盾壳霉拌种对向日葵幼苗POD PPO及SOD活性的影响

为了解盾壳霉在施用中对向日葵幼苗体内酶的影响,本试验采用紫外分光光度法,测定了盾壳霉拌种向日葵0 d、2 d、4 d、6 d、8 d和10 d后,其幼苗叶茎根中过氧化物酶(Peroxidase,POD)、多酚氧化酶(Polyphenol oxidase,PPO)和超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性的变化。结果表明:在整个测定过程中,处理根内POD活性和叶内PPO活性显著高于对照;而叶和茎内的POD活性、茎和根内PPO活性、叶内SOD活性与对照相比变化不明显。

盾壳霉控制油菜菌核病菌再侵染及其叶面存活动态的研究

本文评估了施于油菜 (Brassica napus)叶片上的盾壳霉 (Coniothyrium minitans)控制油菜菌核病菌再侵染能力 ,探讨了其作用机理 ,并测定了盾壳霉分生孢子在油菜叶面上的存活动态。结果如下 :叶面上的盾壳霉对油菜菌核病菌的初侵染影响较小 ,但在高剂量 (>10 6孢子 / ml)时可以控制病斑的扩展。所有供试剂量的盾壳霉均可不同程度地控制再侵染。盾壳霉分生孢子可在叶面病部迅速萌发 ,4 8h和 72 h时孢子萌发率分别为 51%和 95% ,而在健康叶面上 6 d未能检测到萌发的孢子。自携带盾壳霉的叶面病部不能分离到核盘菌 ,表明叶面上的盾壳霉已寄生并破坏了核盘菌再侵染菌丝。自油菜叶面上分离到的盾壳霉菌落数随时间延长而降低 ,但其分生孢子至少可以在叶面上存活 2 8d。这即表明 ,在叶面上适时适量地添加盾壳霉可以控制油菜菌核病的为害。

盾壳霉在油菜菌核病菌生物防治中的应用

油菜核病菌 (Sclerotiniasclerotiorum)是一种世界性病原菌 ,其分布广、危害大、难根治。盾壳霉 (Coniothyriumminitans)是该病原菌的破坏性寄生真菌 ,可以有效、专一地降低病原菌菌核的形成与萌发 ,在该病原菌的生物防治方面具有较大的应用潜力。从油菜核盘菌的致病过程与特点、盾壳霉的生长特性、盾壳霉和油菜核盘菌间相互作用的规律及途径等几个方面阐述了盾壳霉对油菜核盘菌的生防特性 ,讨论了盾壳霉在生产实践中的应用潜力及存在问题 。

盾壳霉对核盘菌的拮抗作用研究

系统研究了菌核重寄生菌盾壳霉对核盘菌的拮抗作用,结果表明:盾壳霉可在核盘菌菌落上寄生,使核盘菌菌丝消解、原生质泄露,并抑制菌核的形成;而且盾壳霉提前6d接种,其分泌的抗生物质还可抑制核盘菌菌丝生长,并产生明显抑菌带。盾壳霉孢子液喷雾处理也证明:盾壳霉分生孢子即可在核盘菌子囊盘(柄)上萌发、寄生,使子囊盘(柄)萎缩枯死,而且还可以在核盘菌菌落上萌发、寄生,消解破坏菌丝体、抑制的菌核形成。

盾壳霉抗菌核净菌株的诱导及其特性初步研究

为筛选可与菌核净配合防治作物菌核病的盾壳霉菌株,进行了紫外线辐射和药剂驯化试验,分别得到4个和2个盾壳霉抗菌核净突变菌株,并研究了其生物学特性.结果表明:除菌株D-1外,其余突变菌株生长速率(菌落直径57.00 ～62.75 mm,生物量6.38 ～8.63 mg/mL)均大于亲本菌株(菌落直径54.00 mm,生物量5.91 mg/mL);大部分突变菌株产孢量(对数值7.33 ～8.16)小于亲本菌株(8.40);菌核净对突变菌株的EC50值是亲本菌株的2.23 ～191.84倍;突变菌株D-3、U-6有微弱的几丁质酶活性,且除U-4外的突变菌株葡聚糖酶活性增强(亲本菌株8.96 U,突变菌株9.18 ～17.61 U).综合分析,U-6菌株既有较高的葡聚糖酶活性又有几丁质酶活性,并能保持较快的生长速率,是值得开发的优良菌株.

