肝细胞癌患者真核生物翻译起始因子-5A2、P53和上皮型黏附素表达及意义

目的检测肝细胞癌中真核生物翻译起始因子(EIF)-5A2、突变型P53基因(P53)和上皮型黏附素(E-cadherin)的表达,关注三者在不同临床特征中的差别及相关性。方法 90例肝细胞癌临床资料及术后蜡块组织作为观察组,以57例距肿物边缘>5 cm的非肿瘤性肝组织作为对照组,采用免疫组织化学技术检测两组EIF-5A2、P53和E-cadherin的表达。结果两组EIF-5A2、P53和E-cadherin的表达差异显著。观察组EIF-5A2、P53和E-cadherin的表达在不同肿瘤结节数量、直径、分化程度、转移、脉管浸润中的差异显著。相关性分析显示观察组中EIF-5A2和P53的表达具有正相关性、EIF-5A2和E-cadherin的表达具有负相关性。结论肝细胞癌组织中EIF-5A2和P53高表达、E-cadherin低表达对肿瘤进展有促进作用,EIF-5A2在作用过程中不仅对P53基因突变有一定作用,还对以E-cadherin为主的黏附蛋白有一定调节。

柽柳翻译起始因子(eIF-5A)基因的克隆及原核表达

根据柽柳cDNA文库中获得的eIF-5A基因片段,用RACE技术克隆出其全长cDNA序列。cDNA长度为799bp,编码159个氨基酸。将该cDNA序列克隆到原核表达载体pET28a中,获得重组质粒pET28a-eIF5A。不同浓度NaCl胁迫下大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(pET28a-eIF5A)比E.coliBL21(pET28a)有明显的抗盐性,前者菌株存活率在1.0mol·L-1NaCl盐胁迫下是后者的9.3倍,据此认为E.coliBL21(pET28a-eIF5A)的耐盐性可能与eIF-5A基因的表达相关。该基因的GenBank登录号为AY587771(基因)、AAT01416(蛋白)。

胃癌中微小RNA-424-5p与真核翻译起始因子5A的表达特征研究

目的:观察胃癌中微小RNA-424-5p(miR-424-5p)与真核翻译起始因子5A(eIF5A)的表达特征,分析二者的靶向关系。方法:收集确诊为胃癌并行根治术的患者共65例作为研究对象,留取肿瘤组织和正常胃黏膜组织,应用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测miR-424-5p的表达,应用免疫组化法检测eIF5A的表达。选择胃癌MGC-803细胞株,应用双荧光素酶报告基因实验观察miR-424-5p与eIF5A的结合情况。结果:胃癌中miR-424-5p的表达量明显低于正常胃黏膜组织(P<0.05),eIF5A的阳性率明显高于正常胃黏膜组织(P<0.05),miR-424-5p与eIF5A在不同肿瘤最大径、不同浸润深度、有无淋巴结转移分组的比较中有统计学差异(P<0.05)。miR-424-5p与eIF5A呈负相关性(Y=-2.572X+7.662,P<0.05)。miR-424-5p和eIF5A的表达与术后生存时间相关(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-424-5p与eIF5A具有靶向关系。结论:胃癌组织中miR-424-5p表达下调、eIF5A表达升高,且具有靶向负调控关系。miR-424-5p和eIF5A的表达可能与患者术后生存时间有关。

