真核起始因子5A与细胞周期G_1-S调控的研究

真核启始因子 5A(eIF 5A)翻译后第 4 9位的赖氨酸被修饰为一个特殊氨基酸hypusine ,后者是其发挥功能所必需的。本研究用eIF 5A翻译后hypusine修饰的特异性阻断剂 1,7 二氨基庚烷 (1,7 diaminoheptane ,DAH)处理白血病细胞系 (TF 1,THP 1和Mo7e)和人乳腺癌细胞系 (MCF 7) ,用FCM和台盼蓝拒染法检测其对细胞增殖和活性的影响 ;应用两步胸腺嘧啶核苷阻断法使细胞周期同步化 ,并用免疫印迹法检测eIF 5A在细胞周期时相的表达情况。结果表明 :用 1,7 二氨基庚烷处理后 ,细胞生长明显受到抑制 ,并有一定的促凋亡效应 ;且细胞周期被特异性阻滞于G1/S期 ;eIF 5A在细胞周期的S期和G2 /M期的表达量较低 ,在G1期表达量明显增加。结论 :eIF 5A的hypusine修饰参与了细胞周期调控 。

柔嫩艾美耳球虫真核起始因子3d基因的酵母表达分析

在毕赤酵母真核表达系统中表达柔嫩艾美耳球虫真核起始因子3d（Emeria tenella eukaryotic initiation factor 3d,EteIF3d）基因,并获得具有天然构象的活性蛋白。将EteIF3d基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9k上,将构建正确的重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115,用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选,获得含重组质粒的酵母表达细胞。在含1%甲醇的BMMY培养基中诱导培养,收集1~3 d的表达上清。表达产物进行SDS-PAGE检测,并用Western blot进行免疫学分析。结果表明,本研究成功构建了重组质粒pPIC9k-EteIF3d,并成功表达该蛋白,且该蛋白能与兔抗EteIF3d血清特异性结合,具有良好的抗原性。EteIF3d基因可在真核表达系统毕赤酵母中表达,且获得蛋白具有抗原性,从而为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。

真核起始因子2α的磷酸化促进多柔比星介导的肝癌细胞凋亡

目的:研究真核起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2 alpha,eIF2α)的磷酸化对多柔比星诱导肝癌细胞凋亡的影响。方法:在采用eIF2α磷酸酶抑制剂salubrinal(抑制S51去磷酸化)和eIF2α突变载体eIF2αS51A(不能发生S51磷酸化)改变eIF2α磷酸化的基础上,利用流式细胞和免疫印迹技术分析eIF2α磷酸化对多柔比星诱导肝癌细胞LM3凋亡的影响。结果 :eIF2α突变载体eIF2αS51A抑制多柔比星介导的肝癌细胞LM3凋亡,而eIF2α磷酸酶抑制剂salubrinal则促进多柔比星介导的肝癌细胞LM3凋亡。结论:eIF2α的磷酸化在多柔比星介导的肝癌细胞凋亡中起重要作用。

Circ-WHSC1通过靶向miR-95-3p上调真核起始因子3B的表达促进非小细胞肺癌细胞增殖的机制研究

目的:探讨Circ-WHSC1通过靶向miR-95-3p上调真核起始因子3B(EIF3B)的表达对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖的作用。方法:用荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测NSCLC细胞中Circ-WHSC1表达水平。采用细胞计数试剂盒-8(CCK8)检测敲低Circ-WHSC1对NSCLC细胞增殖的影响。通过生物信息学预测、双荧光素酶报告实验、RNA结合蛋白免疫沉淀实验研究miR-95-3p与Circ-WHSC1,EIF3B之间的靶向关系。结果:Circ-WHSC1在NSCLC细胞系中的表达显著高于正常肺上皮细胞;敲低Circ-WHSC1显著降低了NSCLC细胞的增殖活力,而转染miR-95-3p过度表达可逆转此作用;miR-95-3p是Circ-WHSC1的下游靶点,可以被Circ-WHSC1吸附;EIF3B是miR-95-3p的靶基因,可以被Circ-WHSC1间接正向调控。结论:Circ-WHSC1通过靶向调控miR-95-3p/EIF3B轴促进NSCLC细胞的增殖。

