真核细胞起始因子3a与妇科恶性肿瘤关系的研究进展

近年来,宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌三大妇科恶性肿瘤发病率呈上升趋势,严重影响女性患者的生命健康,而妇科肿瘤的发生发展与蛋白功能的调控有关。真核细胞起始因子3(eIF3)a是eIF3最大的组成亚基,是参与蛋白质形成的重要因子,eIF3a在宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌组织中均呈高表达,并通过多种机制参与肿瘤的发生发展及转移,同时与肿瘤化疗药物、放疗反应密切相关,影响患者预后。未来eIF3a有望成为妇科恶性肿瘤治疗的新靶点,对改善治疗效果及患者预后具有重要意义。

真核细胞起始因子3和人附睾蛋白4在卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的探讨真核细胞起始因子3(el F3a)和人附睾蛋白4(HE4)在卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌发生发展的关系。方法采用免疫组织化学染色法检测79例卵巢癌术后组织表标本、40例卵巢良性肿瘤组织标本、40例正常卵巢组织标本中的el F3a、HE4蛋白表达水平,分析el F3a、HE4蛋白表达与卵巢癌患者的临床病理学关系。结果卵巢癌中el F3a、HE4蛋白阳性表达率64.56%、39.25%,卵巢良性肿瘤中el F3a、HE4蛋白阳性表达率22.50%、7.50%,正常卵巢组织中el F3a、HE4蛋白阳性表达率0%、0%。3种组织el F3a、HE4蛋白阳性表达率有显著差异(P<0.05)。卵巢癌中el F3a、HE4蛋白阳性表达呈显著的正相关性(P<0.001);卵巢癌中el F3a蛋白阳性表达与患者的发生淋巴结转移、组织分化程度有关(P<0.05);卵巢癌中HE4蛋白阳性表达与患者的发生淋巴结转移有关(P<0.05)。结论卵巢癌组织中el F3a、HE4蛋白阳性表达显著升高,二者呈正相关关系。

Circ-WHSC1通过靶向miR-95-3p上调真核起始因子3B的表达促进非小细胞肺癌细胞增殖的机制研究

目的:探讨Circ-WHSC1通过靶向miR-95-3p上调真核起始因子3B(EIF3B)的表达对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖的作用。方法:用荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测NSCLC细胞中Circ-WHSC1表达水平。采用细胞计数试剂盒-8(CCK8)检测敲低Circ-WHSC1对NSCLC细胞增殖的影响。通过生物信息学预测、双荧光素酶报告实验、RNA结合蛋白免疫沉淀实验研究miR-95-3p与Circ-WHSC1,EIF3B之间的靶向关系。结果:Circ-WHSC1在NSCLC细胞系中的表达显著高于正常肺上皮细胞;敲低Circ-WHSC1显著降低了NSCLC细胞的增殖活力,而转染miR-95-3p过度表达可逆转此作用;miR-95-3p是Circ-WHSC1的下游靶点,可以被Circ-WHSC1吸附;EIF3B是miR-95-3p的靶基因,可以被Circ-WHSC1间接正向调控。结论:Circ-WHSC1通过靶向调控miR-95-3p/EIF3B轴促进NSCLC细胞的增殖。

PI3K、NF-κB p65蛋白在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、真核细胞转录因子κB(NF-κB)p65蛋白在宫颈癌组织中的表达及其临床意义。方法选取宫颈癌患者62例作为研究对象,提取宫颈癌组织及癌旁组织,采用免疫组织化学染色法检测PI3K和NF-κB p65蛋白的表达情况,对比宫颈癌组织和癌旁组织中REG4蛋白和Sp1蛋白阳性情况,分析PI3K和NF-κB p65蛋白表达与宫颈癌临床病理参数的相关性。结果宫颈癌组织中PI3K、NF-κB p65蛋白阳性表达率为62.90%和69.35%,癌旁正常组织中无阳性表达,两组比较,P<0.05。不同年龄、病理分型、肿瘤直径患者的PI3K、NF-κB p65蛋白阳性表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);FIGOⅢ~Ⅳ期患者PI3K和NF-κB p65阳性表达率为76.92%和82.05%,高于FIGOⅠ~Ⅱ期患者的39.13%和47.83%(P<0.05);不同分化程度患者PI3K和NF-κB p65阳性表达率从高到低依次为低分化(83.33%,94.44%)、中分化(61.11%,63.89%)、高分化(25.00%,37.5%)(P<0.05);淋巴结转移患者的PI3K和NF-κB p65阳性表达率分别为86.96%和95.65%,高于无淋巴结转移患者的48.72%和53.85%(P<0.05);相关性分析显示,宫颈癌患者的PI3K和NF-κB p65表达水平与FIGO分期、淋巴结转移呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05)。结论宫颈癌组织中PI3K、NF-κB p65蛋白阳性表达率均高于癌旁正常组织,并与FIGO分期、淋巴结转移呈正相关,与分化程度呈负相关,对于宫颈癌诊治具有一定的临床意义。

