真核翻译起始因子4G1在老年子宫内膜样癌患者中表达及临床意义

目的 检测真核翻译起始因子(eIF)4G1在老年子宫内膜样癌患者组织中的表达,并分析其与子宫内膜样癌临床病理参数的关系。方法 分别采取实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测eIF4G1 mRNA表达,免疫组化PV-6000法及Western免疫印迹检测eIF4G1蛋白表达水平。统计学方法分析eIF4G1表达与子宫内膜样癌临床病理学参数的关系。结果 免疫组化结果表明,eIF4G1在正常子宫内膜、非典型增生子宫内膜和子宫内膜样癌组织中阳性率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。eIF4G1表达水平与子宫内膜样癌组织分化程度、FIGO分期、肌层浸润深度及脉管癌栓显著相关(P均<0.05)。子宫内膜样癌组织中eIF4G1 mRNA及蛋白表达均明显高于癌旁内膜组织(P<0.05)。结论 eIF4G1在子宫内膜样癌中表达上调,且其表达水平与子宫内膜样癌的恶性生物学行为相关。eIF4G1有望成为子宫内膜样癌疾病诊断与靶点治疗的重要新型生物标志物。

真核翻译起始因子4G1与恶性肿瘤的研究进展

真核翻译起始因子4G1(eIF4G1)是一种大型支架蛋白,在真核生物mRNA翻译起始过程中,可作为蛋白质的对接位点,介导帽依赖性与非帽依赖性翻译启动。eIF4G1是翻译调控中的重要靶标,被认为参与多种肿瘤细胞的生长、迁移、增殖、侵袭和凋亡。近年来,随着对eIF4G1研究的深入,临床对其作用和功能也有了更深的理解,本文总结相关文献,对eIF4G1的功能、研究现状及与肿瘤的关系做一简要综述。

真核翻译延伸因子1家族成员在肺腺癌发生发展中的作用

目的基于公共数据库,分析真核翻译延伸因子1(EEF1)家族成员在肺腺癌中的作用和机制。方法利用UCSC Xena下载癌症基因组图谱项目的人类肺腺癌转录组表达数据,并通过临床蛋白质组肿瘤分析联盟数据库下载人类肺腺癌蛋白质表达数据,通过Mann-Whitney U检验分析EEF1D、EEF1A1和EEF1A2基因和蛋白表达水平及其与临床变量间的相关性,应用Kaplan-Meier生存分析检测EEF1D、EEF1A1、EEF1A2对肺腺癌总生存期的影响。利用单样本基因集富集分析算法探讨EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达水平与肿瘤免疫细胞浸润的关系,采用Spearman和Pearson相关分析评估EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路的相关性。采用免疫组织化学方法分析肺腺癌(n=75)和癌旁组织(n=75)中EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达水平。结果EEF1D、EEF1A1、EEF1A2基因和蛋白的表达水平在肺腺癌和非癌组织间的差异均有统计学意义(P均<0.001)。EEF1A1蛋白高表达患者的总生存期预后较差(P=0.039),EEF1A2蛋白高表达患者的总生存期预后较好(P=0.012),在一些临床病理特征上,患者的EEF1D基因表达水平与总生存期的预后有关。EEF1D、EEF1A1、EEF1A2表达水平与多种免疫细胞浸润和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路中的关键基因表达显著相关。结论EEF1D、EEF1A1、EEF1A2与肺腺癌进展相关,为肺腺癌候选的预后相关标志分子。

新型冠状病毒Nsp1基因真核表达载体的构建及对宿主蛋白质翻译的影响

非结构蛋白1(Non-structural protein 1,Nsp1)作为新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)的毒力决定因子,在调控冠状病毒复制方面有重要作用。为更有效地研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的生物学功能,成功构建SARS-CoV-2Nsp1基因的真核表达载体,并验证其抑制宿主及外源蛋白质翻译的功能。通过PCR技术扩增SARS-CoV-2Nsp1基因后,利用同源重组技术将其连接至pEGFP-N1载体上。经双酶切和测序结果鉴定,SARS-CoV-2Nsp1基因成功克隆至pEGFP-N1载体上。将重组质粒pEGFP-N1-SARS-CoV-2-Nsp1转染至HEK-293T细胞和HeLa细胞中,经嘌呤霉素标记后,利用Western Blot和考马斯亮蓝染色检测重组质粒的表达以及嘌呤霉素信号。结果表明,重组质粒pEGFP-N1-SARS-CoV-2-Nsp1在HEK-293T细胞和HeLa细胞中成功表达,并验证其抑制宿主蛋白质和外源转入细胞蛋白质的翻译,为更深入研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的功能奠定基础。