siRNA对人食管癌EC9706细胞真核起始因子4E表达的影响

目的探讨siRNA对人食管癌EC9706细胞中eIF4E表达的影响。方法针对GeneBank中eIF4E基因的不同靶点,设计并合成两条特异siRNA及一条无义siRNA寡核苷酸模板,利用体外转录法合成siRNA,在脂质体介导下以150ng/μl、200ng/μl和250ng/μl三种浓度转染EC9706细胞,分别培养24h、48h、72h,同时设正常对照组。采用免疫细胞化学及原位杂交技术检测转染前后EC9706细胞中eIF4E蛋白和mRNA的表达;应用流式细胞技术检测转染前后EC9706细胞周期的变化情况。结果转染siRNA后细胞形态发生明显改变。不同浓度的两条特异siRNA转染细胞后,eIF4E蛋白及mRNA表达量均较正常对照组降低,并且具有显著的剂量依赖性(P<0.05),但两转染组之间相比,差异无统计学意义(P>0.05);无义siRNA未表现出对eIF4E基因表达的抑制效应(P>0.05);两条特异siRNA转染组与无义siRNA转染组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。三种不同浓度siRNA转染细胞72h后与无义转染组及正常对照组相比,G0/G1期细胞比例显著增加,S期细胞比例相对减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论特异性siRNA能有效抑制人食管癌EC9706细胞中eIF4E基因的表达,抑制细胞增殖。

真核起始因子4E反义寡核苷酸对人食管癌EC-1细胞中真核起始因子4E表达的影响

目的:探讨真核起始因子4E(eIF4E)反义寡核酸(ASODN)对人食管癌EC-1细胞中eIF4E表达的影响。方法:将针对eIF4E不同基因位点的2条反义寡核苷酸(ASODN1、2)和1条无义寡核苷酸(N-ODN)转染EC-1细胞(设5、10、15μmol/L3个转染浓度),分别培养24、48、72h,并设空脂质体转染作为空白对照,采用免疫细胞化学和原位杂交方法检测转染后细胞中eIF4E蛋白和mRNA表达的变化。结果:ASODN1、2转染EC-1细胞培养24、48、72h后,各组中eIF4E蛋白和mRNA的表达均降低,2者分别与空白对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);ASODN1、2组每个时间段内随浓度增加ASODN抑制效应增强,差异具有统计学意义(F=9.423、10.284、10.496、7.621、8.420和9.089,P<0.05),组间相同时间点、相同浓度的抑制效应比较差异无统计学意义(P>0.05);NODN组和空白对照组对eIF4E的表达均无抑制效应。结论:特异性的ASODN能有效抑制人食管癌EC-1细胞中eIF4E的表达。

真核起始因子4A及组蛋白乙酰转移酶表达水平与卵巢癌患者FIGO分期的相关性

目的分析真核起始因子4A(eIF4A)及组蛋白乙酰转移酶(HAT)表达水平与卵巢癌患者国际妇产科协会(FIGO)分期的相关性。方法选取2012年12月至2014年10月郑州人民医院收治的43例卵巢癌患者作为观察组,另选取同期40例良性卵巢疾病患者作为对照组。检测两组患者HAT、eIF4A表达情况,比较两组HAT及eIF4A阳性表达率、不同FIGO分期HAT及eIF4A阳性表达率以及HAT及eIF4A阳性表达率与FIGO分期的相关性,分析HAT、eIF4A表达水平与卵巢癌患者中位生存期的关系,采用多因素logistic回归分析影响卵巢癌患者预后的因素。结果观察组HAT阳性表达率低于对照组,eIF4A阳性表达率高于对照组(P<0.05)。FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期HAT阳性表达率高于Ⅲ~Ⅳ期,eIF4A阳性表达率低于Ⅲ~Ⅳ期(P<0.05)。Spearman秩相关分析表明,HAT阳性表达率与FIGO分期呈负相关(r=-0.305,P<0.001),eIF4A阳性表达率与FIGO分期呈正相关(r=0.373,P<0.001)。HAT阴性表达患者中位生存期较阳性表达患者短,eIF4A阳性表达患者中位生存期较阴性表达患者短(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,HAT阴性、eIF4A阳性是卵巢癌患者中位生存期短的独立危险因素(P<0.05)。结论HAT及eIF4A在卵巢癌患者中存在异常表达,与卵巢癌发生、进展关系密切,HAT阴性、eIF4A阳性提示卵巢癌患者预后较差,检测HAT及eIF4A表达水平有助于卵巢癌早期诊断及预后分析,可为临床干预提供指导意见。

