鸡真核生物翻译起始因子2α的原核表达与多克隆抗体的制备

为了获得鸡源真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor alpha two,eIF2α)的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了eIF2α基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-eIF2α。将其转化BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功表达出分子量约51 ku的重组融合蛋白。该融合蛋白表达时的最佳诱导时间、诱导温度和IPTG浓度分别为10 h、45℃和1.5 mmoL/L。通过对该蛋白进行Ni^(2+)柱亲和层析纯化,得到了较高纯度的重组蛋白。将纯化后的eIF2α蛋白免疫新西兰黄兔,制备的多克隆抗体ELISA效价达1∶8 000,试验结果为后续eIF2α蛋白功能的研究提供了帮助。

日本血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基全长cDNA的克隆与功能分析

目的对用表达序列标签(EST)策略从日本血吸虫(Schistosomajaponicum)尾蚴cDNA文库中筛选出的新基因进行全长cDNA克隆及功能预测。方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTn程序搜索,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基(eukaryotic translation initiation factor 2 alpha subunit, eIF2α) 基因高度同源。根据该EST序列设计与pTriplEx2 质粒上的5'端测序引物相匹配的PCR下游引物,从该cDNA文库中扩出包含eIF2α全长ORF的cDNA片段。将PCR产物纯化后克隆到pGEM-T载体上,并对此克隆进行测序得到其全长cDNA序列。用NCBI 站点的BLASTx及BLASTn程序对所获得的新基因序列进行同源性搜索;用blast two sequence程序对同源性高的基因进行核苷酸及氨基酸水平的同源性比较。同时用网上分析软件进行基序和保守区域的搜索。结果发现一个与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源的日本血吸虫新基因,核苷酸与氨基酸水平的同一性分别为87%和79%,编码由327个氨基酸组成的蛋白序列。结论用EST策略筛选到一个日本血吸虫新基因,编码eIF2α亚基,全长编码序列与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源。

肝细胞癌患者真核生物翻译起始因子-5A2、P53和上皮型黏附素表达及意义

目的检测肝细胞癌中真核生物翻译起始因子(EIF)-5A2、突变型P53基因(P53)和上皮型黏附素(E-cadherin)的表达,关注三者在不同临床特征中的差别及相关性。方法 90例肝细胞癌临床资料及术后蜡块组织作为观察组,以57例距肿物边缘>5 cm的非肿瘤性肝组织作为对照组,采用免疫组织化学技术检测两组EIF-5A2、P53和E-cadherin的表达。结果两组EIF-5A2、P53和E-cadherin的表达差异显著。观察组EIF-5A2、P53和E-cadherin的表达在不同肿瘤结节数量、直径、分化程度、转移、脉管浸润中的差异显著。相关性分析显示观察组中EIF-5A2和P53的表达具有正相关性、EIF-5A2和E-cadherin的表达具有负相关性。结论肝细胞癌组织中EIF-5A2和P53高表达、E-cadherin低表达对肿瘤进展有促进作用,EIF-5A2在作用过程中不仅对P53基因突变有一定作用,还对以E-cadherin为主的黏附蛋白有一定调节。

真核生物起始因子5

真核生物起始因子 5 (eIF 5 )是一种重要的翻译起始因子 ,过去人们认为它只是GTP酶活化因子 ,催化eIF 2上的GTP水解 ,促进 80S起始复合体的形成 .近年来人们发现它不仅可以催化eIF 2上的GTP水解 ,还参与eIF 3功能的发挥 ,与eIF 2、eIF 3同时结合 ,促进起始因子复合体的形成 .

真核生物中mRNA的降解

真核生物中mRNA的稳定性是决定基因表达水平的一个重要因素。不同mRNA稳定程度差异很大,例如高等真核生物中有些mRNA半衰期为20分钟,而同一细胞中另一些mRNA的半衰期则为24hr以上;酵母细胞中最不稳定的mRNA 5分钟内就彻底降解,最稳定的半衰期为60分钟以上。mRNA的降解是受精密调控的。近年来有关这方面的研究中最惊人的发现是,在mRNA中发现了调节它自身稳定性的序列。

