真核翻译起始因子4G1在老年子宫内膜样癌患者中表达及临床意义

目的 检测真核翻译起始因子(eIF)4G1在老年子宫内膜样癌患者组织中的表达,并分析其与子宫内膜样癌临床病理参数的关系。方法 分别采取实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测eIF4G1 mRNA表达,免疫组化PV-6000法及Western免疫印迹检测eIF4G1蛋白表达水平。统计学方法分析eIF4G1表达与子宫内膜样癌临床病理学参数的关系。结果 免疫组化结果表明,eIF4G1在正常子宫内膜、非典型增生子宫内膜和子宫内膜样癌组织中阳性率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。eIF4G1表达水平与子宫内膜样癌组织分化程度、FIGO分期、肌层浸润深度及脉管癌栓显著相关(P均<0.05)。子宫内膜样癌组织中eIF4G1 mRNA及蛋白表达均明显高于癌旁内膜组织(P<0.05)。结论 eIF4G1在子宫内膜样癌中表达上调,且其表达水平与子宫内膜样癌的恶性生物学行为相关。eIF4G1有望成为子宫内膜样癌疾病诊断与靶点治疗的重要新型生物标志物。

真核翻译起始因子4G1与恶性肿瘤的研究进展

真核翻译起始因子4G1(eIF4G1)是一种大型支架蛋白,在真核生物mRNA翻译起始过程中,可作为蛋白质的对接位点,介导帽依赖性与非帽依赖性翻译启动。eIF4G1是翻译调控中的重要靶标,被认为参与多种肿瘤细胞的生长、迁移、增殖、侵袭和凋亡。近年来,随着对eIF4G1研究的深入,临床对其作用和功能也有了更深的理解,本文总结相关文献,对eIF4G1的功能、研究现状及与肿瘤的关系做一简要综述。

真核翻译起始因子4G1在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨真核翻译起始因子4G1(eukaryotic translation initiation factor 4 gamm 1,EIF4G1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及意义。方法收集接受手术治疗的NSCLC患者81例(男性49例,女性32例),应用实时定量聚合酶链反应(PCR)和免疫组织化学方法检测癌组织及配对癌旁组织中EIF4G1mRNA和蛋白的表达,分析其在NSCLC癌组织中的表达特点及与患者临床病理特征的关系。结果 EIF4G1 mRNA在NSCLC癌组织中的表达(6. 92±1. 87)明显低于癌旁组织(8. 33±1. 69)(t=7. 01,P<0. 001)。将NSCLC分为3种不同病理类型:鳞癌、腺癌和其他类型,EIF4G1 mRNA在各组表达差异均具有统计学意义(P<0. 05)。EIF4G1mRNA在低分化癌组织中的表达水平(8. 90±1. 33)明显高于在中分化(1. 70±0. 17)和高分化(0. 84±0. 15)癌组织(F=14. 04,P<0. 001)。EIF4G1 mRNA在Ⅳ期癌组织中的表达(15. 42±3. 99)明显高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期癌组织(分别为1. 67±0. 37、2. 96±0. 77、5. 44±0. 99)(F=11. 84,P<0. 001)。不同年龄、性别和病理类型EIF4G1 mRNA表达水平均未见明显差异(均P>0. 05)。Logistic回归分析显示EIF4G1高表达与NSCLC癌细胞分化程度密切相关(OR=23. 74,P<0. 001)。免疫组化结果显示EIF4G1在低分化癌组织中的蛋白表达水平明显高于中分化和高分化癌组织(P<0. 05)。结论 EIF4G1在NSCLC中特异性高表达,且其表达强度与癌细胞的分化程度密切相关。

乳腺浸润性导管癌患者术后癌组织中真核翻译起始因子4e、3h和富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体5表达特征