真核起始因子6抑制小鼠肾间质纤维化的组织学研究

目的通过建立小鼠单侧输尿管结扎(UUO)模型,探讨真核起始因子6(eIF6)在肾间质纤维化中的作用。方法建立eIF6+/-和eIF6+/+小鼠UUO模型;用HE和Masson染色观测小鼠肾间质胶原沉积程度,免疫组化方法观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)的表达与分布变化,并进行图像定量分析。结果 UUO模型eIF6+/-小鼠在建模后10d出现比eIF6+/+小鼠更明显的肾纤维化;在UUO模型中,eIF6+/-小鼠的肾小管区比eIF6+/+小鼠的肾小管区表达更多的TGF-β1和α-SMA。结论 eIF6可能通过影响TGF-β1的表达参与调控肾间质纤维化。

真核起始因子4E-小干扰RNA对舌鳞状细胞癌细胞粘附和运动能力的影响

目的:研究真核起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)-小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对舌鳞状细胞癌(简称鳞癌)细胞粘附和运动能力的影响。方法:舌鳞癌细胞SCC25感染靶向eIF4E干扰的慢病毒,用实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western blot方法检测沉默效果,噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)方法测定细胞增殖和粘附能力,划痕愈合实验测定细胞运动能力,Transwell实验测定细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测细胞中间质标志物神经性钙粘蛋白(N-cadherin)、上皮标志物上皮钙粘蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(matrix metalloprotease,MMP)-9、MMP-2蛋白表达情况。结果:靶向eIF4E干扰的慢病毒感染后的SCC25细胞中eIF4EmRNA和蛋白表达水平均降低。沉默eIF4E后的SCC25细胞的增殖活性降低,细胞粘附能力降低,细胞运动能力降低,侵袭和迁移能力降低,上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平升高,间质标志物N-cadherin蛋白表达水平降低,细胞中MMP-9、MMP-2蛋白表达水平降低。结论:eIF4E-siRNA能够下调舌鳞癌细胞中eIF4E的表达,抑制舌鳞癌细胞粘附、运动、侵袭、迁移能力。

真核起始因子3b在乳腺癌中的表达及与患者临床特征的关系

目的探讨真核起始因子3b(eIF3b)在乳腺癌中的表达及与患者临床特征的关系。方法取45例乳腺癌患者的乳腺癌组织和相应的癌旁组织,采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测乳腺癌组织和相应的癌旁组织eIF3b mRNA的相对表达量,采用免疫组化二步法检测乳腺癌组织和相应的癌旁组织e IF3b蛋白的阳性表达率,分析e IF3b mRNA的相对表达量和eIF3b蛋白的阳性表达率与乳腺癌患者临床特征的关系。结果乳腺癌组织中eIF3b m RNA的相对表达量和eIF3b蛋白的阳性表达率,均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。不同年龄、病理类型、肿瘤直径、组织学分级乳腺癌患者乳腺癌组织中eIF3b mRNA相对表达量和e IF3b蛋白阳性表达率的比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);不同腋窝淋巴结转移情况、TNM分期乳腺癌患者乳腺癌组织中eIF3b mRNA相对表达量和eIF3b蛋白阳性表达率的比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论 eIF3b表达增高不仅可能参与了乳腺癌发生过程,也可能在乳腺癌的增殖、转移和侵袭过程中发挥促进作用。