甘蔗真核生物翻译起始因子5A基因的克隆与表达分析

真核生物翻译起始因子5A(Eukaryotic translation initiation factor 5A,e IF5A)是一种在动植物和真菌体内普遍存在的蛋白质.为了解e IF5A基因在甘蔗应答生物逆境胁迫中的作用,本研究首先从黑穗病菌胁迫下甘蔗抑制消减杂交(Suppression subtractive hybridization,SSH)文库中获得一条与玉米e IF5A基因(Gen Bank Accession Num ber:EU958725.1)同源性为93%的甘蔗EST序列;其次,以此序列作为探针,通过电子克隆技术获得一条甘蔗e IF5A基因的c DNA拼接序列;最后,经RT-PCR扩增和测序验证,结果显示电子克隆序列与测序序列一致,将该序列命名为Sce IF5A(Gen Bank Acce ssion Number:KJ577595).生物信息学分析显示,Sce IF5A基因c DNA全长1 174 bp,含有长度为483 bp、编码160个氨基酸的完整开放读码框;Sce IF5A蛋白是酸性稳定蛋白,分子量(Mr)为17 453.6,含有12个保守氨基酸序列,推测定位于细胞质.实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)分析结果表明,在黑穗病菌、水杨酸、茉莉酸甲酯、脱落酸胁迫下,Sce IF5A均上调表达,推测Sce IF5A基因在甘蔗响应黑穗病菌侵染过程中被诱导表达,且其表达受内源激素信号通路的调控.本研究获得的Sce IF5A基因的结构特征和功能作用模式为研究该基因在甘蔗与黑穗病菌互作中的作用积累了基础数据.

丹参预处理对肝脏缺血再灌注损伤后磷酸化真核生物翻译起始因子2α和caspasel2的影响

目的观察丹参预处理对肝脏缺血再灌注损伤后磷酸化真核生物翻译起始因子2d（p-elF-2a）和caspasel2表达的影响。方法将80只Wistar大鼠按随机数字表法分成正常对照组5只，假手术组、缺血再灌注组和丹参预处理组各25只，后3组大鼠再根据缺血再灌注时限（0、3、12、24和72h）分为5个亚组，每组5只。采用动脉夹钳夹肝蒂45min后，使血液复流的方法制备大鼠缺血再灌注损伤模型。正常对照组大鼠不做处理；假手术组仅解剖肝门不钳夹肝蒂；丹参预处理组大鼠在肝血流阻断前30min经尾静脉注入丹参注射液6ml／kg；假手术组和缺血再灌注组大鼠则在肝血流阻断前30min经尾静脉注入等量生理盐水。采用Westernblot检测各组大鼠肝组织中p-eIF-20α和caspasel2蛋白的表达，HE染色观察各组大鼠同期肝组织的病理形态学变化。多组间比较采用单因素方差分析，组间比较方差齐采用LSD法，方差不齐采用Games-Howell法。结果正常对照组大鼠肝组织中p-eIF-20α蛋白的相对表达量为0．296±0．038，假手术组在缺血再灌注0、3、12、24和72h分别为0．304±0．048、0．298±0．038、0．272±0．042、0．266±0．076和0．296±0．043，两组比较，差异无统计学意（P〉0．05）。缺血再灌注组大鼠肝组织中p-eIF-2α蛋白的相对表达量在缺血再灌注0h为0．310±0．034，与正常对照组和假手术组同时相点比较，差异无统计学意义（F=0．15，P〉0．05）；在缺血再灌注3、12、24h，p-eIF-2α蛋白的相对表达量分别为0．386±0．021、0．710±0．034和0．474-4-0．017，与正常对照组和假手术组同时相点比较，差异有统计学意义（F=11．90，211．52，25．15，P〈0．05）；至缺血再灌注72h，p-eIF-2α蛋白的相对表达量为0．336±0．043，基本回落至正常对照组和假手术组同时相点水平（F=1．57，P〉0．05）。丹参预处理组大鼠肝组织中p-eIF-2α蛋白的相对表达量在缺血再灌注0、12、24和72h分别为0．278±0．044、0．800±0．079、1．056±0．125、0．736±0．087和0．442±0．047，丹参预处理组在缺血再灌注3、12、24、72h明显高于缺血再灌注组同时相点水平（P〈0．05）。正常对照组大鼠肝组织中easpasel2蛋白的相对表达量为0．983±0．003，假手术组在缺血再灌注0、3、12、24和72h分别为0．974±0．004、0．9834-0．005、0．985±0．003、0．981±0．004和0．978±0．004，两组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。缺血再灌注组大鼠肝组织中caspasel2蛋白的相对表达量在缺血再灌注0h开始上升为1．018±0．076，但与正常对照组和假手术组同时相点比较，差异无统计学意义（F=1．43，P〉0．05）；在缺血再灌注3h明显升高为2．056±0．067，12h达到峰值为2．804±0．050，24h仍处于相对高水平为1．882±0．037，72h有所下降为1．282±0．066，与正常对照组和假手术组同时相点比较，差异均有统计学意义（F=1290．69，6490．84，2898．71，103．61，P〈0．05）。丹参预处理组肝组织中caspasel2蛋白的相对表达量在缺血再灌注0、3、12、24、72h分别为0．998±0．056、1．442±0．066、1．990±0．068、1．364±0．056和0．962±0．054，缺血再灌注3、12、24、72h均明显低于缺血再灌注组同时相点（P〈0．05）。病理形态学检测结果显示：正常对照组和假手术组大鼠肝组织肝小叶结构基本完整，肝细胞连续成索，胞核大而圆；肝缺血再灌注组大鼠肝组织可见肝小叶变形，细胞体积变小，细胞核浓缩，部分出现片状坏死；丹参预处理组大鼠肝细胞肿胀，出现轻微的点状坏死。结论丹参可能通过上调p-eIF-2α的水平稳定内质网内环境，减轻经内质网细胞凋亡途径中caspasel2的表达，在肝脏缺血再灌注损伤期发挥肝脏保护作用。

