携带真核生物翻译起始因子2α激酶4基因突变肺静脉闭塞性疾病2例并文献复习

肺静脉闭塞性疾病(pulmonary veno-occlusive disease,PVOD)是肺动脉高压(pulmonary arterial hypertention,PAH)的一种罕见类型,以肺静脉的重塑为特点,肺活检是PVOD诊断的金标准,真核生物翻译起始因子2α激酶4(EIF2AK4)基因检测为其诊断提供了新思路,既往报道PAH靶向药物(前列环素衍生物、内皮素受体拮抗剂和磷酸二酯酶5型抑制剂)对PVOD的疗效欠佳,肺移植仍然是PVOD首选的治疗方法,但国内外亦有报道部分PVOD患者对PAH靶向药物具有良好的反应,可能与其合并存在肺动脉病变和微血管重塑有关,能否通过无创检查手段(基因检测)检出这部分患者从而指导患者选择最优治疗方案有待进一步探讨。

真核翻译起始因子4γ2调控N-乙酰氨基半乳糖转移酶1 mRNA对胃癌细胞恶性表型的影响

目的探讨真核翻译起始因子4γ2(EIF4G2)通过调控N-乙酰氨基半乳糖转移酶1(GALNT1)mRNA对胃癌进展的影响。方法通过生物信息数据库分析GALNT1、EIF4G2在胃癌细胞和胃癌组织中的表达及与胃癌患者预后的关系,并分析胃癌组织中EIF4G2、GALNT1表达的相关性。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测GALNT1 mRNA、EIF4G2 mRNA在人胃黏膜上皮细胞GES-1和人胃癌细胞(AGS细胞等)中的表达水平,并采用蛋白质印迹法(Western blot)检测GALNT1、EIF4G2蛋白表达水平。建立干扰GALNT1和过表达EIF4G2的AGS细胞株,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,采用TUNEL实验检测细胞凋亡能力,采用划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力,采用Western blot检测凋亡和转移相关蛋白表达水平,采用RIP实验和RNA下拉实验检测GALNT1 mRNA与EIF4G2的结合关系。结果胃癌组织和胃癌细胞中的GALNT1、EIF4G2水平分别高于正常组织和人胃黏膜上皮细胞,差异有统计学意义(P<0.001),且与胃癌患者预后差相关;胃癌组织中,EIF4G2表达与GALNT1表达呈正相关。敲低GALNT1后,AGS细胞活力降低,克隆形成数、迁移和侵袭细胞数减少,凋亡细胞数增加,Bcl-2、MMP2、MMP9蛋白表达降低,Bax、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达增加,差异有统计学意义(P<0.001)。EIF4G2可与GALNT1 mRNA结合,促进GALNT1 mRNA、GALNT1蛋白表达及GALNT1 mRNA稳定性,差异有统计学意义(P<0.001)。共转染sh-GALNT1-1与oe-EIF4G2可逆转sh-GALNT1-1对AGS细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。结论EIF4G2可通过稳定GALNT1 mRNA促进胃癌细胞增殖、迁移、侵袭并抑制细胞凋亡,其或可成为胃癌临床诊疗的新靶点。