小干扰RNA抑制真核翻译起始因子5A2对MKN28胃癌细胞恶性生物学行为的影响

目的研究真核翻译起始因子5A2(EIF5A2)在胃癌细胞增殖及迁移侵袭调控中的作用及其可能机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测EIF5A2在MKN28、HGC27细胞及正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)内的表达,评估小干扰RNA(siRNA)对EIF5A2的抑制效果。检测EIF5A2蛋白在2例人胃癌及匹配的非癌胃黏膜组织的表达。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移及侵袭力,Western blot法检测CyclinD1、CyclinD3、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、E-cadherin、Vimintin、C-myc及转移相关蛋白1(MTA1)的表达水平。结果 EIF5A2在MKN28细胞及人胃癌组织内呈高表达。EIF5A2 siRNA#1可明显抑制MKN28细胞内EIF5A2 mRNA及蛋白的表达。抑制EIF5A2后可明显抑制MKN28细胞增殖(P均<0.01)、迁移(P<0.001)及侵袭能力(P<0.001)。抑制EIF5A2后,Vimentin表达下调,E-cadherin表达上调,CyclinD1、CyclinD3、MTA1及C-myc表达明显受抑制。结论siRNA下调EIF5A2可能通过抑制CyclinD1、CyclinD3抑制MKN28细胞增殖,并通过抑制MTA1、C-myc及上皮间质转化抑制MKN28细胞迁移及侵袭能力。

真核细胞翻译起始因子5A(eIF5A)研究进展

真核细胞翻译起始因子5A（eIF5A）是真菌、动植物体内普遍存在的蛋白质翻译起始因子。研究发现其不仅仅在部分蛋白质翻译起始中发挥作用,还在人体癌症发生、促进动植物细胞增殖、细胞衰老和死亡以及一些植物环境胁迫应答等方面都有一定的调控作用。进一步研究真核细胞翻译起始因子5A（eIF5A）的功能,对其生产实践中应用具有非常重要的意义。

小麦蛋白翻译起始因子5A(eIF5A)表达载体构建及原核表达

真核生物的翻译起始因子5A(eIF5A)是调控生物生长发育、衰老及环境适应等的重要因子.在对小麦eIF5A基因进行克隆和序列分析的基础上,成功构建了小麦蛋白翻译起始因子5A(eIF5A)的表达载体pET28a(+)-eIF5A,并且经IPTG的诱导进行了原核表达,结果表明,eIF5A能够体外高效表达;进一步的Western blot分析表明,所表达的约18×103特异蛋白确为小麦eIF5A蛋白.

真核翻译起始因子-5A2在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨真核翻译起始因子-5A2在乳腺癌组织中的表达的临床意义。方法收集我院2008年1月至2010年12月有完整存档蜡块资料的50例乳腺癌蜡块并对其进行免疫组织化学染色,检测EIF-5A2在乳腺癌中的表达,并且对EIF-5A2的表达情况与疾病的病理生物学特点进行分析,以判断其对预后的意义。结果 EIF-5A2阳性表达86%,EIF-5A2在肿瘤中的表达与肿瘤临床分期、淋巴结转移、与雌激素受体(ER)状态呈负相关。结论 EIF-5A2在乳腺癌中有高表达,与临床分期密切相关。

胰腺导管腺癌中真核翻译起始因子5A2和基质金属蛋白酶-10、-11的表达

目的检测胰腺导管腺癌组织中真核翻译起始因子(EIF) 5A2、基质金属蛋白酶(MMP)-10和MMP-11表达,关注其相关性。方法 53例经病理医师确诊的胰腺导管腺癌为观察组,15例肿瘤周围正常胰腺组织为对照组。应用免疫组化法检测两组中EIF5A2、MMP-10和MMP-11蛋白的表达。结果两组EIF5A2、MMP-10和MMP-11表达差异有统计学意义(P<0. 05),观察组EIF5A2、MMP-10和MMP-11表达与Ki67指数和脉管累犯有关,EIF5A2表达与神经累犯密切相关,MMP-10和MMP-11表达与淋巴结转移相关(P<0. 05)。三者均与性别、年龄、分化程度及炎细胞浸润无关(P>0. 05)。观察组EIF5A2和MMP-10、EIF5A2和MMP-11表达呈正相关。结论胰腺导管腺癌中EIF5A2、MMP-10、MMP-11三者高表达可以促进肿瘤的形成和进展,EIF5A2与MMP-10、MMP-11可能具有正向协同作用。