目的检测乳腺浸润性导管癌患者术后癌组织中真核翻译起始因子(EIF)4e、3h和富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体(LGR)5的表达及其相关性。方法 132例乳腺浸润性导管癌术后组织蜡块及临床资料为研究组,经病理证实为正常乳腺小叶和导管上皮组织85例为对照组,选择EIF4e、3h和LGR5的多克隆性抗体,应用免疫组化SP法检测3种蛋白的表达。结果研究组EIF4e、3h和LGR5表达阳性率明显高于对照组,研究组EIF4e、3h和LGR5表达与肿瘤最大径、脉管浸润、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和Ki67的表达均具有相关性,EIF4e表达与淋巴结转移相关。研究组EIF4e和3h、EIF3h和LGR5表达正相关。结论乳腺浸润性导管癌患者术后组织中EIF4e、3h和LGR5高表达且具有协同作用,三者参与肿瘤的发生和进展,术后联合检测EIF4e、3h和LGR5的表达可能对判断预后有一定价值。

新城疫病毒在感染早期通过Akt/mTOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1通路激活宿主真核翻译起始因子eIF4E的研究

为阐明新城疫病毒(NDV)在感染宿主细胞后对宿主真核翻译起始因子以及相关调控通路的调节作用,本实验采用western blot检测NDV感染He La细胞早期真核翻译起始因子e IF4F的磷酸化水平以及Akt/m TOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1调控通路的活化情况,同时用紫外线(UV)灭活的NDV进行对照试验。结果显示,NDV感染He La早期能够迅速诱导真核起始因子e IF4E的磷酸化,而UV灭活NDV作用的细胞则无此现象。通过对相关调控通路的检测发现,NDV在感染早期对e IF4E的磷酸化是通过激活p38/Erk/Mnk1通路实现的。此外,NDV感染还可以激活Akt/m TOR/4E-BP1通路,诱导e IF4E阻遏蛋白4E-BP1发生磷酸化并解离出e IF4E,从而促进e IF4F复合体的形成,确保真核翻译的进行。该结果对深入解析NDV与宿主之间的相互作用以及翻译相关信号通路参与调控病毒复制的机制具有重要意义。

EIF4G1对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响

目的探讨真核翻译起始因子4G1(EIF4G1)在子宫内膜癌(EC)组织中的表达,以及对EC细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法首先采用实时定量PCR和免疫组化检测20例EC患者中肿瘤组织以及对应癌旁正常组织中EIF4G1 mRNA相对表达量和EIF4G1蛋白的阳性表达率。然后体外构建人EC细胞系Ishikawa中EIF4G1过表达质粒和对照质粒(pCMV6)、低表达质粒和对照质粒(PLKO.1),Lipofectamine^(TM)2000转染试剂转染,Western blot法筛选EIF4G1蛋白稳定表达的细胞系,实验分为5组:空白对照组、过表达组、过表达对照组、低表达组和低表达对照组。MTT法检测细胞增殖率,Transwell法检测细胞侵袭数目,划痕实验检测细胞迁移距离,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果与癌旁正常组织相比,肿瘤组织中EIF4G1 mRNA相对表达量及其蛋白的阳性表达率均增加(P<0.05)。与空白对照组相比,过表达组EIF4G1蛋白表达增加,而低表达组EIF4G1蛋白表达降低(均P<0.05)。与空白对照组和过表达对照组相比,过表达组细胞增殖率明显升高,细胞侵袭数目和迁移距离增加,凋亡率下降(均P<0.05);与空白对照组和低表达对照组相比,低表达组增殖率明显降低,细胞侵袭数目和迁移距离下降,凋亡率升高(均P<0.05)。结论EIF4G1可能作为促癌基因参与EC的发生,并调控细胞的恶性生物学行为,EIF4G1有望成为EC的靶向干预位点。

真核翻译起始因子4E

真核翻译起始因子4E（eukaryotictranslationini—tiationfactor4E，eIF4E）在肿瘤形成和进展过程中起重要作用。目前，直接或间接针对eIF4E的治疗药物的研究已取得很大进展。深入了解elF4E的功能及其在翻译起始阶段调节肿瘤形成的作用，为更好地研制新型有效的抗肿瘤药物提供理论依据。