脾相关酪氨酸激酶、蛋白激酶B、真核翻译起始因子4E、细胞周期蛋白依赖性激酶4在胃癌及癌前病变中的表达及相关性

目的探讨脾相关酪氨酸激酶(SYK)、蛋白激酶B(AKT)、真核翻译起始因子4E(EIF4E)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)在胃癌及癌前病变中的表达及相关性。方法收集90例患者的胃黏膜组织进行蛋白质印迹实验,其中癌旁正常组织30例,萎缩性胃炎组织30例,胃癌组织30例。另收集胃癌组织、萎缩性胃炎组织、癌旁正常组织存档蜡块各30例进行免疫组化实验。分别采用蛋白质印迹法和免疫组化法检测各组织中SYK、AKT、EIF4E、CDK4表达情况。分析萎缩性胃炎组织与胃癌组织中SYK、AKT、EIF4E、CDK4的相关性。结果癌旁正常组织中SYK蛋白表达水平及阳性表达率均高于萎缩性胃炎组织,萎缩性胃炎组织中SYK蛋白表达水平及阳性表达率均高于胃癌组织;癌旁正常组织中AKT、EIF4E、CDK4蛋白表达水平及阳性表达率均低于萎缩性胃炎组织,萎缩性胃炎组织中AKT、EIF4E、CDK4蛋白表达水平及阳性表达率均低于胃癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,胃癌组织和萎缩性胃炎组织中SYK与AKT、EIF4E、CDK4表达均呈负相关(P<0.05),AKT、EIF4E、CDK4三者表达均呈正相关(P<0.01)。结论SYK、AKT、EIF4E、CDK4可能通过相互作用共同参与了胃癌的发生,其可能的机制与磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/AKT信号通路有关。SYK、AKT、EIF4E、CDK4有希望成为胃癌诊断和防治的靶标,检测SYK、AKT、EIF4E、CDK4对胃癌诊断、早期治疗及预防具有重要价值。

鸡真核生物翻译起始因子2α的原核表达与多克隆抗体的制备

为了获得鸡源真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor alpha two,eIF2α)的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了eIF2α基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-eIF2α。将其转化BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功表达出分子量约51 ku的重组融合蛋白。该融合蛋白表达时的最佳诱导时间、诱导温度和IPTG浓度分别为10 h、45℃和1.5 mmoL/L。通过对该蛋白进行Ni^(2+)柱亲和层析纯化,得到了较高纯度的重组蛋白。将纯化后的eIF2α蛋白免疫新西兰黄兔,制备的多克隆抗体ELISA效价达1∶8 000,试验结果为后续eIF2α蛋白功能的研究提供了帮助。

日本血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基全长cDNA的克隆与功能分析

目的对用表达序列标签(EST)策略从日本血吸虫(Schistosomajaponicum)尾蚴cDNA文库中筛选出的新基因进行全长cDNA克隆及功能预测。方法将插入于pTriplEx2 质粒上的cDNA进行测序,测序结果经BLASTn程序搜索,发现该插入cDNA序列与曼氏血吸虫真核生物翻译起始因子2α亚基(eukaryotic translation initiation factor 2 alpha subunit, eIF2α) 基因高度同源。根据该EST序列设计与pTriplEx2 质粒上的5'端测序引物相匹配的PCR下游引物,从该cDNA文库中扩出包含eIF2α全长ORF的cDNA片段。将PCR产物纯化后克隆到pGEM-T载体上,并对此克隆进行测序得到其全长cDNA序列。用NCBI 站点的BLASTx及BLASTn程序对所获得的新基因序列进行同源性搜索;用blast two sequence程序对同源性高的基因进行核苷酸及氨基酸水平的同源性比较。同时用网上分析软件进行基序和保守区域的搜索。结果发现一个与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源的日本血吸虫新基因,核苷酸与氨基酸水平的同一性分别为87%和79%,编码由327个氨基酸组成的蛋白序列。结论用EST策略筛选到一个日本血吸虫新基因,编码eIF2α亚基,全长编码序列与曼氏血吸虫eIF2α亚基mRNA高度同源。

肝细胞癌患者真核生物翻译起始因子-5A2、P53和上皮型黏附素表达及意义

目的检测肝细胞癌中真核生物翻译起始因子(EIF)-5A2、突变型P53基因(P53)和上皮型黏附素(E-cadherin)的表达,关注三者在不同临床特征中的差别及相关性。方法 90例肝细胞癌临床资料及术后蜡块组织作为观察组,以57例距肿物边缘>5 cm的非肿瘤性肝组织作为对照组,采用免疫组织化学技术检测两组EIF-5A2、P53和E-cadherin的表达。结果两组EIF-5A2、P53和E-cadherin的表达差异显著。观察组EIF-5A2、P53和E-cadherin的表达在不同肿瘤结节数量、直径、分化程度、转移、脉管浸润中的差异显著。相关性分析显示观察组中EIF-5A2和P53的表达具有正相关性、EIF-5A2和E-cadherin的表达具有负相关性。结论肝细胞癌组织中EIF-5A2和P53高表达、E-cadherin低表达对肿瘤进展有促进作用,EIF-5A2在作用过程中不仅对P53基因突变有一定作用,还对以E-cadherin为主的黏附蛋白有一定调节。