携带真核生物翻译起始因子2α激酶4基因突变肺静脉闭塞性疾病2例并文献复习

肺静脉闭塞性疾病(pulmonary veno-occlusive disease,PVOD)是肺动脉高压(pulmonary arterial hypertention,PAH)的一种罕见类型,以肺静脉的重塑为特点,肺活检是PVOD诊断的金标准,真核生物翻译起始因子2α激酶4(EIF2AK4)基因检测为其诊断提供了新思路,既往报道PAH靶向药物(前列环素衍生物、内皮素受体拮抗剂和磷酸二酯酶5型抑制剂)对PVOD的疗效欠佳,肺移植仍然是PVOD首选的治疗方法,但国内外亦有报道部分PVOD患者对PAH靶向药物具有良好的反应,可能与其合并存在肺动脉病变和微血管重塑有关,能否通过无创检查手段(基因检测)检出这部分患者从而指导患者选择最优治疗方案有待进一步探讨。

Paip1在翻译过程中的作用及机制研究进展

多聚腺苷酸结合相互作用蛋白1（Paip1）是哺乳动物特有的蛋白质,与多聚腺苷酸结合蛋白（PABP）及真核生物翻译起始因子4A（e IF4A）相互作用,参与了翻译起始及蛋白质的生物合成,然而Paip1调节翻译的具体机制还不是很清楚,我们将目前PAi P1相关的研究进展做如下归纳。

大白菜eIF(iso)4E.a假基因突变体的鉴别及相关检测标记的开发

马铃薯Y病毒在侵染寄主时与eIF4E或eIF(iso)4E的相互作用是一种普遍机制。大白菜病毒病主要病源是TuMV,TuMV在侵染大白菜时能同时与eIF4E和eIF(iso)4E发生作用,且在大白菜基因组中上述2基因各有3个拷贝。因而鉴定大白菜资源在上述2个位点的多样性、发现各位点的功能缺失突变体至关重要。采用同源克隆和Tail-PCR技术,鉴定了12份大白菜抗/感TuMV材料中eIF(iso)4E.a位点的多样性。结果表明:5份材料的eIF(iso)4E.a基因组序列完整,但与已知序列相比均存在显著差异,包含3种新的单倍型;7份材料的eIF(iso)4E.a缺失了第4、5外显子及3'端约1 kb的大片段,是个假基因。同时开发了鉴别完整基因与假基因的共显性标记。该策略为鉴定大白菜中eIF4E和eIF(iso)4E其他位点的多样性提供了借鉴,开发的相关检测标记可以作为标记辅助选择的工具用于创新抗病毒大白菜新种质及培育抗病毒大白菜新品种。

