人pot1基因cDNA的克隆及其在HeLa细胞中的表达

目的:克隆人端粒保护蛋白(hum an protection of telom eres 1,p ot1)基因cDNA全编码区,构建成真核表达质粒并实现在H eL a细胞中的表达。方法:RT-PCR法扩增出H eL a细胞hp ot1基因cDNA编码区全序列,定向克隆至真核表达载体pcDNA 3,阳性重组质粒经插入片段测序验证;重组的pcDNA 3-hp ot1质粒瞬时转染H eL a细胞,RT-PCR和EM SA法(电泳迁移率改变分析)检测hp ot1基因的表达水平。结果:来自H ela细胞的hp ot1基因cDNA编码区全序列构建成的真核表达质粒pcDNA 3-hp ot1,经测序分析序列和ORF正确;该重组质粒转染在H eL a细胞48h后,hp ot1基因表达水平增高。结论:真核表达载体pcDNA 3-hp ot1构建成功,并实现了hp ot1在H ela细胞中的表达。