鼠源eIF4A1基因克隆及其原核/真核表达鉴定

【目的】克隆昆明小鼠真核生物翻译起始因子4A1基因(eIF4A1)并构建其原核/真核表达载体,探究其结构和生物学特性,为在体内外鉴定eIF4A1互作蛋白网络打下基础。【方法】以昆明小鼠脑组织总RNA反转录合成的cDNA为模板,PCR扩增鼠源eIF4A1基因编码区(CDS)序列,然后克隆到pGEX-4T-1和pcDNA3.0载体上分别构建原核/真核表达载体;利用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞对原核表达载体进行诱导表达、纯化及鉴定;同时以真核表达载体转染HEK-293T细胞,通过Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测eIF4A1蛋白在HEK-293T细胞内的表达及分布情况;并以ProtParam、ProtScale、TMHMM-2.0、SignalP-5.0、SOPMA和SWISS-MODEL等在线软件对鼠源eIF4A1蛋白进行生物学信息分析。【结果】鼠源eIF4A1基因CDS序列长1221 bp,克隆到pGEX-4T-1载体能成功构建原核表达载体pGEX-4T-eIF4A1-Flag,在25和30℃下经0.5 mmol/L IPTG诱导均能大量表达出融合蛋白eIF4A1-Flag,且主要以包涵体形式存在。将鼠源eIF4A1基因克隆至pcDNA3.0载体成功构建获得真核表达载体pcDNA3.0-eIF4A1-Flag,以其转染HEK-293T细胞后,eIF4A1蛋白在HEK-293T细胞中成功表达,且主要分布在细胞质中。生物信息学分析结果表明,eIF4A1蛋白相对分子量为46.15408 kD,理论等电点(pI)为5.267,含有407个氨基酸残基;属于不稳定的亲水性非分泌蛋白,无跨膜结构,也没有信号肽,其二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。鼠源eIF4A1蛋白的主要互作蛋白有10个,除eIFs家族蛋白外,还包括Paip1和Pdcd4互作蛋白。【结论】eIF4A1主要是分布在细胞质,为不稳定的亲水性非分泌蛋白,无跨膜结构和信号肽,通过构建原核/真核表达载体表达获得的融合蛋白eIF4A1-Flag可用于筛选和鉴定eIF4A1互作蛋白,为深入探究eIFs的结构及生物学功能提供技术支持。

慢病毒介导的siRNA靶向干扰EIF4G1鼻咽癌稳定细胞株的建立

目的检测人真核翻译起始因子4G1(EIF4G1)基因在8株鼻咽癌细胞中的差异表达,寻找最高表达的细胞株。构建EIF4G1基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,建立稳定干扰EIF4G1表达的鼻咽癌细胞株,测定干扰效率。方法应用荧光定量PCR检测EIF4G1mRNA在鼻咽癌细胞株5-8F、6-10B、C666-1、CNE1、CNE2、HNE1、HONE1、SUNE1表达水平。构建重组靶向EIF4G1shRNA慢病毒表达质粒pLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA。用293FT细胞包装后产生的成熟慢病毒颗粒感染5-8F细胞,经杀稻瘟菌素筛选后,建立稳定表达siRNA的5-8F鼻咽癌细胞株。最后荧光定量PCR检测干扰效率。结果在8个鼻咽癌细胞株中,EIF4G1显示在5-8F细胞株中表达最高。PCR和测序验证pLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA重组质粒构建成功;经293FT细胞病毒包装,感染5-8F细胞后,与阴性对照组和未干扰组相比可明显抑制EIF4G1mRNA水平EIF4G1表达。结论成功构建了pLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA慢病毒重组质粒,建立了稳定靶向干扰EIF4G1表达的siRNA5-8F鼻咽癌细胞株。

真核翻译起始因子4G与肿瘤

真核翻译起始因子4G(eukaryotic translation initiation factor 4G,eIF4G)是eIF4F复合物中的一种"支架蛋白",在蛋白质合成的起始阶段中发挥重要的调控作用。近年来研究表明,eIF4G的两个亚型eIF4G1和eIF4G2跟许多恶性肿瘤的调控有密切关系,相对于相应的正常组织,eIF4G1在乳腺癌、宫颈癌、鼻咽癌、肺鳞状细胞癌、前列腺癌等恶性肿瘤中表达明显增高;而eIF4G2在弥漫性大B细胞淋巴瘤、急性髓细胞性白血病、膀胱移行细胞癌也有明显的差异性表达。因此,本文主要总结eIF4G、eIF4G1和eIF4G2的表达情况对肿瘤发生、发展及预后的影响,为肿瘤早期预测、靶向治疗及预后提供更好的理论依据。