家蚕丝腺组织高丰度表达基因BmeIF5A的克隆和进化分析

从家蚕丝腺组织克隆得到2种mRNA形式的家蚕Bm eIF5A基因(GenBank登陆号:DQ202521;DQ201182),虽都具有相同的编码160个氨基酸的编码区,但却为不同长短的3′非编码区(3′UTR)。家蚕Bm eIF5A基因包含3个外显子和2个内含子。组织表达谱分析发现该基因在丝腺组织里高丰度表达。分析推导的氨基酸序列揭示该基因产物具有eIF5A家族蛋白质共有的保守区。序列同源性分析表明eIF5A家族基因在所有的真核生物中都高度保守。进化生物学的分析显示家蚕的eIF5A基因与昆虫的同源性较高。

eIF4E和cyclin D1在卵巢癌组织中的表达及意义

目的:探讨卵巢上皮性癌组织中eIF4E与cyclinD1的表达情况及与临床病理特征的相关性。方法:通过免疫组织化学染色法检测卵巢癌组织中eIF4E及cyclinD1的表达情况,分析eIF4E和cyclinD1蛋白表达与卵巢癌临床病理特征及预后的相关性。结果:卵巢癌组织中存在eIF4E和cyclinD1蛋白异常高表达,阳性表达率分别为50.74%、57.35%;卵巢癌组织中eIF4E和cyclinD1阳性表达率均高于癌旁组织(P<0.05),eIF4E和cyclinD1蛋白在卵巢癌Ⅲ~Ⅳ期的阳性表达率分别为55.56%和62.22%,高于卵巢Ⅰ~Ⅱ期的41.30%、47.83%,差异无统计学意义(P>0.05);eIF4E和cyclinD1蛋白在淋巴结转移卵巢癌组织中阳性表达率分别为67.95%、76.92%,高于无淋巴结转移卵巢癌组织的表达率27.59%、31.03%(P<0.05);卵巢癌组织中eIF4E与cyclinD1蛋白表达呈正相关。结论:eIF4E和cyclinD1蛋白过表达可能与卵巢癌的发生、发展及不良预后密切相关,eIF4E和cyclinD1有望成为卵巢癌临床诊治和判断预后独特的分子标志物。

肾消康对糖尿病大鼠肾组织基因eIF3s8表达的影响

目的观察中药复方肾消康对糖尿病肾病大鼠的防治作用及对肾脏基因表达的影响,探讨糖尿病肾病(DN)的发病机制,揭示中药复方肾消康防治DN的作用机理,筛选药效作用靶点,为临床推广应用提供科学依据。方法采用链脲佐菌素(STZ)加高热量饮食建立糖尿病大鼠肾脏损伤模型。运用放免、生化、光镜、电镜及美国Affymetrix公司的基因表达谱芯片、RT-PCR等先进检测手段和方法,观察了多项指标,尤其是通过聚类分析寻找和DN有重要相关性的基因,并进一步采用实时荧光定量RT-PCR法做验证实验研究。结果真核生物翻译起始因子3,8亚基(eIF3s8),在糖尿病大鼠肾脏表达下调,肾消康治疗组表达上调。结论应用Affymetrix Rat2302.0基因表达谱芯片检测糖尿病大鼠肾脏基因的表达,eIF3s8是筛选出的肾脏差异表达基因和药效靶点之一,并对该基因做荧光定量RT-PCR测序分析。这在国内外尚属首次。基因功能分析表明,在糖尿病状态下,eIF3s8表达下调,与糖尿病肾脏损伤有重要相关性,而经肾消康治疗后大鼠肾脏组织中eIF3s8表达上调,可见肾消康对eIF3s8基因表达具有良性调节作用,其作用机制还有待于进一步研究。

DHPS在胃癌转移中的作用及其机制研究

背景:脱氧羧腐胺赖氨酸合酶(DHPS)是催化真核生物翻译起始因子5A(e IF-5A)前体翻译后修饰的关键因子,而后者与肿瘤细胞增殖、侵袭的调控密切相关。目的:探讨DHPS在胃癌中的表达及其临床意义,探究其在胃癌转移中的可能作用机制。方法:使用含92例胃癌组织及其相应癌旁组织的组织芯片,以免疫组化染色检测DHPS表达,分析其表达与胃癌临床病理特征间的关联。利用DHPS-siRNA和DHPS抑制剂GC7分别干预人胃癌细胞株MGC803,以细胞侵袭实验检测细胞侵袭力,以ELISA法检测转移相关蛋白血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9表达。结果:62例(67.4%)胃癌组织DHPS高表达,其表达强度与肿瘤直径、TNM分期、浸润深度密切相关(P<0.05),与患者性别、年龄、淋巴结转移和远处转移无明显相关性(P>0.05)。DHPSsiRNA和GC7均可显著下调MGC803细胞的侵袭力,前者还可下调VEGF、MMP2和MMP9蛋白表达(P<0.05)。结论:DHPS在胃癌中表达升高,并与肿瘤浸润和进展密切相关。其参与胃癌细胞侵袭和转移的调控,有望成为胃癌诊断和治疗的新靶点。