EIF4A3 shRNA慢病毒载体的构建及其稳定转染细胞系的建立

目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和AgeⅠ酶切的慢病毒GV493载体,构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒质粒,PCR筛选阳性克隆并测序鉴定。将GV493空载质粒和GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,分别为GV493对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒,转染48 h后收集慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为空白组、GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组,空白组不作处理,GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组分别采用相应慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,使用10 mg·L-1嘌呤霉素筛选成功感染慢病毒的Neuro-2a细胞,荧光显微镜观察各组Neuro-2a细胞的生长状态和绿色荧光表达情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组Neuro-2a细胞中EIF4A3 mRNA及蛋白表达水平。结果:PCR测序结果显示GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒基因序列与设计合成的EIF4A3-shRNA序列一致,成功构建GV493-EIF4A3慢病毒载体。荧光显微镜观察可见HEK293T细胞荧光表达强烈,生长状态良好,慢病毒包装成功。GV493-对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒的滴度均为2×10~8 TU·mL^(-1),GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞生长状态良好且表达绿色荧光,表明慢病毒感染稳定细胞系构建成功。RT-qPCR法,与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3shRNA组Neuro-2a细胞EIF4A3mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。Western blotting法,各组在相对分子质量49000处出现特异性条带,提示Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达成功;与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:成功构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒载体,建立了Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系,为EIF4A3在颅内动脉粥样硬化的作用机制研究提供了参考。

IL-33通过激活NF-κB信号通路上调eIF3a的表达介导小鼠肺肌纤维母细胞增殖分化促进肺纤维化

目的 探讨白细胞介素33(IL-33)介导的肺肌纤维母细胞(MFb)增殖分化在肺纤维化(PF)中的作用及机制。方法C57BL/6小鼠随机分为对照组、博莱霉素(BLM)组、 BLM联合IL-33组和BLM联合抗IL-33抗体组,每组各12只。气管内注射BLM(5000U/kg)建立肺纤维化小鼠模型。HE和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原纤维沉积情况。ELISA检测血浆IL-33的水平。免疫组织化学染色法检测肺组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。分离培养小鼠原代成纤维细胞,分为对照组、 IL-33组、 IL-33联合二甲基亚砜(DMSO)组及IL-33联合吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)组。细胞先用PDTC或DMSO预处理1 h,再用IL-33处理48 h。5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,Transwell^(TM)实验观察细胞迁移能力。实时定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白(Col1)、 Col3和α-SMA mRNA的表达。Western blot法检测IL-33、 Col1、 Col3、 α-SMA、磷酸化核因子κB抑制物α(p-IκBα)、磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)、真核翻译起始因子3a(eIF3a)及核内NF-κB p65的蛋白水平。结果 与对照组相比,BLM组IL-33、 p-IκBα、 p-NF-κB p65、 eIF3a的表达及核内NF-κB p65蛋白水平显著升高,同时α-SMA、 Col1和Col3的表达明显上调。与BLM组相比,IL-33组p-IκBα、 p-NF-κB p65和eIF3a的表达及NF-κB p65核转移水平进一步增加,肺组织α-SMA、 Col1和Col3的表达进一步上调;而抗IL-33抗体的作用正好和IL-33的作用相反。体外实验表明IL-33能够明显提高成纤维细胞增殖和迁移的能力、显著上调IκBα、 NF-κB p65磷酸化水平和NF-κB p65核转移水平及eIF3a的表达,明显促进α-SMA、 Col1和Col3的表达。而IL-33的这些作用能够被PDTC所逆转。结论 IL-33可能通过激活NF-κB信号通路而上调eIF3a的表达,进而诱导肺MFb增殖分化而促进PF的发生发展。