真核翻译起始因子4γ2调控N-乙酰氨基半乳糖转移酶1 mRNA对胃癌细胞恶性表型的影响

目的探讨真核翻译起始因子4γ2(EIF4G2)通过调控N-乙酰氨基半乳糖转移酶1(GALNT1)mRNA对胃癌进展的影响。方法通过生物信息数据库分析GALNT1、EIF4G2在胃癌细胞和胃癌组织中的表达及与胃癌患者预后的关系,并分析胃癌组织中EIF4G2、GALNT1表达的相关性。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测GALNT1 mRNA、EIF4G2 mRNA在人胃黏膜上皮细胞GES-1和人胃癌细胞(AGS细胞等)中的表达水平,并采用蛋白质印迹法(Western blot)检测GALNT1、EIF4G2蛋白表达水平。建立干扰GALNT1和过表达EIF4G2的AGS细胞株,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,采用TUNEL实验检测细胞凋亡能力,采用划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力,采用Western blot检测凋亡和转移相关蛋白表达水平,采用RIP实验和RNA下拉实验检测GALNT1 mRNA与EIF4G2的结合关系。结果胃癌组织和胃癌细胞中的GALNT1、EIF4G2水平分别高于正常组织和人胃黏膜上皮细胞,差异有统计学意义(P<0.001),且与胃癌患者预后差相关;胃癌组织中,EIF4G2表达与GALNT1表达呈正相关。敲低GALNT1后,AGS细胞活力降低,克隆形成数、迁移和侵袭细胞数减少,凋亡细胞数增加,Bcl-2、MMP2、MMP9蛋白表达降低,Bax、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达增加,差异有统计学意义(P<0.001)。EIF4G2可与GALNT1 mRNA结合,促进GALNT1 mRNA、GALNT1蛋白表达及GALNT1 mRNA稳定性,差异有统计学意义(P<0.001)。共转染sh-GALNT1-1与oe-EIF4G2可逆转sh-GALNT1-1对AGS细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。结论EIF4G2可通过稳定GALNT1 mRNA促进胃癌细胞增殖、迁移、侵袭并抑制细胞凋亡,其或可成为胃癌临床诊疗的新靶点。

真核翻译延伸因子1A2及真核延长因子1A2在肿瘤中的作用

癌基因一般是信号传导通路中重要的基因或细胞表面受体激酶，以往的研究主要集中在这些调节基因，相对忽略了管家基因（翻译因子、转录因子和一些维持细胞最基本功能的酶等）可能具有的致癌作用。通常认为管家基因蛋白水平和功能相对稳定保守，主要维持细胞基本结构和功能。

真核翻译延伸因子1A蛋白家族功能位点的进化踪迹分析

真核翻译延伸因子1A(eEF1A)是真核生物蛋白质翻译过程中能将氨酰tRNA运送到核糖体A位点参与多肽延伸反应的多功能蛋白质.本文主要利用多种生物信息学分析工具进行地中海涡虫翻译延伸因子1A(SmEF1A)蛋白序列的查找与eEF1A直系同源蛋白的搜索,并基于90条直系同源蛋白进行eEF1A蛋白家族的进化踪迹分析和SmEF1A蛋白功能位点的比较研究.结果表明,在eEF1A蛋白家族中共识别到338个踪迹残基位点和20个踪迹残基富集区域,SmEF1A蛋白的功能位点与踪迹残基位点密切相关,与GTP/Mg2+结合相关的S21、T72、D91、G94等重要位点均为全家族保守的踪迹残基,N-糖基化、磷酸化等蛋白修饰位点中踪迹残基位点往往是被修饰的部位或修饰功能发挥的关键辅助位点,而位于分子表面的配基结合口袋则与20个踪迹残基富集区域在分子表面形成的踪迹残基簇关系密切.eEF1A蛋白家族的进化踪迹分析为eEF1A蛋白重要功能区域关键残基的确定和未知功能位点的预测提供了重要信息.

真核翻译延伸因子eEF1A功能研究进展

总结了近年来对于真核翻译延伸因子eEFlA生物学功能和作用机制研究的一些新进展,具体包括:eEFlA参与介导受损或错误折叠的蛋白质的降解;对微丝、微管骨架系统的组织与调控;参与调控细胞凋亡;参与细胞核输出氨酰-tRNA;与病毒基因组和RNA依赖性RNA聚合酶类(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP)互作,参与病毒繁殖.阐述了对eEFlA进行研究的意义和价值,并提供了新的见解和展望.