病毒的调控靶点eIF4E

真核翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor 4E,eIF4E)在翻译调控过程中参与多种细胞过程,包括细胞增殖、凋亡和分化等。eIF4E在病毒m RNAs的翻译机制过程中起重要作用,不仅影响病毒蛋白合成,还可促进已感染细胞增殖以及病毒活性再激活。针对eIF4E的靶向治疗,将为以病毒感染为主的恶性肿瘤治疗提供新的思路。

非小细胞肺癌中泛素特异性蛋白酶10及真核翻译起始因子4G1的相关研究进展

肺癌是全球范围内的恶性肿瘤,尤其是非小细胞肺癌大大折损了患者的健康寿命年。因其病因不明确、症状不特异、晚期治疗预后差,靶向治疗昂贵且耐药性强,现迫切需要新的分子标志物作为非小细胞肺癌早期诊断的预警信号,并有助于相关肿瘤的分类、预后判断以及治疗指导。泛素特异性蛋白酶10(USP10)作为肿瘤分子通路的明星因子,与真核翻译起始因子4G1(EIF4G1)存在相互作用,且二者均在肿瘤中高表达,其潜在分子标志物的价值亟待探索。本文总结了EIF4G1、USP10及其近年肿瘤相关研究,包括表型研究、信号通路、生物功能等作用机制,以期为该领域相关研究的开展提供帮助。

病毒“劫持”真核细胞翻译系统的研究进展

病毒依赖于宿主细胞进行复制的同时又受到宿主体内各种条件的制约,为了在宿主细胞内生存并实现快速复制和增殖,病毒通过激活宿主体内各种信号通路来抢夺宿主翻译系统以及逃避先天性免疫。如果病毒无法进行自身m RNA的翻译将对病毒的增殖、扩增和进化产生致命性的打击。因此,许多病毒在感染后能够征用或者控制宿主的翻译系统来进行病毒m RNA的翻译。病毒对宿主翻译系统的控制可以发生在翻译起始、延伸和终止3个阶段中的任何一个步骤,可能是对真核翻译因子以及相关信号通路的调控,也可能是通过自身编码的具有类似真核翻译因子活性的病毒蛋白来实现对核糖体的募集,文章就一些特定病毒对宿主翻译系统的抢夺机制进行综述,为病毒特异性治疗的研究提供重要的理论基础。

喉癌患者原发病灶及分子切缘肿瘤标志物表达与肿瘤复发的相关性

目的探讨喉癌患者原发病灶及分子切缘肿瘤标志物表达与肿瘤复发的关系。方法将238例喉癌患者依据是否复发分为复发组(46例)与未复发组(192例)。采用免疫组化技术分别检测两组原发灶、分子切缘肿瘤标志物阳性表达情况,比较两组原发灶、分子切缘肿瘤标志物阳性表达率,分析原发灶、分子切缘肿瘤标志物阳性表达与喉癌复发的相关性。结果(1)复发组原发灶人体抑癌基因53、G1/S-特异性周期蛋白-D1阳性表达率显著高于未复发组(P<0.01),原发灶人体抑癌基因27阳性表达率显著低于未复发组(P<0.01);(2)复发组分子切缘真核起始因子4E、人体抑癌基因53、G1/S-特异性周期蛋白-D1阳性表达率显著高于未复发组(P<0.01),分子切缘人体抑癌基因27阳性表达率显著低于未复发组(P<0.01);(3)原发灶人体抑癌基因53、G1/S-特异性周期蛋白-D1阳性表达与喉癌复发呈显著正相关(P<0.01),原发灶人体抑癌基因27阳性表达与喉癌呈显著负相关(P<0.05);(4)分子切缘真核起始因子4E、人体抑癌基因53、G1/S-特异性周期蛋白-D1阳性表达与喉癌复发呈显著正相关(P<0.01),分子切缘人体抑癌基因27阳性表达与喉癌复发呈显著负相关(P<0.01)。结论喉癌患者原发灶、分子切缘肿瘤标志物人体抑癌基因53、人体抑癌基因27、G1/S-特异性周期蛋白-D1及分子切缘真核起始因子4E表达与喉癌复发密切相关,检测上述指标的变化对预测复发及制定防治措施具有重要意义。