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠磷酸化真核翻译起始因子2α和激活转录因子4表达的变化

目的:了解新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后磷酸化真核翻译起始因子2α[eIF2α(p)]、激活转录因子4(ATF4)表达的变化。方法:7日龄新生SD大鼠80只,随机分为2组:假手术组和HIBD组,每组各40只。HIBD组采用Rice方法建立新生大鼠HIBD模型,分别于缺氧缺血(HI)后6、12、24和72 h取其脑组织切片,采用免疫组织化学方法检测病变侧大脑皮质eIF2α(p)、ATF4蛋白的表达。假手术组不行缺氧缺血处理,采用同样方法检测其eIF2α(p)、ATF4蛋白的表达。结果:假手术组eIF2α(p)、ATF4蛋白少量表达,各时间点无明显变化(P>0.05);HIBD组6 h可以观察到较多eIF2α(p)、ATF4蛋白,12 h达到高峰,72 h明显减少,但仍高于假手术组。HIBD组与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。HIBD组各时间点比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:eIF2α(p)、ATF4参与了新生大鼠HIBD病理生理过程。HIBD可能诱发了内质网应激反应,启动了PKR样内质网激酶(PERK)介导的未折叠蛋白应答(UPR)通路。

吸烟的慢性阻塞性肺疾病患者痰液中蛋白激酶R样内质网激酶、真核翻译起始因子2α水平与疾病严重程度及肺功能的关系

目的探讨吸烟的慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者痰液中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核翻译起始因子2α(eIF2α)水平与疾病严重程度及肺功能的关系。方法纳入COPD患者107例,根据是否吸烟分为吸烟组63例和非吸烟组44例,再根据疾病状态将两组患者分别分为急性发作期组和稳定期组。采用酶联免疫吸附试验检测两组患者痰液中PERK、eIF2α水平并进行比较。根据肺功能检查中的第1秒用力呼气容积(FEV 1)占预测值的百分比(FEV 1%pred)进行慢性阻塞性肺疾病全球倡议(GOLD)分级。采用Pearson相关分析评估吸烟组患者痰液中PERK、eIF2α与FEV 1%pred、FEV 1/用力肺活量(FVC)的相关性。结果吸烟组患者痰液中PERK和eIF2α水平均高于非吸烟组(P<0.05)。吸烟组中,急性发作期组患者痰液中PERK和eIF2α水平均高于稳定期组(P<0.05);非吸烟组中,急性发作期组和稳定期组患者痰液中PERK、eIF2α水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。吸烟组患者随着GOLD分级的增加,痰液中PERK、eIF2α水平逐渐升高(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,吸烟组患者痰液中PERK水平与eIF2α水平呈正相关(r=0.386,P=0.002),痰液中PERK水平与FEV 1%pred呈负相关(r=-0.638,P<0.001),但与FEV 1/FVC无相关性(r=0.095,P=0.469);痰液中eIF2α水平与FEV 1%pred呈负相关(r=-0.445,P<0.001),但与FEV 1/FVC无相关性(r=0.045,P=0.717)。结论吸烟的COPD患者痰液中PERK、eIF2α水平与疾病严重程度呈正相关,与FEV 1%pred呈负相关性,对临床诊疗有一定的参考价值。