拟南芥钙调素结合蛋白cDNA克隆的分离和初步鉴定

以生物素标记的钙调素为探针,从拟南芥(Arabidopsis thaliana)λZAPII cDNA表达文库中分离到9个阳性克隆．融合蛋白经CaM-gel overlay分析,其中Y1编码的融合蛋白在1 mmol/L Ca^(2+)存在下与胶体金标记的钙调素有明显结合．序列测定结果显示其外源片段全长为726 bp,含有一个476 bp的开放阅读框．GenBank数据库搜索及同源性分析结果表明该序列为拟南芥1号染色体基因组5661～7013序列,编码一未知蛋白,但与真核生物翻译起始因子5A(eIF-5A)具87%的同源性,并具相似的分子量、等电点和相同的保守序列．与eIF- 5A的结构特征比较,可初步确定Y1编码的蛋白为真核生物翻译起始因子5A家族中的新成员．即拟南芥1号染色体5661～7013序列为一尚未报道的翻译起始因子基因．蛋白质二级结构预测其C-端122～135氨基酸残基处有一双亲α-螺旋结构,这一结构与大多数钙调素结合蛋白中的钙调素结合位点的结构特征一致．该序列已提交NCBI BankIt数据库,登录号为AF492850．

鼠源eIF4A1基因克隆及其原核/真核表达鉴定

【目的】克隆昆明小鼠真核生物翻译起始因子4A1基因(eIF4A1)并构建其原核/真核表达载体,探究其结构和生物学特性,为在体内外鉴定eIF4A1互作蛋白网络打下基础。【方法】以昆明小鼠脑组织总RNA反转录合成的cDNA为模板,PCR扩增鼠源eIF4A1基因编码区(CDS)序列,然后克隆到pGEX-4T-1和pcDNA3.0载体上分别构建原核/真核表达载体;利用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞对原核表达载体进行诱导表达、纯化及鉴定;同时以真核表达载体转染HEK-293T细胞,通过Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测eIF4A1蛋白在HEK-293T细胞内的表达及分布情况;并以ProtParam、ProtScale、TMHMM-2.0、SignalP-5.0、SOPMA和SWISS-MODEL等在线软件对鼠源eIF4A1蛋白进行生物学信息分析。【结果】鼠源eIF4A1基因CDS序列长1221 bp,克隆到pGEX-4T-1载体能成功构建原核表达载体pGEX-4T-eIF4A1-Flag,在25和30℃下经0.5 mmol/L IPTG诱导均能大量表达出融合蛋白eIF4A1-Flag,且主要以包涵体形式存在。将鼠源eIF4A1基因克隆至pcDNA3.0载体成功构建获得真核表达载体pcDNA3.0-eIF4A1-Flag,以其转染HEK-293T细胞后,eIF4A1蛋白在HEK-293T细胞中成功表达,且主要分布在细胞质中。生物信息学分析结果表明,eIF4A1蛋白相对分子量为46.15408 kD,理论等电点(pI)为5.267,含有407个氨基酸残基;属于不稳定的亲水性非分泌蛋白,无跨膜结构,也没有信号肽,其二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。鼠源eIF4A1蛋白的主要互作蛋白有10个,除eIFs家族蛋白外,还包括Paip1和Pdcd4互作蛋白。【结论】eIF4A1主要是分布在细胞质,为不稳定的亲水性非分泌蛋白,无跨膜结构和信号肽,通过构建原核/真核表达载体表达获得的融合蛋白eIF4A1-Flag可用于筛选和鉴定eIF4A1互作蛋白,为深入探究eIFs的结构及生物学功能提供技术支持。