长链非编码RNA肿瘤蛋白翻译调节因子1-反义RNA1在神经胶质瘤细胞中的表达及对其增殖和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肿瘤蛋白翻译调节因子1-反义RNA1(TPT1-AS1)对神经胶质瘤细胞U251增殖、侵袭的影响。方法将U251分为空白对照组、阴性转染组、TPT1-AS1过表达组,空白对照组不做处理,另两组进行相应质粒的转染,转染48 h后比较各组U251细胞中TPT1-AS1表达水平;MTT法测定各组U251细胞的存活率;流式细胞仪测定各组U251细胞的凋亡能力;Transwell小室实验检测各组U251细胞侵袭能力;划痕实验检测各组U251细胞迁移能力;Western blot检测各组U251细胞凋亡[半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bax、Bcl-2]及侵袭[基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9]相关蛋白表达情况。结果阴性对照组与空白对照组比较,TPT1-AS1表达、细胞存活率、细胞凋亡率、侵袭细胞数、划痕愈合率及Caspase-3、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达,差异无统计学意义(P>0.05)。TPT1-AS1过表达组TPT1-AS1表达水平、细胞凋亡能力、Caspase-3、Bax蛋白表达均高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);TPT1-AS1过表达组Bcl-2蛋白表达、细胞存活率、侵袭、迁移能力、侵袭相关蛋白表达均低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TPT1-AS1在U251中呈现低表达,高表达的TPT1-AS1可抑制神经胶质瘤细胞的增殖及侵袭能力。

真核翻译延伸因子eEF1A1在卵巢癌中表达升高及其与临床病理相关性

上皮性卵巢癌是妇科恶性肿瘤中致死率最高的肿瘤。研究卵巢癌早期诊断、化疗耐药相关的的生物标志物和治疗靶点对提高卵巢癌患者生存率有重要意义。真核翻译延伸因子1α1（eukaryotic translation elongation factor 1A1,eE F1A1）参与肽链延伸、蛋白质翻译后修饰及细胞骨架调节等功能,在细胞增殖、凋亡以及肿瘤细胞侵袭和转移等方面均发挥了重要作用。

真核翻译延伸因子eEF1A功能研究进展

延伸因子(Elongation factors,EF)是在m RNA翻译时促进多肽链延伸的蛋白质因子,在原核生物和真核生物中并不相同。原核延伸因子分为EF-Tu、EF-Ts及EF-G3种,主要在原核细胞翻译时发挥作用。

翻译延伸因子1A的研究进展

翻译延伸因子1A(EF1α)是一个主要的翻译因子,EF1α.GTP催化氨酰tRNA结合到核糖体的A位点。EF1α不仅仅是翻译必须的蛋白,而且是一个重要的多功能蛋白。EF1α参与许多重要的细胞过程和疾病,包括信号传导、翻译控制、凋亡、细胞骨架组成、病毒复制及癌基因转化等。

新城疫病毒在感染早期通过Akt/mTOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1通路激活宿主真核翻译起始因子eIF4E的研究

为阐明新城疫病毒(NDV)在感染宿主细胞后对宿主真核翻译起始因子以及相关调控通路的调节作用,本实验采用western blot检测NDV感染He La细胞早期真核翻译起始因子e IF4F的磷酸化水平以及Akt/m TOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1调控通路的活化情况,同时用紫外线(UV)灭活的NDV进行对照试验。结果显示,NDV感染He La早期能够迅速诱导真核起始因子e IF4E的磷酸化,而UV灭活NDV作用的细胞则无此现象。通过对相关调控通路的检测发现,NDV在感染早期对e IF4E的磷酸化是通过激活p38/Erk/Mnk1通路实现的。此外,NDV感染还可以激活Akt/m TOR/4E-BP1通路,诱导e IF4E阻遏蛋白4E-BP1发生磷酸化并解离出e IF4E,从而促进e IF4F复合体的形成,确保真核翻译的进行。该结果对深入解析NDV与宿主之间的相互作用以及翻译相关信号通路参与调控病毒复制的机制具有重要意义。