长链非编码RNA LINC00641通过微小RNA-181d-5p靶向真核细胞翻译起始因子4A2抑制宫颈癌细胞增殖的研究

目的观察长链非编码RNA(LncRNA)LINC00641(LINC00641)在宫颈癌细胞中的表达特征,探讨LINC00641通过微小RNA-181 d-5p(miR-181 d-5p)/真核细胞翻译起始因子4A2(EIF4A2)对宫颈癌细胞增殖的调节作用。方法选择宫颈癌Hela细胞株,建立空白对照组,构建转染pc-DNA3.1的无关序列组､转染pc-DNA3.1-LINC00641的pc-DNA-LINC00641组､转染pc-DNA3.1-LINC00641-siRNA的si-LINC00641组,转染miR-181 d-5p inhibitor的miR-181 d-5p inhibitor组､转染miR-181 d-5p mimic的miR-181 d-5p mimic组､转染siRNA-EIF4A2的si-EIF4A2组。采用CCK-8实验检测细胞增殖活性,采用双荧光素酶报告基因实验观察LINC00641和miR-181 d-5p､miR-181 d-5p､EIF4A2的靶向关系。选取2019年12月至2021年1月陕西中医药大学第二附属医院诊治的45例宫颈鳞癌且未行术前新辅助放､化疗的女性患者作为研究对象,留取其术后肿瘤组织(宫颈鳞癌组织)。另选取45例因子宫肌瘤行子宫全切术,且经病理确诊为慢性宫颈炎的患者,留取其宫颈组织(慢性宫颈炎组织)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测LINC00641和miR-181 d-5p的表达,采用免疫组化SP法检测EIF4A2和Ki67的表达,采用Pearson检验分析其相关性。结果生物信息分析显示,LINC00641与miR-181 d-5p､miR-181 d-5p､EIF4A2具有可能的结合位点。与空白对照组和无关序列组比较,pc-DNA-LINC00641组､miR-181 d-5p mimic组､si-EIF4A2组细胞增殖活性下降,si-LINC00641组､miR-181 d-5p inhibitor组细胞增殖活性升高。双荧光素酶报告基因实验显示,LINC00641与miR-181 d-5p､miR-181 d-5p､EIF4A2具有靶向关系。挽救实验显示,沉默EIF4A2可部分逆转沉默LINC00641和沉默miR-181 d-5p对细胞增殖的促进作用。与慢性宫颈炎组织比较,宫颈鳞癌组织中LINC00641､miR-181 d-5p低表达,EIF4A2高表达(P<0.05)。Pearson相关分析显示,LINC00641与miR-181 d-5p､EIF4A2､Ki67呈正相关性,miR-181 d-5p与EIF4A2呈负相关性。结论LINC00641通过miR-181 d-5p/EIF4A2抑制宫颈癌细胞的增殖,调控肿瘤的形成和进展。

真核翻译起始因子-5A2 在肝内胆管癌中的表达及意义

目的研究真核翻译起始因子-5A2(eukaryotic translation initiation factor 5A2,eIF5A2)在肝内胆管癌中的表达及与神经侵犯和周围脂肪组织浸润的相关性。方法收集昆明医科大学第二附属医院肝胆胰外科2013年10月至2020年10月156例肝内胆管癌患者术后石蜡切块,收集同期30例肝血管瘤患者部分肝切除的正常肝组织作为对照组,采用免疫组化的方法检测eIF5A2的表达水平,并收集病理资料,分析eIF5A2与神经侵犯和周围脂肪组织浸润的相关性。结果156例肝内胆管癌组织切片中eIF5A2高表达95例(60.9%),其在正常肝组织胆管上皮高表达率为13.3%,eIF5A2的表达与神经侵犯和周围脂肪组织浸润显著相关(P<0.05)。结论eIF5A2在肝内胆管癌中高表达,与神经侵犯和周围脂肪组织浸润显著相关。

乳腺浸润性导管癌患者术后癌组织中真核翻译起始因子4e、3h和富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体5表达特征