真核起始因子3b在乳腺癌中的表达及与患者临床特征的关系

目的探讨真核起始因子3b(eIF3b)在乳腺癌中的表达及与患者临床特征的关系。方法取45例乳腺癌患者的乳腺癌组织和相应的癌旁组织,采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测乳腺癌组织和相应的癌旁组织eIF3b mRNA的相对表达量,采用免疫组化二步法检测乳腺癌组织和相应的癌旁组织e IF3b蛋白的阳性表达率,分析e IF3b mRNA的相对表达量和eIF3b蛋白的阳性表达率与乳腺癌患者临床特征的关系。结果乳腺癌组织中eIF3b m RNA的相对表达量和eIF3b蛋白的阳性表达率,均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。不同年龄、病理类型、肿瘤直径、组织学分级乳腺癌患者乳腺癌组织中eIF3b mRNA相对表达量和e IF3b蛋白阳性表达率的比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);不同腋窝淋巴结转移情况、TNM分期乳腺癌患者乳腺癌组织中eIF3b mRNA相对表达量和eIF3b蛋白阳性表达率的比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论 eIF3b表达增高不仅可能参与了乳腺癌发生过程,也可能在乳腺癌的增殖、转移和侵袭过程中发挥促进作用。

siRNA介导的eIF3b基因沉默抑制乳腺癌细胞MCF-7的侵袭和迁移

目的:探讨siRNA介导的eIF3b基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7侵袭和迁移能力的影响。方法:设计eIF3b基因的小分子干扰RNA(siRNA)片段,脂质体介导转染入乳腺癌细胞株MCF-7,转染分3个组:I组(空白对照组)、II组(转染非特异性对照组)和III组(转染eIF3b-siRNA组)。应用qRT-PCR和Western blotting免疫印迹法检测转染前后eIF3b基因mRNA和蛋白表达水平;运用Matrigel胶模型细胞迁移和侵袭实验检测MCF-7细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:与I组(1.09±0.19)、II组(1.05±0.17)相比,III组eIF3b蛋白表达水平(0.45±0.06)明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05),I组和II组eIF3b蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。III组eIF3b mRNA相对表达水平为0.54±0.08,明显低于I组(1.12±0.16)和II组(1.08±0.18),差异有统计学意义(P<0.05),I组和II组eIF3b mRNA表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。细胞迁移实验中,III组细胞明显少于I组和II组(P<0.05);细胞侵袭实验中,III组穿过人工基底膜的细胞明显少于I组和II组(P<0.05)。结论:下调eIF3b表达可明显抑制乳腺癌细胞侵袭和迁移。

沉默eIF3b基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的探讨沉默eIF3b基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖、侵袭和迁移能力的影响及其作用机制.方法合成eIF3b基因的小分子干扰RNA(siRNA),转染入乳腺癌细胞株MCF-7,转染分3个组:Con-trol组(空白对照组)、Scramble组(转染非特异性对照组)和eIF3b-siRNA组(转染eIF3b-siRNA组).转染实验过程严格按操作说明书进行转染,其中eIF3b-siRNA组加入20 nmol/L转染eIF3b-siRNA,而Scramble组加入20 nmol/L Scramble RNA,Control组不作任何处理,转染24 h后收集细胞.应用qRT-PCR和Western blot免疫印迹法检测转染前后eIF3b基因mRNA和蛋白以及钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平;CCK-8法检测转染前后细胞增殖抑制率;运用Matri-gel胶模型细胞迁移和侵袭实验检测转染前后MCF-7细胞迁移和侵袭能力的变化.结果RT-PCR结果显示eIF3b-siRNA组eIF3b mRNA相对表达水平为0.54±0.08,明显低于Control组(1.08±0.18)和Scramble组(1.12±0.16),差异有统计学意义(P<0.05).Western印迹法结果显示:与Control组(1.09±0.19)、Scram-ble组(1.05±0.17)相比,eIF3b-siRNA组eIF3b蛋白表达水平(0.45±0.06)明显下降,差异有统计学意义(P<0.05).在不同培养时间点上比较,eIF3b-siRNA组细胞增殖抑制率均明显高于Control组和Scramble组,差异有统计学意义(P<0.05).细胞迁移和侵袭实验中,eIF3b-siRNA组迁移和侵袭的细胞数均明显少于Control组和Scramble组,差异有统计学意义(P<0.05),而Control组与Scramble组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05).与Control组和Scramble组比较,eIF3b-siRNA组vimentin(0.26±0.02)、MMP-2(0.23±0.02)和MMP-9(0.46±0.03)表达水平明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05),而E-cadherin(1.32±0.19)表达水平明显增强.结论下调eIF3b表达可有效地减弱乳腺癌细胞MCF-7增殖、侵袭和迁移能力,可能与阻碍乳腺癌细胞的上皮-间质转化过程和促进MMP-2和MMP-9的分泌有关.

