PS-341对人大肠癌细胞LoVo,SW480中NF-κB、uPA表达的影响及其与侵袭力的关系

目的观察人大肠癌细胞LoVo、SW480中真核细胞转录因子-κB(NF-κB)、尿激酶型血浆纤溶酶原激活因子(uPA)的表达差异及硼替佐米(bortezomib,PS-341)对其表达的影响及其与侵袭力的关系。方法实验分为4组:对照组(无血清)、血清组(10%FCS)、PS-341组[10%FCS+PS-341(4ng/mL)]、PDTC(NF-κB抑制剂)组[10%FCS+PDTC(10-2 mol/L)]。Western-blot测定人大肠癌细胞LoVo、SW480中NF-κB、uPA的蛋白表达水平;Brdu ELISA法测定细胞增殖活性;Boyden小室培养测定细胞的迁移。结果 (1)与SW480细胞比较,血清组中LoVo细胞总NF-κB、核内NF-κB和uPA表达、细胞增殖及细胞迁移率均显著增高(P<0.05);(2)与对照组比较,血清组中2种细胞总NF-κB、核内NF-κB和uPA表达、细胞增殖及细胞迁移率均显著增高(P<0.05),其中LoVo细胞较SW480细胞增高更为显著(P<0.01);(3)与血清组比较,PS-341组与PDTC组中2种细胞总NF-κB、核内NF-κB和uPA表达、细胞增殖及细胞迁移率均显著降低(P<0.05),且LoVo细胞较SW480细胞降低更为显著(P<0.01);(4)与PS-341组比较,PDTC组中2种细胞总NF-κB、核内NF-κB和uPA表达、细胞增殖及细胞迁移均未见明显差别。结论 LoVo细胞较SW480细胞NF-κB、uPA呈高水平表达,其侵袭力高于SW480细胞可能与此有关;LoVo、SW480细胞uPA表达可能受NF-κB调控;PS-341可能通过降低NF-κB、uPA表达抑制LoVo、SW480细胞增殖与迁移;对LoVo细胞侵袭力抑制率高于SW480细胞可能与其对2种细胞NF-κB活性抑制程度不同有关。

PI3K、NF-κB p65蛋白在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、真核细胞转录因子κB(NF-κB)p65蛋白在宫颈癌组织中的表达及其临床意义。方法选取宫颈癌患者62例作为研究对象,提取宫颈癌组织及癌旁组织,采用免疫组织化学染色法检测PI3K和NF-κB p65蛋白的表达情况,对比宫颈癌组织和癌旁组织中REG4蛋白和Sp1蛋白阳性情况,分析PI3K和NF-κB p65蛋白表达与宫颈癌临床病理参数的相关性。结果宫颈癌组织中PI3K、NF-κB p65蛋白阳性表达率为62.90%和69.35%,癌旁正常组织中无阳性表达,两组比较,P<0.05。不同年龄、病理分型、肿瘤直径患者的PI3K、NF-κB p65蛋白阳性表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);FIGOⅢ~Ⅳ期患者PI3K和NF-κB p65阳性表达率为76.92%和82.05%,高于FIGOⅠ~Ⅱ期患者的39.13%和47.83%(P<0.05);不同分化程度患者PI3K和NF-κB p65阳性表达率从高到低依次为低分化(83.33%,94.44%)、中分化(61.11%,63.89%)、高分化(25.00%,37.5%)(P<0.05);淋巴结转移患者的PI3K和NF-κB p65阳性表达率分别为86.96%和95.65%,高于无淋巴结转移患者的48.72%和53.85%(P<0.05);相关性分析显示,宫颈癌患者的PI3K和NF-κB p65表达水平与FIGO分期、淋巴结转移呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05)。结论宫颈癌组织中PI3K、NF-κB p65蛋白阳性表达率均高于癌旁正常组织,并与FIGO分期、淋巴结转移呈正相关,与分化程度呈负相关,对于宫颈癌诊治具有一定的临床意义。

PS-341对人乳腺癌MDA-MB231细胞uPA、NF-κB表达的影响及其与增殖迁移的关系

目的研究硼替佐米(bortezomib,PS-341)对人乳腺癌MDA-MB231细胞真核细胞转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、尿激酶型血浆纤溶酶原激活因子(uPA)表达的影响及其与增殖迁移的关系。方法 BRDU ELISA法测定细胞增殖活性;Boyden小室培养测定细胞的迁移;Western-blotting测定细胞uPA表达、NF-κB磷酸化水平。结果 1)与对照组(无血清培养基组)相比,血清组(FCS组)呈浓度依赖性促进细胞增殖;当FCS浓度为1%时,细胞增殖明显增加(P<0.05);当FCS浓度为5%时,细胞增殖更为显著(P<0.01)。2)与5%FCS组相比,PS-341呈浓度依赖性抑制细胞增殖活性,PS-341浓度为4ng/mL时细胞增殖活性显著下降(P<0.05)。3)与对照组相比,5%FCS组细胞迁移率明显升高(P<0.05);PS-341呈浓度依赖性抑制5%FCS诱导细胞的迁移,与5%FCS组相比PS-341浓度为4ng/mL时其迁移率显著下降。4)与5%FCS组相比,PS-341为4ng/mL时细胞uPA表达、总NF-κB、核NF-κB水平均明显降低(P<0.05);NF-κB特异性抑制剂PDTC(10μmol/L)能显著降低5%FCS诱导的总NF-κB、核NF-κB水平(P<0.05),但对uPA表达无影响。5)PS-341(4ng/mL)能明显降低5%FCS诱导细胞的增殖与迁移;与PDTC(10μmol/L)相比,两者差异均无统计学意义。结论 PS-341抑制MDA-MB231细胞uPA、NF-κB表达及增殖与迁移;PS-341降低MDA-MB231细胞侵袭力可能与其抑制NF-κB、uPA表达有关。

酵母双杂交系统的原理及应用

0引言 蛋白质和蛋白质的相互作用是很多生命现象的基础.随着分子生物学技术的发展,特别是人类基因组计划的完成,使人类对基因的结构和功能的认识不断加深,但基因编码的蛋白质的功能研究尚是一个难题.酵母双杂交(yeast two hybrid)技术是利用酵母遗传学方法分析蛋白质之间的相互作用,该方法建立以来,经过不断的完善和发展,不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用,更重要的在于发现新的与已知蛋白相互作用的未知蛋白.

Pim-3与NF-κB在乳腺浸润性导管癌中的表达及相关性研究

目的探讨Pim-3与NF-κB在乳腺浸润性导管癌发病中的作用。方法用免疫组织化学技术SP法,检测Pim-3与NF-κB在75例乳腺浸润性导管癌、21例乳腺导管内癌及30例正常乳腺组织中的表达,分析它们与乳腺癌临床病理因素的关系及两者的相关性。结果在乳腺浸润性导管癌中Pim-3的阳性表达率为77.3%、NF-κB为68.0%,在乳腺导管内癌中Pim-3的阳性表达率为52.4%、NF-κB为42.9%,在正常乳腺组织中Pim-3的阳性表达率为23.3%、NF-κB为16.7%。Pim-3阳性表达率与肿瘤直径、组织学分级、临床病理分期,NF-κB阳性表达率与肿瘤直径、组织学分级、淋巴结转移有相关性。Spearmen秩相关分析,乳腺癌中Pim-3的阳性表达与NF-κB阳性表达呈正相关(r=0.243)。结论 Pim-3与NF-κB在乳腺癌的发生、发展中具有重要的促进作用,其阳性表达对预后的判断具参考作用。