目的检测乳腺浸润性导管癌患者术后癌组织中真核翻译起始因子(EIF)4e、3h和富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体(LGR)5的表达及其相关性。方法 132例乳腺浸润性导管癌术后组织蜡块及临床资料为研究组,经病理证实为正常乳腺小叶和导管上皮组织85例为对照组,选择EIF4e、3h和LGR5的多克隆性抗体,应用免疫组化SP法检测3种蛋白的表达。结果研究组EIF4e、3h和LGR5表达阳性率明显高于对照组,研究组EIF4e、3h和LGR5表达与肿瘤最大径、脉管浸润、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和Ki67的表达均具有相关性,EIF4e表达与淋巴结转移相关。研究组EIF4e和3h、EIF3h和LGR5表达正相关。结论乳腺浸润性导管癌患者术后组织中EIF4e、3h和LGR5高表达且具有协同作用,三者参与肿瘤的发生和进展,术后联合检测EIF4e、3h和LGR5的表达可能对判断预后有一定价值。

真核细胞翻译起始因子5A与自然流产相关性的初步研究

目的初步探讨真核细胞翻译起始因子5A(e IF5A)的表达与自然流产的相关性。方法采用免疫荧光染色、real-time PCR和Western blotting技术检测e IF5A-1和e IF5A-2在自然流产模型小鼠、正常生育力对照组小鼠子宫组织以及在自然流产和人工流产蜕膜组织中的表达。结果小鼠子宫组织及人蜕膜组织中e IF5A-1和e IF5A-2均有表达,但e IF5A-1表达水平明显高于e IF5A-2;流产组织标本中e IF5A-1、e IF5A-2mRNA及蛋白水平表达均低于对照组。结论 e IF5A表达下调可能与自然流产的发生和发展有关。

毛白杨翻译起始因子基因PtoeIF5A2的克隆及其表达特性分析

真核翻译起始因子5A(eIF5A)在植物生长发育和抗逆过程中发挥着重要作用。以2个月的毛白杨‘BJHR01’幼苗总RNA反转录的cDNA为模板,克隆得到PtoeIF5A2(GenBank登录号:HQ529480)基因全长cDNA序列。该基因包含483 bp开放读码框,编码160个氨基酸,预测蛋白分子质量为18 kDa,等电点为5.76。Real-Time qRT-PCR分析表明:PtoeIF5A2在6个月毛白杨幼苗叶片中的表达量最高,约为其在幼根中表达量的5倍。PtoeIF5A2响应了干旱、ABA(200μmol·L-1)、低温(4℃),尤其是NaCl(300 mmol·L-1)胁迫。在NaCl胁迫24 h后,PtoeIF5A2的表达量上调25倍,结合其启动子中含有6个病原体与高盐响应(GT-1 box)元件,推测该基因在响应高盐胁迫时起着重要作用。

真核翻译起始因子5A-1基因在宫颈癌发生中的作用及机制研究

目的探讨真核翻译起始因子5A-1(e IF5A-1)在宫颈癌细胞发生中的作用及机制。方法以宫颈癌Si Ha细胞系、宫颈癌组织及其相应的癌旁正常组织为研究对象,采用免疫印迹法检测组织中e IF5A-1蛋白表达;采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测Si Ha细胞的活力;采用3H-胸腺嘧啶核苷酸参入量(3H-TdR)检测宫颈癌细胞增殖的变化。结果 e IF5A-1基因在宫颈癌组织中的表达明显高于其对应的癌旁正常组织(P<0. 01),其中老年组e IF5A-1蛋白在宫颈癌组织中的表达高于非老年组(P<0. 05);与Empty vector组比较,e IF5A-1 vector载体组宫颈癌细胞活力和增殖能力显著增强;与Negative siRNA组比较,e IF5A-1 siRNA组宫颈癌细胞活力和增殖能力显著减弱。结论 e IF5A-1基因在宫颈癌发生中发挥重要作用,其有望成为宫颈癌防治的分子新靶标。