柔嫩艾美耳球虫真核起始因子5和5A基因的克隆表达及转录动态分析

旨在研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)真核起始因子5(EteIF5)和5A(EteIF5A)的功能,克隆、表达并分析EteIF5和EteIF5A在E.tenella广东株不同发育阶段的表达量变化。根据E.tenella基因组数据预测的编码序列设计引物,采用RT-PCR方法克隆EteIF5和EteIF5A的ORF,插入酶切位点后连接到原核表达载体pMAL-c2x进行诱导表达。提取E.tenella5个发育阶段(/时期)的总RNA,使用qRT-PCR检测EteIF5和EteIF5A转录的动态变化。测序结果表明,克隆获得的EteIF5和EteIF5A ORF全长分别为1 248和486bp,各自编码315和161个氨基酸,均在大肠埃希菌表达系统中成功表达。qRT-PCR定量分析显示,eIF5和eIF5A的mRNA在E.tenella不同发育阶段转录量不同,子孢子阶段最高,在孢子化卵囊阶段最低。首次克隆获得了E.tenella eIF5和eIF5A ORF,揭示EteIF5和EteIF5A mRNA的转录量在不同发育阶段有显著差异。试验结果为进一步研究EteIF5和EteIF5A的功能,从EteIF5A合成途径研制新型抗球虫药提供了试验基础。

真核起始因子3e亚基与原发性肝细胞癌的发生与发展正相关

背景真核起始因子3(eukaryotic initiation factor 3,eIF3)是哺乳动物细胞中最复杂的翻译起始因子,真核起始因子3e亚基(eukaryotic initiation factor 3e subunit,eIF3e)是eIF313个亚基中的一个,其表达水平的失调与癌症的发生和发展密切相关.然而,eIF3e在不同类型的恶性肿瘤中的报道相互矛盾.迄今为止,eIF3e在原发性肝细胞癌(primary hepatocellular carcinoma,HCC)中的作用不明.目的研究eIF3e在HCC发生和发展中的作用.方法从临床上随机获取5例HCC病人手术后的新鲜肝癌组织及癌旁组织标本,用qRT-PCR和Western Blot分别定量检测肝癌组织和癌旁组织内eIF3e的mRNA转录水平和蛋白表达水平.通过转染eIF3e过表达质粒或eIF3e干扰质粒进入HepG2,用qRT-PCR及Western Blot分别定量检测细胞内eIF3e转录和翻译表达水平,证实eIF3E过表达上调和干扰后的下调.用Kit-8细胞计数法(Cell Counting Kit-8,CCK-8)评价细胞增殖行为;用划痕实验观察细胞迁移行为;用流氏分析法调查细胞凋亡行为;运用裸鼠成瘤实验评价eIF3e对肿瘤生长的影响.结果和癌旁组织比较,发现肝癌组织中eIF3e上调.细胞实验证实,肝癌细胞系HepG2及Huh7中eIF3e mRNA转录水平均高于正常肝细胞系HL7702.过表达质粒和干扰质粒分别瞬时转染HepG2,发现eIF3e上调后增强了HepG2增殖和迁移行为,但对细胞凋亡无影响;而eIF3e下调后,减弱了HepG2增殖和迁移行为,促进凋亡;裸鼠实验结果证实eIF3e促进肿瘤生长.结论eIF3e的过表达与原发性肝细胞癌的发生和发展正相关,有潜力成为HCC治疗新靶点.

真核起始因子6调控转化生长因子β1对动脉粥样硬化的影响

目的探讨真核起始因子6(eIF6)调控转化生长因子β1(TGF-β1)对小鼠动脉粥样硬化的影响。方法将RAW264.7细胞分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、脂多糖(LPS)组和白细胞介素4(IL-4)组,定量PCR测M1型巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、单核细胞化学趋化蛋白(MCP-1)及M2型巨噬细胞标志物(CD163、Arg-1)及TGF-β1 mRNA表达。定量PCR和Western blotting检测TGF-β1在M1/M2型巨噬细胞中mRNA和蛋白的表达。在ApoE^(-/-)和ApoE^(-/-)/eIF6^(+/-)小鼠动脉粥样硬化模型,定量PCR检测小鼠腹主动脉中TGF-β1、IL-6、MCP-1和Arg-1 mRNA的表达。结果与PBS组比较,IL-4诱导后,细胞中CD163和Arg-1表达显著增加;LPS诱导后,细胞中iNOS和MCP-1表达显著增加。TGF-β1在M2型巨噬细胞中表达显著高于M1型巨噬细胞。eIF6慢病毒过表达转染细胞后,TGF-β1 mRNA在eIF6过表达细胞中表达水平显著下降(P<0.05)。ApoE^(-/-)/eIF6^(+/-)小鼠主动脉中TGF-β1和Arg-1 mRNA表达较ApoE^(-/-)小鼠显著升高;MCP-1和IL-6 mRNA表达显著降低。结论eIF6通过调节TGF-β1表达影响巨噬细胞极化,影响动脉粥样硬化发展。

