早期糖尿病视网膜病变中eEF2K活性变化的实验观察

目的观察早期糖尿病大鼠视网膜中真核生物延伸因子2激酶(e EF2K)的变化,探讨e EF2K活性变化在早期糖尿病视网膜病变(DR)中的意义。方法建立SD大鼠链脲佐菌素(STZ)糖尿病高血糖模型,造模成功后,设立糖尿病大鼠(DM)组和正常对照(NC)组。qRT-PCR检测DM组和NC组4周和8周时大鼠神经视网膜中e EF2K的表达情况。免疫荧光法观察定位神经视网膜中e EF2K激活标志物-磷酸化真核生物延伸因子2(p-eEF2)和Müller细胞活化标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达情况。结果 4周和8周时DM组大鼠神经视网膜中e EF2K的表达水平与NC组相比无明显变化。8周时DM组大鼠神经视网膜各层均出现e EF2K激活表现,即p-eEF2表达增强。神经节细胞层出现细胞凋亡样改变,凋亡样神经节细胞中e EF2的磷酸化水平增强最为明显。神经视网膜中Müller细胞活化,GFAP蛋白表达增强。结论 STZ诱导糖尿病大鼠早期视网膜病变中神经视网膜内e EF2K激活,在凋亡样神经节细胞中e EF2K活性上升最为显著。

癌症治疗的新靶点——eEF2K

真核生物延伸因子2激酶(eukaryotic elongation factor 2 kinase,eEF2K)由人类基因组eEF2K基因编码,归属于"α-激酶"非典型蛋白激酶小家族。eEF2K的活性要依赖于钙离子和钙调蛋白。研究显示,eEF2K在一定的代谢压力下能磷酸化并抑制真核生物延伸因子2(eukaryotic elongation factor 2,eEF2),进而抑制蛋白质合成过程中多肽链的延伸,使细胞中能量和氨基酸的消耗减少,帮助细胞适应营养或能量缺乏的不利条件。越来越多的证据显示,eEF2K可成为治疗癌症等疾病药物的新靶点。本文结合近年来报道的eEF2K小分子抑制剂探讨其在癌症等疾病治疗中的潜在价值。

微小RNA-22调控人动脉平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡功能及其机制

目的探讨微小RNA（miRNA，miR）-22是否参与调控人动脉平滑肌细胞（ASMCs）功能及其机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—-PCR）和荧光原位杂交观察miR-22在动脉壁中的表达特点；细胞计数试剂盒（CCK-8）法、迁移小室（Transwell）及流式细胞实验分别检测miR-22对ASMCs增殖、迁移及凋亡的影响；双荧光素酶基因报告实验确定miR-22的靶基因；通过慢病毒过表达miR-22后，观察其对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜的影响。结果（1）miR-22在动脉硬化闭塞症（ASO）血管壁中表达（0．256±O．046）明显低于正常血管壁（0．946±0．081，P=0．000），且其主要定位于动脉中层；（2）与对照组比较，miR-22具有抑制ASMCs增殖（1．146±0．050比1．677±0．082，P=0．000）和迁移（16．50±1．38比37．83±2．54，P=0．000），促进凋亡的功能[（7．33±0．98）％比（3．95±0．89）％，P=0．000]。（3）双荧光素酶基因报告实验证实真核生物延伸因子2激酶（eEF2K）是miR-22的靶基因，miR-22可在转录后水平负性调控eEF2K表达；（4）慢病毒（LV）-miR-22组（0．832±0．126）与对照组（1．579±0．215，P=0．000）比较，明显减少大鼠颈动脉新生内膜面积。结论miR-22通过靶向结合eEF2K，抑制ASMCs增殖及迁移、促进凋亡，减少新生内膜增生。

与秀丽隐杆线虫氯离子通道CLH-1相互作用蛋白的构建:GFP-Trap技术和质谱分析(英文)

氯离子通道是一类分布广泛的阴离子选择性通道家族蛋白,在细胞容积维持、细胞质内pH调节、蛋白运输、细胞迁移、增殖及分化等重要生理过程中扮演着多种角色。然而,目前有关其功能调控研究较少。本研究构建了表达电压门控氯离子通道CLH-1融合绿色荧光蛋白(CLH-1::GFP)的转基因线虫。CLH-1::GFP主要表达在线虫头部神经元和身体后部肠道细胞中。利用最近发展起来的捕获GFP的GFP-Trap技术,从转基因线虫裂解液中捕获了可能调控氯离子通道CLH-1功能的相互作用蛋白。通过质谱鉴定,共有27个蛋白和CLH-1::GFP一起被捕获下来。生化实验显示其中真核生物延伸因子1(EEF-1)与CLH-1蛋白直接相互作用;并且,在和EEF-1共表达的情况下,CLH-1的蛋白水平显著上调。本结果表明利用线虫表达氯离子通道GFP融合蛋白,结合GFP-Trap和质谱分析技术,可以识别和电压门控氯离子通道相互作用蛋白,同时也表明EEF-1可以调控线虫CLH-1通道功能。