长链非编码RNA LINC00641通过微小RNA-181d-5p靶向真核细胞翻译起始因子4A2抑制宫颈癌细胞增殖的研究

目的观察长链非编码RNA(LncRNA)LINC00641(LINC00641)在宫颈癌细胞中的表达特征,探讨LINC00641通过微小RNA-181 d-5p(miR-181 d-5p)/真核细胞翻译起始因子4A2(EIF4A2)对宫颈癌细胞增殖的调节作用。方法选择宫颈癌Hela细胞株,建立空白对照组,构建转染pc-DNA3.1的无关序列组､转染pc-DNA3.1-LINC00641的pc-DNA-LINC00641组､转染pc-DNA3.1-LINC00641-siRNA的si-LINC00641组,转染miR-181 d-5p inhibitor的miR-181 d-5p inhibitor组､转染miR-181 d-5p mimic的miR-181 d-5p mimic组､转染siRNA-EIF4A2的si-EIF4A2组。采用CCK-8实验检测细胞增殖活性,采用双荧光素酶报告基因实验观察LINC00641和miR-181 d-5p､miR-181 d-5p､EIF4A2的靶向关系。选取2019年12月至2021年1月陕西中医药大学第二附属医院诊治的45例宫颈鳞癌且未行术前新辅助放､化疗的女性患者作为研究对象,留取其术后肿瘤组织(宫颈鳞癌组织)。另选取45例因子宫肌瘤行子宫全切术,且经病理确诊为慢性宫颈炎的患者,留取其宫颈组织(慢性宫颈炎组织)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测LINC00641和miR-181 d-5p的表达,采用免疫组化SP法检测EIF4A2和Ki67的表达,采用Pearson检验分析其相关性。结果生物信息分析显示,LINC00641与miR-181 d-5p､miR-181 d-5p､EIF4A2具有可能的结合位点。与空白对照组和无关序列组比较,pc-DNA-LINC00641组､miR-181 d-5p mimic组､si-EIF4A2组细胞增殖活性下降,si-LINC00641组､miR-181 d-5p inhibitor组细胞增殖活性升高。双荧光素酶报告基因实验显示,LINC00641与miR-181 d-5p､miR-181 d-5p､EIF4A2具有靶向关系。挽救实验显示,沉默EIF4A2可部分逆转沉默LINC00641和沉默miR-181 d-5p对细胞增殖的促进作用。与慢性宫颈炎组织比较,宫颈鳞癌组织中LINC00641､miR-181 d-5p低表达,EIF4A2高表达(P<0.05)。Pearson相关分析显示,LINC00641与miR-181 d-5p､EIF4A2､Ki67呈正相关性,miR-181 d-5p与EIF4A2呈负相关性。结论LINC00641通过miR-181 d-5p/EIF4A2抑制宫颈癌细胞的增殖,调控肿瘤的形成和进展。

非酒精性脂肪性肝病中蛋白激酶R样内质网激酶/真核翻译起始因子-2α通路的变化及意义

目的:又见察蛋白激酶R样内质网激酶/真核翻译起始因子-2α(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase/eukaryotic translation initator factor-2α,PERK/eIF-2α)信号通路在大鼠实验性非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)中的变化并探讨该信号通路在NAFLD中可能的作用.方法:健康Wistar大鼠30只,雌雄不限,按照随机数字表法分为正常对照组和NAFLD组,每组各15只.NAFLD组大鼠采用高脂高糖饮食诱导NAFLD的发生,而正常对照组大鼠则给予普通饲料喂养,时间总计为16 wk.检测血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三醋(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(highdensity lipoprotein,HDL)和低密度脂蛋白(lowdensity lipoprotein,LDL)的含量;实时荧光定量PCR技术检测肝脏中PERK,eIF-2α、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)及葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)等指标在mRNA水平的表达改变;蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测肝脏中磷酸化PERK(pPERK),磷酸化eIF-2α(p-eIF-2α),CHOP及GRP78等指标在蛋白水平的改变;同时采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:NAFLD组大鼠血清中TC、TG、LDL含量较正常对照组明显增高(P<0.05),而HDL则明显低于正常对照组大鼠(P<0.05);PCR结果发现,NAFLD组大鼠肝组织中PERK,eIF-2α、CHOP及GRP78的mRNA表达水平均较正常对照组大鼠显著升高(P<0.05或P<0.01):同时Western blot结果显示NAFLD大鼠肝脏中p-PERK,p-eIF-2α,CHOP及GRP78等指标的蛋白水平表达较正常对照组大鼠明显增多(P<0.05);此外,流式细胞仪检测发现NAFLD大鼠肝细胞凋亡较正常对照组大鼠显著升高.结论:NAFLD的发生发展过程中可能有内质网应激诱导细胞凋亡通路PERK/eIF-2α的参与.