影响盾壳霉寄生核盘菌菌核的几个生态因子的分析

在室内测定了盾壳霉（Ｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｍｍｉｎｉｔａｎｓ）对不同寄主上的核盘菌（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）菌核的寄生致腐作用，研究了温度、含水量和土壤类型等生态因子对核盘菌菌核的寄生致腐作用的影响，通过检测土壤的呼吸速率探讨了它在土壤中定殖与核盘菌菌核的关系。结果表明：盾壳霉能寄生致腐核盘菌属所有供试菌株的菌核；寄生致腐菌核的最适温度是２０℃，最适相对含水量为５０％～６０％；盾壳霉在供试的８种土壤中均能寄生致腐菌核，对它们的ｐＨ值要求不严格，但土壤类型影响其寄生致腐速度；

草酸对重寄生真菌盾壳霉分生孢子萌发和菌丝生长的影响

本文研究了草酸对核盘菌的重寄生真菌盾壳霉 ( Coniothyrium minitans)分生孢子萌发和菌丝生长的影响。结果表明 :草酸对盾壳霉分生孢子萌发没有明显促进作用 ,在酸碱性非缓冲基质 (水琼脂 )和酸碱性缓冲基质中 ,抑制盾壳霉分生孢子萌发的最低浓度分别为 1 5 0和 70 0 μg/m L。在马铃薯葡萄糖琼脂培养基中 ,当草酸浓度为 1 0 0～ 2 0 0 0 μg/m L时 ,盾壳霉菌丝能够生长 ,且浓度为 3 0 0～ 5 0 0μg/m L的草酸对盾壳霉的菌丝生长具有明显的促进作用。在以草酸为唯一碳源的合成培养基中 ,在酸碱性非缓冲的条件下 ,当草酸浓度为 1 0 0～ 2 0 0 0 μg/m L时 ,盾壳霉菌丝能够生长 ,且草酸浓度为 5 0 0 μg/m L时对盾壳霉菌丝生长具有促进作用 ,而当草酸浓度为 2 5 0 0μg/m L时 ,盾壳霉菌丝则停止生长。在酸碱性缓冲的合成基质中 ,草酸浓度为 1 0 0～ 40 0 0 μg/m L时 ,盾壳霉菌丝能够生长 ,且草酸浓度为 1 5 0 0～ 2 5 0 0 μg/m L时对盾壳霉菌丝生长具有促进作用。在含草酸钙的混浊培养基 (以草酸为唯一碳源 )上 ,盾壳霉菌落区域形成了透明圈。上述结果说明盾壳霉能忍耐一定浓度的草酸而进行分生孢子萌发及菌丝生长 ,且这种真菌可能对草酸分子具有分解作用。

菌核寄生菌盾壳霉的研究 Ⅱ．不同菌株培养特性及寄生致腐菌核能力的比较

在ＰＤＡ平板上比较了来自我国不同地区的２４个盾壳霉菌株和１个加拿大盾壳霉菌株的培养特性，并在核盘菌菌核上接种盾壳霉孢子，测定其寄生致腐菌核的能力。结果表明：在２０℃下供试菌株平均生长速度是３．０ｍｍ／ｄ，根据菌落的基质菌丝色素、气生菌丝和产孢量等特性可把２５个菌株分成Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ３种菌落类型，各占８０％、１２％和８％；２５个菌株寄生致腐菌核能力存在显著差异，并可将它们分成强、中和弱３组，各占４０％、４８％和１２％。

杀虫剂和除草剂对生防菌盾壳霉生长的影响

本研究采用FAO推荐的菌落直径法测定了8种杀虫剂、4种除草剂、3种植物生长调节剂和1种农用抗菌素对盾壳霉菌丝的毒力。研究结果表明,杀虫剂中氯氰菊酯、阿维菌素、毒死蜱和敌敌畏对盾壳霉生长的抑制作用较大,但除敌敌畏外,其他杀虫剂EC50值均高于相应的田间最大推荐使用浓度(MRAR);辛硫磷和氧乐果对盾壳霉的抑制作用次之;而吡虫啉和灭多威则对其生长几乎没有抑制作用。4种除草剂的EC50值均明显低于相应的MRAR值,对盾壳霉生长有强的抑制作用。在正常使用浓度下植物生长调节剂萘乙酸、赤霉素、云大120对盾壳霉的生长几乎没有抑制作用。链霉素对其生长有一定影响,但EC50明显高于MRAR值。因此,在使用盾壳霉防治菌核病的田中,可以合理使用较安全的植物生长调节剂及吡虫啉和灭多威等杀虫剂,而应尽量减少和避免使用吡氟乙草灵、草甘膦、百草枯等除草剂。