雷帕霉素对柯萨奇病毒B3诱导的大鼠心肌细胞mTOR和eIF-4E表达的调控作用

目的:研究雷帕霉素对柯萨奇病毒B3(coxsackievirus B3,CVB3)诱导的心肌细胞哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)和真核起始因子4E(eukaryotic initiation factor-4E,eIF-4E)表达的调控,探讨mTOR/eIF-4E信号传导在病毒性心肌炎(viral myocarditis,VM)的作用。方法:CVB3感染原代培养的SD大鼠心肌细胞建立病毒性心肌炎的细胞模型。根据细胞毒力实验筛选10 nmol/L的雷帕霉素干预CVB3感染的心肌细胞,采用RT-PCR和Western免疫印迹方法检测mTOR和eIF-4E mRNA表达及蛋白质水平。结果:CVB3诱导心肌细胞变性,雷帕霉素可减轻其变性;CVB3使大鼠心肌细胞的mTOR和eIF-4E mRNA和蛋白表达上调,与对照组比较,有统计学差异(P<0.05),雷帕霉素可使CVB3感染的心肌细胞mTOR和eIF-4E mRNA和蛋白表达明显下调,与CVB3组比较,有统计学差异(P<0.05)。结论:雷帕霉素能明显抑制CVB3感染的大鼠心肌细胞mTOR和eIF-4E表达,提示mTOR/eIF-4E信号传导在病毒性心肌炎中可能起重要作用。

RIP3/MLKL通过激活4EBP1-eIF4E通路诱导程序性坏死

目的:程序性坏死是一种由受体相互作用蛋白3(receptor interacting protein 3,RIP3)和混合谱系激酶域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)介导的细胞死亡形式,有研究指出哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路可能参与程序性坏死的调控,真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(eukaryotic translation initiation factor 4Ebinding protein 1,4EBP1)-真核起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)通路是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白最重要的下游分子通路之一,然而此通路是否参与程序性坏死的发生,目前尚无相关研究。本研究旨在探索4EBP1-eIF4E通路在程序性坏死中是否发生改变。方法:首先向小鼠上皮样成纤维细胞系L929细胞中加入程序性坏死诱导剂TSZ(TNF-α/SM-164/Z-VAD-FMK),在光学显微镜下观察细胞坏死情况;进一步向敲除RIP3和MLKL基因的L929细胞中加入TSZ,采用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色观察细胞坏死情况,实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测4EBP1和eIF4E的mRNA和蛋白质表达水平。结果:野生型L929细胞用TSZ处理后,坏死细胞增加,4EBP1的mRNA和蛋白质表达水平明显下调且磷酸化的4EBP1(phosphorylated 4EBP1,p-4EBP1)/4EBP1值增加(P<0.05或P<0.01),eIF4E的mRNA表达水平明显上调且磷酸化的eIF4E(phosphorylated eIF4E,p-eIF4E)/eIF4E值增加(均P<0.01);在敲除L929细胞中的RIP3和MLKL基因后,PI阳性坏死细胞明显减少,4EBP1的mRNA和蛋白质表达水平明显上调且p-4EBP1/4EBP1值下降(P<0.05或P<0.01),eIF4E的mRNA表达水平明显下调且p-eIF4E/eIF4E值下降(均P<0.01)。结论:4EBP1-eIF4E通路在RIP3/MLKL介导的程序性坏死中发生活化。