真核翻译起始因子2α激酶在肾脏疾病中的作用研究进展

肾脏疾病的防治一直是医学研究的重点。真核翻译起始因子2α激酶(eIF2α)是哺乳动物细胞中代谢应激反应的关键因子,可诱导整体蛋白质翻译抑制,并在不同的细胞代谢应激下控制细胞存活。eIF2α激酶在维持机体的正常生理功能方面及肿瘤、免疫和代谢相关疾病等的发生发展过程中发挥重要作用。研究提示eIF2α激酶可能参与多种肾脏疾病的病理过程,因此,本文对eIF2α激酶家族及其在肾脏疾病中的可能作用等方面的研究进展进行归纳总结,以期为肾脏疾病的防治提供新的参考和理论依据。

肝细胞肝癌组织中WDR4和EIF2A的表达及临床预后价值

目的探讨肝细胞肝癌(HCC)组织中WD重复结构域4(WDR4)、真核翻译起始因子2A(EIF2A)的表达情况及临床预后意义。方法收集2019年1月—2020年1月南京大学医学院附属金陵医院收治的90例HCC患者的临床资料。利用R语言(4.2.1版本)分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载的327对HCC癌组织和癌旁组织中WDR4 mRNA、EIF2A mRNA表达的转录组测序数据。免疫组织化学检测HCC癌组织、癌旁组织中WDR4、EIF2A表达。分析HCC癌组织WDR4、EIF2A表达与临床病理特征的关系。Kaplan-Meier法分析WDR4、EIF2A表达对HCC患者预后的影响。Cox回归模型分析HCC预后的影响因素。结果HCC癌组织WDR4 mR-NA、EIF2A mRNA表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P均<0.05)。HCC癌组织中WDR4、EIF2A表达阳性率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P均<0.05)。HCC癌组织WDR4 mRNA与EIF2A mRNA表达呈正相关(r=0.404,P<0.001)。HCC癌组织中WDR4蛋白与EIF2A蛋白表达呈正相关(r=0.667,P<0.05)。肿瘤最大径>5 cm、TNM分期Ⅲ期及浸润型HCC癌组织中WDR4、EIF2A阳性率分别高于肿瘤最大径≤5 cm、TNM分期Ⅰ-Ⅱ期及非浸润型癌组织,差异有统计学意义(P均<0.05)。WDR4阳性组3年累积生存率明显低于WDR4阴性组,差异有统计学意义(P=0.016)。EIF2A阳性组3年累积生存率明显低于EIF2A阴性组,差异有统计学意义(P=0.022)。肿瘤TNM分期Ⅲ期、肿瘤最大径>5 cm、WDR4阳性、EIF2A阳性是HCC患者不良预后的独立危险因素。结论HCC组织中WDR4、EIF2A表达升高,两者与HCC不良临床病理特征有关,是评估HCC预后的肿瘤标志物。

乳腺癌组织中eIF4E、eIF5A2、KLF4、YAP1的表达水平及临床意义

目的:探讨乳腺癌组织中真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)和5A2(eIF5A2)、Krüppel样因子4(KLF4)、Yes相关蛋白1(YAP1)的表达水平及临床意义。方法 :将接受手术治疗的乳腺癌组织50例作为观察组,同时选取50例癌旁正常组织作为对照组,检测两组eIF4E、eIF5A2、KLF4、YAP1的表达水平,分析其与乳腺癌病理特征的临床意义。结果 :观察组eIF4E、eIF5A2、YAP1阳性表达率均高于对照组(P <0.05),KLF4低于对照组(P <0.05);在临床分期Ⅰ~Ⅱ期及发生淋巴结转移的患者中,eIF4E、eIF5A2、YAP1高表达患者占比高于低表达(P <0.05),KLF4高表达患者占比低于低表达(P <0.05)。结论 :乳腺癌组织中,eIF4E、eIF5A2、YAP1水平呈高表达,KLF4水平呈低表达,是评估疾病进展的重要指标。

