA相对表达水平最高;日粮处理显著影响分娩前一天及4泌乳日试验小鼠乳腺α-乙酰辅酶A羧化酶mRNA的相对表达(P<0.05),以高脂肪日粮处理组水平较高。

基于血清miRNA相对表达秩序关系识别乳腺癌预警标志

目的:基于血清中miRNA相对表达秩序关系识别乳腺癌预警标志。方法:以正常血清样本中miRNA相对表达秩序关系高度稳定的miRNA对为参考,筛选在乳腺癌样本中miRNA相对表达秩序关系高度逆转的基因对为候选乳腺癌预警标志,并在独立数据集中进行验证。通过miRNA靶基因数据库分析预警标志与癌症发生发展的关系。结果:基于2686例正常样本和1280例乳腺癌样本miRNA表达谱,筛选得到11对相对表达秩序关系在正常和乳腺癌样本间高度逆转的miRNA对,共涉及13个miRNA。3套独立验证集结果表明这11对预警标志对乳腺癌具有很好的预测能力,预测准确率为93%~100%。功能富集分析表明这13个miRNA的324个靶基因,主要富集到PI3K-AKT信号通路,细胞增殖、转录等与乳腺癌的发生发展相关的通路中。结论:基于血清样本内miRNA间相对表达秩序关系的预警标志,能够有效识别乳腺癌,具有高度的鲁棒性和临床转化价值。

氮处理对高粱氮代谢相关基因NR、GS、GOGAT表达的影响

为了探究不同氮处理对高粱氮代谢相关酶基因表达的影响,提高高粱氮素利用率,选择最佳施氮模式,选用2个高粱品种辽粘3号、晋杂34,设置4个氮处理水平(N0:0 kg/hm^(2),N1:60 kg/hm^(2),N2:120 kg/hm^(2),N3:180 kg/hm^(2)),用荧光定量PCR方法分别测定苗期、拔节期、抽穗期、成熟期高粱叶片、籽粒的NR、GS、GOGAT基因相对表达量,分析不同氮处理水平对氮代谢相关酶基因表达的影响。结果表明:除成熟期叶片外,各生育期辽粘3号、晋杂34叶片、籽粒在施氮条件下的NR、GS、GOGAT基因相对表达量均高于未施氮处理。随施氮量增加,高粱叶片和籽粒NR、GS、GOGAT基因相对表达量呈上调或先上调后下调的变化趋势。辽粘3号和晋杂34在N2、N3处理的NR、GS、GOGAT基因相对表达量处于较高水平。综合多方面因素考虑,可以将N2处理确定为最适施氮量。

破骨细胞分化因子和护骨素mRNA在OVX小鼠骨组织的相对表达

目的 研究破骨细胞分化因子 (ODF)和护骨素 (OPG)mRNA在OVX小鼠骨组织中的相对表达水平 ,探讨ODF和OPG在绝经后骨质疏松 (PMO)发病中的意义。 方法 将 4 0只小鼠随机分为 5组 ,第Ⅰ、Ⅴ组行假手术 ,两组小鼠分别在术后 1周和 5周处死 ;第Ⅱ、Ⅲ组行卵巢切除手术 ,分别在术后 1周和 5周处死 ;Ⅳ组行卵巢切除手术 ,术后第 2天给苯甲酸雌二醇治疗 ,5周后处死。小鼠处死后 ,提取其骨组织总RNA ,RT PCR检测ODF和OPGmRNA表达水平。 结果 去卵巢后Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组ODF与OPGmRNA比值 (分别为 1 16 78± 0 2 873、0 80 93± 0 14 14、0 6 6 4 0± 0 0 935 )显著增高 ,采用雌激素防治可使其一定程度上恢复。

大蒜热激转录因子基因AsHSFB1的克隆、亚细胞定位及其表达分析

热激转录因子(HSF)基因是植物热胁迫响应的重要转录调节基因,在植物胁迫应答和其他抗逆反应过程中起着关键作用。为研究大蒜热激反应的分子机制,本研究基于大蒜转录组数据,以徐蒜6号为试验材料,采用同源克隆方法获得编码HSF的AsHSFB1基因。序列分析结果显示,AsHSFB1含有882 bp的开放阅读框,编码293个氨基酸,其蛋白质含有热激转录因子的特征结构域。在进化关系上,AsHSFB1与拟南芥AT4G11660(AtHSFB2B)同源性最高。亚细胞定位结果表明,AsHSFB1蛋白主要定位在细胞核和细胞质上。本研究采用同源重组技术成功构建pCAMBIA1305-AsHSFB1过表达载体,为进一步研究该转录因子基因的功能,培育耐热大蒜品种奠定基础。RT-PCR分析结果表明,不同大蒜品种中,AsHSFB1基因在叶片中相对表达水平均最高,具有组织表达特异性;38℃高温胁迫处理下,徐蒜6号中的AsHSFB1基因相对表达水平在24 h时明显上调;4℃低温胁迫下,徐蒜815和徐蒜6号中AsHSFB1基因相对表达水平的变化趋势相似,均先上升后下降,在处理4 h时相对表达水平达到峰值。