BMSCs介导STAT3对脑出血大鼠海马组织eIF2α、Glu表达水平的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑出血(ICH)大鼠海马组织真核细胞翻译起始因子2α亚基(eIF2α)、谷氨酸(Glu)表达水平的影响及其机制。方法100只SD大鼠,随机选取10只分离BMSCs,剩余90只采用Ⅳ型胶原酶构建ICH模型。90只大鼠随机分为假手术组、ICH组和BMSCs移植组,每组30只。造模成功后24h,BMSCs移植组大鼠经尾静脉注入BMSCs,其余2组注入等体积0.9%氯化钠溶液。观察大鼠一般情况,评估神经功能,测定脑组织含水量。蛋白印迹测定海马组织内质网应激相关因子、eIF2α及JAK/STAT3通路蛋白水平,高效液相色谱法测定Glu浓度,TUNEL法分析细胞凋亡情况。结果ICH组大鼠神经功能缺损评分(NSS)和脑组织含水量显著大于假手术组,海马组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)蛋白相对表达量显著低于假手术组,CAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和Caspase-12蛋白相对表达量显著高于假手术组,海马组织eIF2α蛋白相对表达量和Glu水平显著高于假手术组,海马神经细胞凋亡率显著高于假手术组,海马组织JAK、p-JAK、STAT3和p-STAT3蛋白相对表达量显著低于假手术组(P<0.05);与ICH组比较,BMSCs移植组大鼠NSS评分和脑组织含水量显著降低,海马组织GRP78蛋白相对表达量显著增加,CHOP和Caspase-12蛋白相对表达量显著降低,eIF2α蛋白相对表达量和Glu水平显著降低,海马神经细胞凋亡率显著降低,海马组织JAK、p-JAK、STAT3和p-STAT3蛋白相对表达量显著增加(P<0.05)。结论BMSCs移植可通过JAK/STAT3通路降低ICH大鼠海马组织eIF2α和Glu表达,抑制神经细胞凋亡,减轻内质网应激,从而达到减轻脑损伤,改善神经功能作用。

eIF3b和METTL3通过m 6A介导促进宫颈癌进展的作用机制及研究进展

真核翻译起始因子3(eIF3)是由13个亚基组成的复合物,是目前已发现的eIFs中最大的真核翻译起始因子。eIF3b作为其关键亚基,在翻译起始的调控中具有举足轻重的作用。甲基转移酶样3(METTL3)是一种已知的具有催化活性的甲基转移酶,是甲基转移酶复合体的关键成分,其负责对N6-甲基腺苷(m^(6)A)进行甲基化修饰。近年来越来越多的研究表明,eIF3b、METTL3在多种人类恶性肿瘤中高表达,可通过m^(6)A介导产生联系。且研究发现eIF3b、METTL3均在宫颈癌中高表达,可促进宫颈癌细胞的增殖、侵袭、迁移,抑制细胞凋亡。文章主要就eIF3b、METTL3通过m^(6)A介导在宫颈癌发展中的具体作用机制以及研究进展进行综述。

eIF3b在三阴性乳腺癌细胞增殖和侵袭中的作用

目的:探讨真核细胞翻译起始因子3的亚基b(eIF3b)基因在三阴性乳腺癌(TNBC)增殖和侵袭中的作用。方法:采用免疫组化法检测50例TNBC组织中eIF3b蛋白的表达;应用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、细胞计数试剂盒8(CCK-8)、细胞克隆形成、细胞划痕实验、细胞侵袭实验,以及蛋白质印迹(Western blot)法分别检测RNA干扰(RNAi)前后MDA-MB-231细胞株eIF3b mRNA表达、细胞增殖、细胞迁移、细胞侵袭能力的变化,以及β-Catenin、C-myc蛋白的表达。结果:50例TNBC中eIF3b高表达率为74%,显著高于癌旁正常组织(P<0.01),与Ki-67表达、淋巴结转移有关(P<0.05),而与患者年龄、肿瘤大小、组织学类型无关(P>0.05)。RNAi后MDA-MB-231细胞株的eIF3b mRNA水平显著下降(P<0.05),细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著低于对照组(P<0.05),Western blot结果显示β-Catenin蛋白和C-myc蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05)。结论:eIF3b在TNBC组织中高表达;eIF3b基因沉默可抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,可能与阻断Wnt/β-Catenin信号通路影响细胞周期有关。