EIF4A3 shRNA慢病毒载体的构建及其稳定转染细胞系的建立

目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和AgeⅠ酶切的慢病毒GV493载体,构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒质粒,PCR筛选阳性克隆并测序鉴定。将GV493空载质粒和GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,分别为GV493对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒,转染48 h后收集慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为空白组、GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组,空白组不作处理,GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组分别采用相应慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,使用10 mg·L-1嘌呤霉素筛选成功感染慢病毒的Neuro-2a细胞,荧光显微镜观察各组Neuro-2a细胞的生长状态和绿色荧光表达情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组Neuro-2a细胞中EIF4A3 mRNA及蛋白表达水平。结果:PCR测序结果显示GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒基因序列与设计合成的EIF4A3-shRNA序列一致,成功构建GV493-EIF4A3慢病毒载体。荧光显微镜观察可见HEK293T细胞荧光表达强烈,生长状态良好,慢病毒包装成功。GV493-对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒的滴度均为2×10~8 TU·mL^(-1),GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞生长状态良好且表达绿色荧光,表明慢病毒感染稳定细胞系构建成功。RT-qPCR法,与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3shRNA组Neuro-2a细胞EIF4A3mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。Western blotting法,各组在相对分子质量49000处出现特异性条带,提示Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达成功;与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:成功构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒载体,建立了Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系,为EIF4A3在颅内动脉粥样硬化的作用机制研究提供了参考。

丹酚酸A激活AKT/mTOR/4EBP1通路缓解脂多糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡和氧化应激

目的探究丹酚酸A(Sal A)对脂多糖(LPS)诱导的氧化应激性损伤H9c2心肌细胞增殖、凋亡,以及蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/起始因子4E结合蛋白(4EBP1)通路相关蛋白表达的影响。方法用LPS诱导制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,分别用含Sal A 5,10和20 mg·L^-1的DMEM培养基培养细胞24 h,加LPS 1 mg·L^-1继续孵育24 h。用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色观察H9c2心肌细胞存活;采用流式细胞术检测H9c2心肌细胞凋亡和线粒体膜电位;用试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量;Western印迹法检测胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶9、存活蛋白、Bax/Bcl-2,AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、mTOR、p-mTOR、4EBP1和p-4EBP1蛋白表达水平。结果与细胞对照组比较,模型组EdU红色标记的细胞减少(P<0.05);与模型组比较,Sal A 5,10和20 mg·L^-1处理组EdU红色标记的细胞增多(P<0.05)。Sal A能降低培养液中LDH活性及细胞内MDA和GSH含量,增加胞内SOD活性(P<0.05),减少心肌细胞的凋亡率(P<0.05),降低心肌细胞线粒体膜电位的下降速度(P<0.05)。Sal A 10和20 mg·L^-1处理后,活化胱天蛋白酶3、活化胱天蛋白酶9和Bax/Bcl-2蛋白水平显著下调(P<0.05),存活蛋白水平显著上调(P<0.05);与细胞对照组比较,模型组AKT/mTOR/4EBP1磷酸化水平均显著降低(P<0.05)。与模型组比较,Sal A 10和20 mg·L^-1组AKT和mTOR磷酸化水平均显著升高(P<0.05)。结论Sal A通过激活AKT/mTOR/4EBP1通路、减少心肌细胞凋亡并降低心肌细胞线粒体膜电位的下降速度,减缓了LPS诱导的H9c2心肌细胞凋亡和氧化应激,表明Sal A对LPS造成的氧化应激损伤心肌细胞具有保护作用。