除草剂精禾草克和乙草胺对油菜菌核病生防菌盾壳霉生长和寄生的影响

本文研究了油菜田间常用除草剂精禾草克和乙草胺对油菜菌核病生防菌盾壳霉Conio-thyrium minitans的影响。结果表明它们对盾壳霉菌丝生长和分生孢子萌发均有显著的抑制作用,其中精禾草克对盾壳霉菌丝生长和孢子萌发的抑制中浓度分别为2.95mg/L和7.80mg/L;乙草胺对菌丝生长和孢子萌发的抑制中浓度分别为137.45mg/L和120.90mg/L。精禾草克可以抑制盾壳霉寄生核盘菌Sclerotinia sclerotiorum菌核,当精禾草克的使用量达田间使用浓度时,盾壳霉不能寄生核盘菌菌核;而乙草胺对盾壳霉寄生菌核的影响较小,在田间使用浓度1250mg/L时,盾壳霉仍可寄生菌核;乙草胺和盾壳霉在田间使用浓度条件下混合使用,60d后菌核腐烂指数与单独使用盾壳霉没有显著差异,均大于75。上述结果表明在田间使用量条件下,乙草胺可以和盾壳霉生防制剂混用,而精禾草克不宜和盾壳霉混用。

盾壳霉固态发酵基质筛选和发酵条件优化

为了探索盾壳霉固体发酵的条件,提高其生防效果,比较了6种天然培养基对盾壳霉固体发酵的影响,测定了在不同发酵培养基、温度、初始湿度、接种比例条件下盾壳霉的产孢量。结果表明:盾壳霉在麦粒和谷粒培养基上产孢量最大;而在麸皮和棉籽培养基上生长和产孢也较好,且成本低,成为后续试验的发酵材料。在含麦麸、棉籽壳及无机盐的培养料作为基质时,采用温度为20℃,发酵料初始湿度为60%,接种比例为7%,最终孢子含量可达109个/g以上。同时对发酵的条件做了进一步优化,发现麦粒与谷粒的混合比例、光照条件、甘露糖和甘氨酸含量对盾壳霉产孢量的影响较大。

盾壳霉菌株Chy-1抗真菌物质的基本特性研究

为了明确重寄生真菌盾壳霉Coniothyrium minitans产生的抗真菌物质（antifungal substances，简称AFS）的基本特性，本文从盾壳霉MCD培养物滤液的抑菌谱、热稳定性、酸碱稳定性及紫外线照射稳定性4个方面展开研究。研究结果表明，盾壳霉 AFS对核盘菌 Sclerotinia sclerotiorum、三叶草核盘菌S. trifoliorum、小核盘菌S. minior等10种真菌菌丝生长具有较强的抑制作用。AFS具有较强的热稳定性，盾壳霉MCD培养物滤液经120℃处理30 min后，对核盘菌仍具有抑菌活性（抑菌率为49.5%）。不同环境pH对AFS的抑菌活性具有不同的影响，pH值为7，AFS对核盘菌菌丝生长抑制活性最强。此外，环境pH也影响AFS的稳定性，在较宽的pH值范围内（1～14），尤其是在酸性条件下（pH 1～6），AFS活性稳定（抑菌率为81.1%～76.4%）；AFS对紫外线照射具有一定的稳定性。盾壳霉抗真菌物质对外界环境具有很好的稳定性，这对于应用盾壳霉的抗真菌物质来防治油菜菌核病是非常有利的。

影响重寄生真菌盾壳霉几丁质酶的活性因子

盾壳霉是油菜菌核病菌(核盘菌)的一种重寄生菌,为了探索几丁质酶在盾壳霉寄生核盘菌过程中的作用,本文研究了影响盾壳霉几丁质酶活性的因子.结果表明,盾壳霉几丁质酶酶促反应的最适温度为50℃,最适pH8.0.当温度不高于50℃、pH在5.0～9.0范围内酶活性较稳定.一些金属离子,包括Mg2+、Fe2+、Ca2+、Ba2+和Mn2+等,对盾壳霉几丁质酶活性有促进作用,而另外一些金属离子,包括Zn2+和Cu2+,却对盾壳霉几丁质酶活性发挥有抑制作用.一定浓度的草酸(1～4mmolL-1)和硼酸(25～75mmolL-1)可显著提高盾壳霉几丁质酶活性.本文还就上述结果的生物学意义和潜在利用价值进行了讨论.

菌核寄生菌盾壳霉的研究 Ⅰ．生物学特性及在湖北省的自然分布

采用菌核诱捕法从源于湖北省４０个县市的土壤样品中分离及鉴定同腐烂菌核相关的真菌。结果表明：重要的菌核寄生菌盾壳霉（Ｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｍｍｉｎｉａｔｎｓ）在湖北省分布于西北及西南部高海拔山区，表现出明显的地域性。除核盘菌（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ），盾壳霉还可寄生三叶草核盘菌（Ｓ．ｔｒｉｆｏｌｉｏｒｕｍ）和小核盘菌（Ｓ．ｍｉｎｏｒ）。盾壳霉菌丝生长和分生孢子萌发的适温为２０℃，菌丝生长的最适ｐＨ值为４，光对孢子的产生具明显的促进作用。此外，分生孢子萌发需９５％以上的空气相对湿度。