PAIP1与口腔鳞状细胞癌关系的研究进展

多聚核苷酸结合蛋白相互作用蛋白1(polyadenylate-binding protein-interacting protein 1,PAIP1)在真核生物的翻译起始过程中发挥重要作用,能够调控多聚核苷酸结合蛋白(poly(A)-binding protein, PABP)活性,并与真核生物翻译起始因子(eukaryotic initiation factor, eIFs)eIF4A和eIF3相互作用而促进翻译。近年来研究发现,PAIP1在多种恶性肿瘤的增殖、侵袭和转移、上皮间充质转化以及血管生成中起促进作用,与患者的不良预后相关,可能成为新的癌症诊断标志物和治疗靶点,受到学界关注。本文将对PAIP1的基本功能和其与口腔鳞状细胞癌的关系作一综述。

对甘蔗线条花叶病毒存在抗性差异的2个甘蔗品种中eIF4E基因序列分析

甘蔗线条花叶病毒(sugarcane streak mosaic virus,SCSMV)是近年引起甘蔗花叶病的主要病原,选育和利用抗病品种是防控甘蔗花叶病最经济有效的手段。不同品种对甘蔗花叶病具有不同抗性,明确抗性差异的来源对于选育抗病品种具有重要意义。本研究以SCSMV的高抗品种CP94-1100和高感品种ROC22为对象,对两个品种的致病病毒和真核生物翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor 4E,eIF4E)序列进行分析。在致病病毒方面,侵染CP94-1100和ROC22的SCSMV分离物cp基因和vpg基因核苷酸序列和蛋白编码情况基本相同,为同一分子变种。在寄主eIF4E方面,从CP94-1100和ROC22中均分离到eIF4E基因,均包含由663 bp构成的ORF,编码1个含220个氨基酸残基的多肽,氨基酸序列同源性仅为98.2%,说明抗性差异可能与eIF4E差异相关。生物信息学分析显示,CP94-1100和ROC22中eIF4E基因编码的蛋白均为稳定亲水性蛋白,属于IF4E家族蛋白,而CP94-1100中eIF4E基因编码的蛋白还包含1个CDC 33或PTZ00040的结构域。遗传分析表明eIF4E基因与禾本科其他作物高度相似,其中CP94-1100的eIF4E基因与割手密亲缘关系最近,说明它们也具有类似的功能。

INTAC的结构与功能

基因表达的精密调控对生命体的形成、发育以及各种生物学功能的维持至关重要。基因表达的紊乱与各种疾病的发生息息相关。转录是基因表达的最核心步骤。真核生物的转录过程主要分为转录起始(initiation)、暂停(pausing)、延伸(elongation)和终止(termination)四个步骤。在转录进程中,RNA聚合酶Ⅱ(Pol Ⅱ)受到转录因子和Pol Ⅱ本身的翻译后修饰调节。

Salubrinal减轻脑死亡大鼠肝细胞凋亡的机制研究

目的探讨Salubrinal减轻脑死亡大鼠肝细胞凋亡的相关机制。方法采用缓慢间歇颅内加压法建立大鼠脑死亡模型。40只SD大鼠利用随机数字表法分为4组：假手术组；脑死亡组；Salubrinal组，在脑死亡前60 min，经腹腔注射配制好的Salubrinal溶液，1 mg/kg；DMSO组，在脑死亡前60 min，腹腔注射二甲基亚砜（DMSO），1 mg/kg。逆转录聚合酶链反应检测增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（caspase-12） mRNA的表达；蛋白质印迹法检测真核生物翻译起始因子2α（P-eIF2α）、CHOP及caspase-12蛋白的表达。结果脑死亡组和DMSO组相比较，CHOP的mRNA及蛋白水平的差异无统计学意义（P〉0.05），caspase-12的mRNA及蛋白水平的差异无统计学意义（P〉0.05），P-eIF2α蛋白表达的差异无统计学意义（P〉0.05）。与脑死亡组相比较，Salubrinal组P-eIF2α蛋白表达增加（P〈0.05）。Salubrinal组CHOP的mRNA表达水平在大鼠脑死亡后4 h表达降低（P〈0.05），caspase-12的mRNA表达水平降低（P〈0.05）；其相应蛋白水平表达也明显降低（P〈0.05）。结论Salubrinal抑制脑死亡后肝细胞凋亡的机制可能通过提高内质网类似激酶/eIF2α通路活性来实现。