耐力训练对心肌PERK/eIF2α/ATF4信号通路激活的影响

探讨内质网应激机制在耐力训练对心肌功能影响过程中的作用。方法:通过建立不同运动方式、运动训练状态和不同恢复阶段的动物模型,测定心肌中与内质网应激相关的信号通路PERK/eIF2α/ATF4激活水平的变化。结果:无论是急性运动,还是4或10周的递增负荷耐力训练,都没有显著激活PERK/eIF2α/ATF4信号通路,但是以延长运动时间为特征的耐力训练能够激活PERK/eIF2α/ATF4信号通路。结论:以递增运动时间为特征的耐力训练能够激活PERK/eIF2α/ATF4信号通路,该通路的激活对运动心肌的结构和功能变化可能产生影响。

Mnk2和eIF4E在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨MAPK相互作用激酶-2(MAPK-interacting kinase-2,Mnk2)和真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)在食管鳞状细胞癌中的表达及其与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系。方法:收集临床食管鳞癌石蜡标本98例及正常食管黏膜上皮组织20例,应用免疫组化SP法检测癌组织及正常食管黏膜组织中Mnk2和eIF4E的表达,并分析其与食管鳞癌临床病理特征的关系。结果:Mnk2在食管癌组织中的阳性率68.4%(67/98),eIF4E的阳性率为61.2%(60/98),Mnk2与eIF4E表达呈正相关(P<0.05),且Mnk2蛋白过表达与食管鳞癌的浸润深度、病理分期密切相关(P<0.05)。结论:Mnk2在食管癌组织中的过表达与浸润深度、TNM分期有关,同时与eIF4E在食管癌的表达相关,两者在食管癌的发展中有协同作用。

丹参预处理对肝脏缺血再灌注损伤后磷酸化真核生物翻译起始因子2α和caspasel2的影响

目的观察丹参预处理对肝脏缺血再灌注损伤后磷酸化真核生物翻译起始因子2d（p-elF-2a）和caspasel2表达的影响。方法将80只Wistar大鼠按随机数字表法分成正常对照组5只，假手术组、缺血再灌注组和丹参预处理组各25只，后3组大鼠再根据缺血再灌注时限（0、3、12、24和72h）分为5个亚组，每组5只。采用动脉夹钳夹肝蒂45min后，使血液复流的方法制备大鼠缺血再灌注损伤模型。正常对照组大鼠不做处理；假手术组仅解剖肝门不钳夹肝蒂；丹参预处理组大鼠在肝血流阻断前30min经尾静脉注入丹参注射液6ml／kg；假手术组和缺血再灌注组大鼠则在肝血流阻断前30min经尾静脉注入等量生理盐水。采用Westernblot检测各组大鼠肝组织中p-eIF-20α和caspasel2蛋白的表达，HE染色观察各组大鼠同期肝组织的病理形态学变化。多组间比较采用单因素方差分析，组间比较方差齐采用LSD法，方差不齐采用Games-Howell法。结果正常对照组大鼠肝组织中p-eIF-20α蛋白的相对表达量为0．296±0．038，假手术组在缺血再灌注0、3、12、24和72h分别为0．304±0．048、0．298±0．038、0．272±0．042、0．266±0．076和0．296±0．043，两组比较，差异无统计学意（P〉0．05）。缺血再灌注组大鼠肝组织中p-eIF-2α蛋白的相对表达量在缺血再灌注0h为0．310±0．034，与正常对照组和假手术组同时相点比较，差异无统计学意义（F=0．15，P〉0．05）；在缺血再灌注3、12、24h，p-eIF-2α蛋白的相对表达量分别为0．386±0．021、0．710±0．034和0．474-4-0．017，与正常对照组和假手术组同时相点比较，差异有统计学意义（F=11．90，211．52，25．15，P〈0．05）；至缺血再灌注72h，p-eIF-2α蛋白的相对表达量为0．336±0．043，基本回落至正常对照组和假手术组同时相点水平（F=1．57，P〉0．05）。丹参预处理组大鼠肝组织中p-eIF-2α蛋白的相对表达量在缺血再灌注0、12、24和72h分别为0．278±0．044、0．800±0．079、1．056±0．125、0．736±0．087和0．442±0．047，丹参预处理组在缺血再灌注3、12、24、72h明显高于缺血再灌注组同时相点水平（P〈0．05）。正常对照组大鼠肝组织中easpasel2蛋白的相对表达量为0．983±0．003，假手术组在缺血再灌注0、3、12、24和72h分别为0．974±0．004、0．9834-0．005、0．985±0．003、0．981±0．004和0．978±0．004，两组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。缺血再灌注组大鼠肝组织中caspasel2蛋白的相对表达量在缺血再灌注0h开始上升为1．018±0．076，但与正常对照组和假手术组同时相点比较，差异无统计学意义（F=1．43，P〉0．05）；在缺血再灌注3h明显升高为2．056±0．067，12h达到峰值为2．804±0．050，24h仍处于相对高水平为1．882±0．037，72h有所下降为1．282±0．066，与正常对照组和假手术组同时相点比较，差异均有统计学意义（F=1290．69，6490．84，2898．71，103．61，P〈0．05）。丹参预处理组肝组织中caspasel2蛋白的相对表达量在缺血再灌注0、3、12、24、72h分别为0．998±0．056、1．442±0．066、1．990±0．068、1．364±0．056和0．962±0．054，缺血再灌注3、12、24、72h均明显低于缺血再灌注组同时相点（P〈0．05）。病理形态学检测结果显示：正常对照组和假手术组大鼠肝组织肝小叶结构基本完整，肝细胞连续成索，胞核大而圆；肝缺血再灌注组大鼠肝组织可见肝小叶变形，细胞体积变小，细胞核浓缩，部分出现片状坏死；丹参预处理组大鼠肝细胞肿胀，出现轻微的点状坏死。结论丹参可能通过上调p-eIF-2α的水平稳定内质网内环境，减轻经内质网细胞凋亡途径中caspasel2的表达，在肝脏缺血再灌注损伤期发挥肝脏保护作用。