真核翻译起始因子5A在蛋白质合成中的功能与机制

在蛋白质合成过程中,除核糖体、氨酰-tRNA和mRNA外,还有多种翻译因子参与其中。真核翻译起始因子5A(eukaryotic translation initiation factor 5A,eIF5A)是维持细胞活性必不可少的翻译因子,在进化上高度保守。eIF5A是真核细胞中唯一含有羟腐胺赖氨酸(hypusine)的蛋白质,该翻译后修饰对eIF5A的活性至关重要。1978年,人们首次鉴定出eIF5A,认为它在翻译起始阶段促进第1个肽键的形成。直到2013年才证实它主要在翻译延伸阶段调控含多聚脯氨酸基序蛋白质的翻译。在经过四十多年研究后,人们对eIF5A的功能有了新的认识。近期基于核糖体图谱数据的分析表明,eIF5A能够缓解翻译延伸过程中核糖体在多种基序处的停滞,并不局限于多聚脯氨酸基序,并且它还能够通过促进肽链的释放增强翻译终止。此外,eIF5A还可以通过调控某些蛋白质的翻译,间接影响细胞内的各种生命活动。本文综述了eIF5A的多种翻译后修饰、在蛋白质合成和细胞自噬过程中的调控作用以及与人类疾病的关系,并与细菌及古细菌中的同源蛋白质进行了比较,探讨了该因子在进化中的保守性,以期为相关领域的研究提供一定的理论基础。

子宫内膜样腺癌患者癌组织白细胞分化抗原147、真核翻译起始因子3h和5A2表达及意义

目的研究子宫内膜样腺癌患者癌组织白细胞分化抗原(CD)147、真核翻译起始因子(EIF)3h和5A2表达及三者在判断肿瘤生物学行为中的作用。方法 142例子宫内膜样腺癌根治手术后的肿瘤组织为观察组,97例复杂性增生的子宫内膜组织为对照组,97例单纯性增生的子宫内膜组织为正常对照组。采用免疫组化方法检测CD147、EIF3h和5A2蛋白表达。结果 3组CD147、EIF3h和5A2阳性表达率差别显著。观察组CD147、EIF3h和5A2阳性表达率与肿瘤最大径、肌层浸润深度、淋巴结转移及是否累犯宫颈管密切相关。观察组EIF3h和5A2表达呈正相关。结论子宫内膜样腺癌患者术后组织CD147、EIF3h和5A2高表达对肿瘤发生和进展有重要作用,EIF3h和5A2可能具有正向协同作用。

卵巢浆液性癌组织中起始因子EIF5A2和基质金属蛋白酶-21的表达及临床意义

目的:检测真核翻译起始因子5A2(EIF5A2)和基质金属蛋白酶-21(MMP-21)在卵巢浆液性癌组织中的表达,分析其临床意义,关注两者与增殖指标的关系。方法:选择79例卵巢浆液性癌作为观察组,选择79例卵巢浆液性囊腺瘤作为对照组,留取术后新鲜组织和石蜡包埋组织。应用免疫组化检测两组石蜡包埋组织中EIF5A2、MMP-21的表达,应用Western Blot法检测观察组中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:两组中EIF5A2和MMP-21的表达差别有统计学意义,观察组中EIF5A2和MMP-21的表达在不同脉管累犯、淋巴结转移及肿瘤最大径的分组中差别有统计学意义,在不同年龄、病理分级、神经累犯的分组中无明显差别。EIF5A2和MMP-21、EIF5A2和PCNA、MMP-21和PCNA均具有正相关性。EIF5A2和MMP-21的表达与生存时间有关。结论:EIF5A2和MMP-21高表达且具有正相关性是卵巢浆液性癌重要的分子事件,两者可能对肿瘤的增殖有一定的影响。联合检测两者的表达与患者的预后有关。