突变低氧诱导因子1_α基因真核表达载体的构建和表达

目的构建人低氧诱导因子-1α(HIF-1α)真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α的两种突变体pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala和pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala-803Ala,并检测它们在人肺微血管内皮细胞(HMVECs)中的表达。方法用定点突变的方法将pcDNA3.1+-HIF-1α的HIF-1α第564位脯氨酸(Pro)密码子CCC突变为丙氨酸(Ala)密码子GCC,构建成单个突变HIF-1α真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala。在第一次突变的基础上,仍然用定点突变的方法将pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala的HIF-1α-564Ala第803位天冬酰胺(Asn)密码子ATT突变为丙氨酸(Ala)密码子GCT,构建成双个点突变HIF-1α真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala-803Ala。将3种HIF-1α表达载体用脂质体法分别转入HMVECs,以RT-PCR、免疫荧光法和Westernblotting法分别对转染细胞进行表达分析。结果测序证实,定点突变成功,构建成重组真核表达载体pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala和pcDNA3.1+-HIF-1α-564Ala-803Ala;3种载体均能表达相应的蛋白和mRNA,但转化突变HIF-1α表达载体的细胞蛋白量比空白细胞和转化无突变HIF-1α载体的细胞显著增加。结论成功构建能够在HMVECs中表达的单个和双个点突变的HIF-1α基因的真核表达载体。

溃疡性结肠炎中真核细胞翻译起始因子A1和血管内皮生长因子表达及意义

目的检测溃疡性结肠炎患者血清及组织中真核细胞翻译起始因子(EIF) 4A1和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,分析其临床意义。方法以93例溃疡性结肠炎患者作为观察组,留取患者的空腹静脉血(观察组1)及肠镜咬检组织(观察组2),以25例体检证实为无明显器质性病变的成人血清标本作为对照组1,选择因非肿瘤性肠梗阻切除的切缘正常的结肠黏膜组织25例作为对照组2。应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测观察组1和对照组1血清中EIF4A1和VEGF的表达,应用免疫组化方法检测观察组2和对照组2组织中EIF4A1和VEGF的表达。结果观察组1和对照组1血清中EIF4A1的表达差异无统计学意义(P>0. 05),观察组1血清中VEGF的表达量明显高于对照组1(P<0. 01)。观察组1血清中EIF4A1和VEGF的表达量与病变时间、有无并发症密切相关,VEGF的表达量与是否复发密切相关。观察组2组织中EIF4A1和VEGF的表达明显高于对照组2,观察组2中EIF4A1和VEGF表达阳性率与病变时间、有无并发症及是否复发密切相关。相关分析显示观察组1血清中EIF4A1和VEGF表达无明显相关性(P>0. 05),观察组2组织中EIF4A1和VEGF的表达呈正相关(P<0. 05)。结论溃疡性结肠炎组织中EIF4A1和VEGF表达升高,二者有一定的协同作用,血清中VEGF升高明显,EIF4A1和VEGF对促进病变的形成和进展有明显作用。

真核翻译起始因子4G1在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨真核翻译起始因子4G1(eukaryotic translation initiation factor 4 gamm 1,EIF4G1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及意义。方法收集接受手术治疗的NSCLC患者81例(男性49例,女性32例),应用实时定量聚合酶链反应(PCR)和免疫组织化学方法检测癌组织及配对癌旁组织中EIF4G1mRNA和蛋白的表达,分析其在NSCLC癌组织中的表达特点及与患者临床病理特征的关系。结果 EIF4G1 mRNA在NSCLC癌组织中的表达(6. 92±1. 87)明显低于癌旁组织(8. 33±1. 69)(t=7. 01,P<0. 001)。将NSCLC分为3种不同病理类型:鳞癌、腺癌和其他类型,EIF4G1 mRNA在各组表达差异均具有统计学意义(P<0. 05)。EIF4G1mRNA在低分化癌组织中的表达水平(8. 90±1. 33)明显高于在中分化(1. 70±0. 17)和高分化(0. 84±0. 15)癌组织(F=14. 04,P<0. 001)。EIF4G1 mRNA在Ⅳ期癌组织中的表达(15. 42±3. 99)明显高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期癌组织(分别为1. 67±0. 37、2. 96±0. 77、5. 44±0. 99)(F=11. 84,P<0. 001)。不同年龄、性别和病理类型EIF4G1 mRNA表达水平均未见明显差异(均P>0. 05)。Logistic回归分析显示EIF4G1高表达与NSCLC癌细胞分化程度密切相关(OR=23. 74,P<0. 001)。免疫组化结果显示EIF4G1在低分化癌组织中的蛋白表达水平明显高于中分化和高分化癌组织(P<0. 05)。结论 EIF4G1在NSCLC中特异性高表达,且其表达强度与癌细胞的分化程度密切相关。