盾壳霉寄生核盘菌过程中葡聚糖酶、几丁质酶及电导率的变化

为了解盾壳霉寄生核盘菌的生化机理,采用了紫外分光光度法测定了盾壳霉寄生菌核过程中,葡聚糖酶和几丁质酶的变化,并用电导率仪测定了这个过程中电导率的变化。结果表明:从被盾壳霉寄生的活菌核检测到(处理)葡聚糖酶和几丁质酶活性明显高于活菌核和被盾壳霉寄生的死菌核,其中处理的葡聚糖酶活性从15 d以后就明显高于菌核自身也高于盾壳霉本身的酶活性,处理的几丁质酶活性从10 d起就维持在较高水平,处理的电导率从10 d以后明显高于活菌核。在这个过程中这两种酶活性提高,电导率增大,膜透性增强。

盾壳霉在油菜花瓣上萌发的影响因子分析

在离体条件下分析了油菜花瓣上影响核盘菌寄生菌-盾壳霉（Coniothyriumminitans）萌发的因子。结果表明，花瓣自身物质对盾壳毒无影响，花瓣微生物区系中的细菌不利于其萌发。链霉素可以抑制花瓣上细菌增殖，促进盾壳霉萌发。100－300μg／L链霉素对盾壳霉萌发无影响，30～1000μg／L链霉素溶液配制孢子悬浮液可以促进其在油菜花瓣上萌发。

植病生防菌盾壳霉的分子生物学研究进展

盾壳霉是一种重要的核盘菌寄生菌。近年来,该菌在分子水平的研究取得了一定的进展。本文概述了盾壳霉在产孢调控、与核盘菌互作、遗传转化以及动态检测和遗传多样性等方面的研究现状,并对研究中存在的问题进行了讨论。希望在此基础上能够促进该菌分子生物学研究的不断深入,更好地开发利用该菌的基因资源。

盾壳霉产葡聚糖酶培养条件的研究

通过在SMCS培养液中加入不同的碳源、氮源,改变培养时间、温度及培养液的pH值,研究了盾壳霉产葡聚糖酶的培养条件。结果表明:盾壳霉接种在改良的SMCS液体培养基中置于恒温摇床(200 r/min,20℃)上培养15 d,可以诱导产生大量的葡聚糖酶。改良的SMCS培养液配方为:KH2PO4680 mg,K2HPO4870 mg,KCl 200 mg,NH4NO31 g,Mg-SO4.7H2O 200 mg,CaCl2200 mg,FeSO42 mg,ZnSO42 mg,MnSO42 mg,蔗糖10 g,加水1 000 mL,调pH值到6.5。

盾壳霉发酵物对向日葵的促生作用及PAL活性的变化

将盾壳霉固体发酵物分别稀释10倍、50倍和100倍对向日葵浸种,研究了其对种子萌发、根长、株高、干重和鲜重的影响;并采用紫外分光光度法测定了盾壳霉固体发酵物拌种向日葵后,苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的变化。结果表明:稀释10倍的发酵液对种子萌发和幼苗生长表现出一定的抑制作用,都明显低于对照;稀释50倍和100倍的发酵液可明显促进植株和根茎生长,增加干重和鲜重,其中以50倍液的效果最好;实验还表明稀释10倍的盾壳霉固体发酵物拌种向日葵后茎内PAL活性显著高于对照水平;叶和根内PAL活性与对照无显著差异。

盾壳霉CCTCC M203020的生长特性及其应用潜力

以油菜菌核病病株菌核为诱饵 ,从油菜地中分离筛选得到一株盾壳霉 (ConiothyriumminitansCCTCCM2 0 30 2 0 ) .以生物防治能力好的CBS 14 8.96为对照菌株 ,比较了两者在油菜叶上对油菜菌核病菌抑制作用和在土壤中对菌核的致腐能力及条件 .结果表明 :C .minitansCCTCCM2 0 30 2 0对油菜菌核病菌的抑制作用及适用的pH范围(4.0～ 7.0 )均优于CBS 14 8.96 ,适用于油菜菌核病的生物防治 .具体表现在 :(1)C .minitansCCTCCM2 0 30 2 0能够完全限制病原菌在叶面的进一步扩展 (已萌发孢子率为 80 %时 ) ,而CBS 14 8.96则不能 ;(2 )C .minitansCCTCCM2 0 30 2 0与CBS 14 8.96的生长特性及培养条件相近 ,但其菌体生长和孢子产量分别高出 6 0 %和 12 %.并发现该菌株在PDA上产生孢子的最短周期是 3.5～ 4d,较优培养条件为 :2 0℃、初始pH 5 .0～ 6 .2、空气湿度 90 %～ 97%;致腐菌核的较优条件为 :10 1～ 10 4孢子 /菌核 ,土壤湿度 80 %～ 10 0 %,pH 4 .0～ 7.0 .图 7参