慢病毒载体介导的稳定表达eIF5A细胞系的建立及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的影响

本研究旨在通过慢病毒载体构建稳定表达真核翻译起始因子5A(eukaryotic translation initiation factor 5A,eIF5A)的MARC-145细胞系并验证该细胞系对PRRSV感染的影响。全基因合成eIF5A序列,双酶切后构建慢病毒表达载体pLV-CMV-MCS-EF1a-Puro。将该载体和慢病毒包装质粒psPAX2与包膜蛋白质粒pMD2.G共转染HEK293T细胞,包装得到能表达eIF5A的慢病毒。将慢病毒转导至MARC-145细胞,经过嘌呤霉素筛选、细胞有限稀释法获得能稳定表达eIF5A的MARC-145细胞系。MTS试验证实构建的细胞系细胞活力无显著变化,病毒TCID50测定、实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹和间接免疫荧光技术检测eIF5A稳定表达对PRRSV滴度、PRRSV N基因及N蛋白表达的影响,发现MARC-145-eIF5A细胞系能显著促进PRRSV的增殖。本研究成功构建了稳定表达eIF5A的细胞系MARC-145-eIF5A,PRRSV感染试验证实体外稳定表达eIF5A可以促进PRRSV在MARC-145细胞的增殖。

草鱼eIF-5A的克隆、组织表达和进化分析

【目的】克隆和鉴定草鱼(Ctenopharyngodonidella)的eIF-5A基因,并分析其组织表达和适应性进化。【方法】在克隆草鱼eIF-5A全长cDNA的基础上,利用ORF finder、SMART等在线软件对草鱼eIF-5A的分子特征进行分析,并利用PAML 3.15软件包中的密码子替换模型检测eIF-5A的分子适应性进化;RT-PCR分析eIF-5A在草鱼心、脑、肌肉、鳃、脾、肝、肠、肾等组织中的本底表达和Poly I:C诱导表达。【结果】草鱼eIF-5A全长cDNA为2 249 bp,其中包含5′非编码区41 bp,3′非编码区1 743 bp;最大开放阅读框为465 bp,编码1个由155个氨基酸残基组成的蛋白质;草鱼eIF-5A分子质量为16.856 ku,等电点pI为5.18,N端含有eIF-5A家族共有的羧腐胺赖氨酸,C端包含一段富含亮氨酸的结构域。草鱼eIF-5A与人及其他动物具有较高的同源性,只有少数氨基酸残基发生替换;适应性进化分析也表明,eIF-5A不但具有结构的保守性,还具有功能的保守性;eIF-5A在草鱼心、脑、肌肉、鳃、脾、肝、肠、肾等组织中恒量表达,并且其表达不因Poly I:C的诱导而发生变化。【结论】eIF-5A是一类与细胞分裂和分化密切相关的蛋白质,在生物体中具有多种剪切体,提示eIF-5A对维持细胞生存非常重要;鉴定的草鱼eIF-5A为eIF-5A1,而非eIF-5A2。

EIF-5A2在肝细胞癌中的表达及其与VEGF、MVD的关系

目的:探讨真核翻译起始因子-5A2(eukaryotic initiation factor 5A2,EIF-5A2)在肝癌内的表达及其与VEGF表达、血管密度和临床病理指标的关系.方法:用免疫组织化学方法检测49例HCC组织及6例正常肝组织中EIF-5A2、VEGF和CD34的表达,计数微血管密度(MVD),并结合临床病理特征进行比较分析.结果:49例HCC组织中EIF-5A2、VEGF、CD34阳性表达率分别为87.7%、89.7%及100.0%,正常肝组织EIF-5A2、CD34表达呈阴性,VEGF表达为阴性或弱阳性.肝癌组织中EIF-5A2蛋白表达与VEGF表达及MVD间均呈正相关(r=0.416,0.321,均P<0.05);不同肿瘤灶数量的HCC组织EIF-5A2、VEGF蛋白表达及MVD差别无显著性,不同直径HCC的EIF-5A2、VEGF蛋白表达差别亦无显著性,而不同直径的HCC的MVD差别有显著性(P<0.05).有癌栓形成组与无癌栓组相比EIF-5A2、VEGF蛋白表达及MVD差别均有显著性(均P<0.05).肿瘤包膜完整组与无胞膜/包膜不完整组两组间EIF-5A2、VEGF蛋白表达及MVD差别均有显著性(均P<0.05).结论:肝癌组织中有较高的EIF-5A2阳性表达;EIF-5A2表达与VEGF表达及MVD呈正相关,与HCC组织血管侵犯和转移倾向有关.