人类真核延伸因子1A2与生长因子受体结合蛋白2在胰腺癌组织中的表达及临床病理意义

目的:探讨人类真核延伸因子1A2(eukaryotic elongation factor 1A2,EEF1A2)和生长因子受体结合蛋白2(growth factor receptor-bound 2,GRB2)在胰腺癌组织中的表达、相互关系及临床病理意义.方法:应用免疫组织化学方法检测97胰腺癌及其周边胰腺组织中EEF1A2和GRB2蛋白表达情况.结果:EEF1A2蛋白在胰腺癌周边组织中不表达,但在77.8%(76/97)的胰腺癌组织中表达阳性.EEF1A2的异常表达与胰腺癌周边淋巴结转移(χ2=4.28,P=0.039)和神经浸润显著相关(χ2=4.11,P=0.043).GRB2蛋白在胰腺癌和周边胰腺组织中阳性表达率分别为82.5%(80/97)和30.2%(31/97),胰腺癌组织中GRB2蛋白阳性率显著高于周边胰腺组织(χ2=48.5,P<0.001).GRB2阳性表达率与淋巴结转移显著相关(χ2=4.63,P=0.031).胰腺癌中EEF1A2和GRB2表达具有显著等级正相关(rs=0.451,P<0.001).结论:EEF1A2和GRB2的表达与胰腺癌的生物学行为密切相关,且两者之间的表达强度具有显著等级正相关.

肝细胞癌中真核延伸因子1A2的表达及意义

【目的】探讨真核延伸因子1A2(eEF1A2)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其临床病理意义。【方法】收集104例HCC患者的临床病理资料,利用组织芯片对其癌及癌旁肝组织进行免疫组化检测,应用统计学方法分析eEF1A2在这些组织中的表达水平及与患者临床病理特征的关系。【结果】免疫组化结果显示:56.7%肝癌组织中eEF1A2高表达(eEF1A2++,eEF1A2+++),而仅13.5%的癌旁肝组织呈高表达,差异具有统计学意义(P=0.014)。eEF1A2的表达与乙肝病毒感染(P=0.030)和复发(P=0.012)相关。Kaplan-Meier分析表明:eEF1A2高表达患者的总体生存时间(P=0.024)和无复发生存时间(P=0.023)较eEF1A2低表达患者更长。多因素Cox回归分析提示:eEF1A2表达为影响HCC患者总体生存的独立危险因素(P=0.038)。【结论】HCC中eEF1A2蛋白表达增高,与肝癌患者术后复发和预后相关,eEF1A2可以作为判断肝癌患者预后的潜在分子标志物。

真核翻译延长因子1A2对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长和血管形成作用的研究

背景:人类真核翻译延伸因子1A2(EEF1A2)是一种管家基因,可能作为一种新的潜在癌基因,参与肿瘤的发生、发展。目的:探讨EEF1A2对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长和血管形成的作用。方法:以聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因片段,应用基因重组技术构建Ad5/F35-EEF1A2重组腺病毒载体。15只裸鼠建立人胰腺癌移植瘤模型,随机分为对照组、绿色荧光蛋白(GFP)组和EEF1A2组,分别注射PBS0.1ml、Ad5/F35-GFP0.1ml(1×108PFU)和Ad5/F35-EEF1A20.1ml(1×108PFU)。测定各组肿瘤体积和质量,应用免疫组化方法检测各组增殖细胞核抗原(PCNA)和CD31的表达。结果:成功构建了表达EEF1A2的重组腺病毒载体。与对照组和GFP组相比,EEF1A2组裸鼠肿瘤体积和质量显著增加(P<0.05),PCNA和CD31表达显著增高(P<0.05)。结论:EEF1A2可显著促进人胰腺癌裸鼠移植瘤生长,细胞增殖和肿瘤血管形成可能是其重要作用机制。

拟南芥翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位研究

探讨了拟南芥的翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位.以Col野生型拟南芥的cDNA为模板,通过高保真KOD扩增酶获得2 363bp的拟南芥转录延伸因子EF1A基因片段,将其与GFP融合后共同连入p1300表达载体,利用农杆菌侵染法将p35S∶GFP和p35S∶EF1A∶∶GFP转入野生型拟南芥中,观察转基因植物细胞中GFP的表达情况.结果显示:p35S∶GFP转基因植物中,细胞核中GFP荧光强度显著高于细胞质中荧光强度,但是在p35S∶EF1A∶∶GFP转基因植物中,细胞核中荧光强度与细胞质中荧光强度无显著差异,说明在进行蛋白翻译时细胞质中的EF1A含量显著高于细胞核中,这也为翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位提供了实验依据.