声门上型喉鳞状细胞癌组织VEGF、MMP-2、eIF4E的表达及临床意义

目的研究声门上型喉鳞癌及癌旁组织中VEGF、MMP-2、eIF4E的表达及与临床病理参数的关系。方法采用免疫组化SP法检测28例声门上喉鳞癌组织及癌旁组织中VEGF、MMP-2、eIF4E的表达。结果在声门上型喉癌组织中VEGF、MMP-2、eIF4E阳性表达率分别为78.57%,75%,89.28%;在癌旁组织中阳性表达率分别为21.42%,17.85%,42.85%。三者在肿瘤组织及癌旁组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05),其表达与肿瘤淋巴结转移密切相关(P<0.05),三者间存在正相关。结论VEGF、MMP-2、eIF4E是声门上喉鳞癌组织表达较敏感的标志物,可作为反应喉癌生物学行为的客观参考指标,有助于判断患者预后,及有利于肿瘤治疗方案的制定。

siRNA沉默eIF4E诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及其机制

目的:观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)对喉癌Hep-2细胞中eIF4E基因表达的影响,探讨其诱导喉癌细胞凋亡的作用机制。方法:采用脂质体LipofectamineTM2000将siRNA-eIF4E转染入人喉癌Hep-2细胞(siRNA-eIF4E组),同时设空白对照组和空质粒组。MTT法检测siRNA对Hep-2细胞增殖的抑制作用,罗丹明染色检测转染后细胞内线粒体膜电位的变化,TUNEL染色法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blotting法检测凋亡相关基因转录和蛋白表达水平的变化。结果:与空白对照组及空质粒组比较,siRNA-eIF4E组Hep-2细胞中eIF4E基因转录和表达水平明显下调(P<0.01),Hep-2细胞生存率下降(P<0.05),细胞线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),凋亡相关基因Bim、Bid及Caspase-3表达上调(P<0.05)。结论:siRNA-eIF4E在体外可抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其机制可能是通过激活线粒体凋亡途径诱导Hep-2细胞凋亡。