慢病毒介导eIF3b-shRNA对裸鼠MCF-7乳腺癌移植瘤的抑制作用

目的:探讨慢病毒介导eIF3b-shRNA对裸鼠乳腺癌移植瘤生长、增殖及转移的影响。方法:利用慢病毒介导eIF3b-shRNA转染MCF-7乳腺癌细胞,建立裸鼠乳腺癌模型,裸鼠分成三组,每组5只:I组(接种转染eIF3b-shRNA的MCF-7乳腺癌细胞)、Ⅱ组(接种转染空载体的MCF-7乳腺癌细胞)和Ⅲ组(接种正常MCF-7乳腺癌细胞)。观察制瘤成功后裸鼠肿瘤体积生长、HE染色镜下观察移植瘤组织和肺组织,并应用实时荧光定量PCR法检测eIF3b mRNA表达,Western blot印迹法检测eIF3b、增殖标记蛋白Ki-67及迁移标记蛋白MMP-9的表达。结果:三组裸鼠成瘤后,不同时间点对三组裸鼠进行观察,Ⅰ组肿瘤体积均明显小于Ⅱ组与Ⅲ组(P<0.05),而Ⅱ组与Ⅲ组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。实时荧光定量PCR法检测结果显示:I组裸鼠移植瘤组织中eIF3b mRNA相对表达量明显下降,明显低于Ⅱ组和Ⅲ组,差异具有统计学意义(P<0.05),而Ⅱ组和Ⅲ组之间eIF3b mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot印迹法检测结果显示:Ⅰ组裸鼠移植瘤组织中eIF3b、增殖标记蛋白Ki-67和迁移标记蛋白MMP-9相对表达量较Ⅱ组和Ⅲ组显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05),而Ⅱ组和Ⅲ组之间各蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。解剖三组裸鼠,大体肉眼观察发现Ⅱ组和Ⅲ组的肺组织切开可见多灶灰白小结节,而Ⅰ组裸鼠肺组织中未找到明显结节。镜下观察发现,Ⅱ组和Ⅲ组裸鼠肺泡组织中灰白小结节为腺管样异型细胞呈结节样生长,而Ⅰ组镜下见肺泡组织结构正常,未找到转移灶。结论:慢病毒介导下调eIF3b表达对乳腺癌细胞在裸鼠体内的移植瘤生长、增殖及肺转移有明显抑制作用。

Pim-3与NF-κB在乳腺浸润性导管癌中的表达及相关性研究

目的探讨Pim-3与NF-κB在乳腺浸润性导管癌发病中的作用。方法用免疫组织化学技术SP法,检测Pim-3与NF-κB在75例乳腺浸润性导管癌、21例乳腺导管内癌及30例正常乳腺组织中的表达,分析它们与乳腺癌临床病理因素的关系及两者的相关性。结果在乳腺浸润性导管癌中Pim-3的阳性表达率为77.3%、NF-κB为68.0%,在乳腺导管内癌中Pim-3的阳性表达率为52.4%、NF-κB为42.9%,在正常乳腺组织中Pim-3的阳性表达率为23.3%、NF-κB为16.7%。Pim-3阳性表达率与肿瘤直径、组织学分级、临床病理分期,NF-κB阳性表达率与肿瘤直径、组织学分级、淋巴结转移有相关性。Spearmen秩相关分析,乳腺癌中Pim-3的阳性表达与NF-κB阳性表达呈正相关(r=0.243)。结论 Pim-3与NF-κB在乳腺癌的发生、发展中具有重要的促进作用,其阳性表达对预后的判断具参考作用。

1,25-二羟基维生素D_3对人肾小球系膜细胞增殖、周期的影响及其机制

目的观察1,25-二羟维生素D_3(1,25-(OH)_2D_3)对人肾小球系膜细胞株增殖及细胞周期的影响,并探讨其可能作用机制。方法对数生长期人肾小球系膜株细胞分为A、B、C、D组,分别加入终浓度为10^(-8)mol/L的1,25(OH)_2D_3+含5%FBS的L-DMEM培养基、5 mg/L雷帕霉素+含5%FBS的L-DMEM培养基、5 mg/L雷帕霉素+终浓度为10^(-8)mol/L 1,25(OH)_2D_3+含5%FBS的L-DMEM培养基。给药48 h时观测各组细胞增殖及细胞周期分布,检测各组细胞真核细胞翻译起始抑制因子4E结合蛋白(4E-BP1)、磷酸化4E-BP1蛋白。结果给药48h时A、B、C组的细胞凋亡率分别为38.02%、55.62%、99.23%,组间比较,P均<0.05。给药48 h时,A、B、C组G_1期细胞所占比例明显高于D组(P均<0.05),S、G_2/M期细胞所占比例明显低于D组(P均<0.05);B、C组G_1期细胞所占比例明显高于A组(P均<0.05),S、G_2/M期细胞所占比例明显低于D组(P均<0.05);C组G_1期细胞所占比例明显高于B组(P均<0.05),S、G_2/M期细胞所占比例明显低于B组(P均<0.05)。A、B、C组细胞4EBP1、磷酸化4E-BP1蛋白相对表达量及磷酸化4E-BP1/4E-BP1均低于D组(P均<0.05);B、C组细胞4E-BP1、磷酸化4E-BP1蛋白相对表达量及磷酸化4E-BP1/4E-BP1均低于A组(P均<0.05);C组细胞4E-BP1、磷酸化4EBP1蛋白相对表达量及磷酸化4E-BP1/4E-BP1均低于B组(P均<0.05)。结论 1,25(OH)_2D_3可抑制人肾小球系膜细胞株的增殖,阻滞细胞周期于G_1期,其机制可能为1,25-(OH)_2D_3下调4E-BP1的表达。

肿瘤相关蛋白EIF4G1亚型的B细胞表位预测

目的预测肿瘤相关蛋白EIF4G1亚型的B细胞表位。方法下载EIF4G1蛋白各种亚型的氨基酸序列,以单参数(亲水性、可及性、柔韧性、抗原性)预测为基础,结合ABCpred和二级结构预测筛选等方法综合筛选EIF4G1蛋白质亚型特异性的B细胞表位。结果目前已知EIF4G1蛋白的亚型有5种,亚型间的氨基酸变化局限在一个由300个氨基酸形成的序列区域,亚型特异性的B细胞表位可能位于该区域的14～19、21～27、52～61、106～112、113～139、183～189、201～216和217～224位氨基酸残基区域内或附近。结论 EIF4G1蛋白质亚型间存在特异性B细胞表位,这些表位对应用合成肽抗原检测蛋白质亚型和进行肿瘤患者的早期诊断具有重要指导意义。

miR-22-3p靶向负调控eIF4E对儿童骨肉瘤细胞增殖影响的研究

目的:观察微小RNA-22-3p(miR-22-3p)与真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)的靶向关系,分析其对骨肉瘤细胞增殖的影响。方法:选择骨肉瘤细胞系SAOS-2和成骨细胞系OB-3进行研究,采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-22-3p与eIF4E的结合情况。建立空白对照组、空载体转染组、miR-22-3p转染组、miR-22-3p和eIF4E共转染组,采用CCK-8法检测细胞活性,采用Western Blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。应用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测miR-22-3p在27例儿童骨肉瘤组织中的表达,应用免疫组化法检测组织中eIF4E和Ki67的表达。结果:骨肉瘤细胞系中miR-22-3p的表达明显低于正常成骨细胞系。双荧光素酶报告基因实验显示miR-22-3p能引起转染pGL3-eIF4E-WT细胞系中荧光素酶活性降低。与空白对照组及空载体转染组相比,miR-22-3p转染组细胞活性下降,PCNA表达下降,miR-22-3p和eIF4E共转染组能逆转上述表达水平。MiR-22-3p在骨肉瘤的不同肿物最大径和病理分级分组的表达中差异有统计学意义(P<0.05)。MiR-22-3p与eIF4E、miR-22-3p与Ki67均具有负相关性,eIF4E与Ki67具有正相关性。结论:miR-22-3p靶向负调控eIF4E调节骨肉瘤细胞的增殖。儿童骨肉瘤中miR-22-3p低表达是肿瘤进展的重要危险因素。

苦参碱对小鼠成纤维细胞L929的作用及其机制

目的探讨苦参碱对小鼠成纤维细胞L929的作用及其机制。方法分别应用0.25、0.50、0.75、1.00 g/L苦参碱处理小鼠成纤维细胞L929为24、487、2 h,采用MTT法检测成纤维细胞L929生长抑制率;West-ern blot分析法检测小鼠成纤维细胞L929中磷酸化的eIF4E、eIF4E-BP1和Caspase-3表达。结果在同一作用时间,随着苦参碱浓度的增加,小鼠成纤维细胞L929生长抑制率增加,差异有显著性（F=31.41~41.55,P〈0.01）;同一浓度的苦参碱随着作用时间延长,细胞生长抑制率无明显变化。苦参碱作用24 h后,小鼠成纤维细胞L929磷酸化的eIF4E和eIF4E-BP1表达降低,Caspase-3表达增加,差异有显著性（t=9.79~13.32,P〈0.01）。结论苦参碱能诱导小鼠成纤维细胞L929的凋亡,其作用是通过eIF4E、eIF4E-BP1和Caspase-3途径实现的。