真核起始因子4E对小鼠动脉粥样硬化发生、发展的炎症调节作用

目的探讨真核起始因子4E(eIF4E)在小鼠动脉粥样硬化发生、发展过程中的炎症调节作用。方法分别用200 ng/μl脂多糖(LPS)和20 ng/μl白细胞介素-4(IL-4)诱导RAW264.7细胞12 h后提取mRNA,24 h后提取蛋白,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting检测eIF4E mRNA和蛋白在M1型和M2型巨噬细胞中的表达变化。复制ApoE^-/-动脉粥样硬化小鼠模型,检测小鼠腹主动脉eIF4E mRNA和蛋白表达变化;组织免疫荧光检测eIF4E在主动脉根部中分别与M1型和M2型巨噬细胞中的共表达。结果M1型巨噬细胞eIF4E mRNA和蛋白表达高于M2型巨噬细胞(P<0.05)。在ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化模型中,ApoE^-/-小鼠腹主动脉eIF4E mRNA和蛋白表达高于C57BL/6J小鼠(P<0.05);eIF4E与CD86的共定位表达高于eIF4E与CD206的共定位表达。结论eIF4E在动脉粥样硬化的发展过程中主要在M1型巨噬细胞中起作用,进而对动脉粥样硬化产生影响。

真核翻译起始因子4G1在老年子宫内膜样癌患者中表达及临床意义

目的 检测真核翻译起始因子(eIF)4G1在老年子宫内膜样癌患者组织中的表达,并分析其与子宫内膜样癌临床病理参数的关系。方法 分别采取实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测eIF4G1 mRNA表达,免疫组化PV-6000法及Western免疫印迹检测eIF4G1蛋白表达水平。统计学方法分析eIF4G1表达与子宫内膜样癌临床病理学参数的关系。结果 免疫组化结果表明,eIF4G1在正常子宫内膜、非典型增生子宫内膜和子宫内膜样癌组织中阳性率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。eIF4G1表达水平与子宫内膜样癌组织分化程度、FIGO分期、肌层浸润深度及脉管癌栓显著相关(P均<0.05)。子宫内膜样癌组织中eIF4G1 mRNA及蛋白表达均明显高于癌旁内膜组织(P<0.05)。结论 eIF4G1在子宫内膜样癌中表达上调,且其表达水平与子宫内膜样癌的恶性生物学行为相关。eIF4G1有望成为子宫内膜样癌疾病诊断与靶点治疗的重要新型生物标志物。

真核翻译起始因子4G1与恶性肿瘤的研究进展

真核翻译起始因子4G1(eIF4G1)是一种大型支架蛋白,在真核生物mRNA翻译起始过程中,可作为蛋白质的对接位点,介导帽依赖性与非帽依赖性翻译启动。eIF4G1是翻译调控中的重要靶标,被认为参与多种肿瘤细胞的生长、迁移、增殖、侵袭和凋亡。近年来,随着对eIF4G1研究的深入,临床对其作用和功能也有了更深的理解,本文总结相关文献,对eIF4G1的功能、研究现状及与肿瘤的关系做一简要综述。

真核翻译起始因子4E在初治多发性骨髓瘤患者中的表达和临床意义

目的:探讨初治多发性骨髓瘤(NDMM)患者骨髓标本中真核翻译起始因子4E(eIF4E)的表达情况及其临床意义。方法:采用免疫组织化学染色方法分析75例NDMM患者和25例良性骨髓疾病ITP患者骨髓活检标本中eIF4E蛋白的表达情况。收集临床资料,分析NDMM患者骨髓标本中eIF4E蛋白表达与临床特征的相关性及其预后意义。结果:NDMM患者骨髓标本中eIF4E蛋白表达阳性率明显高于良性骨髓疾病患者(P<0.001)。eIF4E蛋白表达阳性与NDMM患者血清乳酸脱氢酶升高存在相关。单因素和多因素分析结果表明,eIF4E蛋白表达阳性与NDMM患者总生存期(OS)缩短显著相关,是影响NDMM患者OS的独立危险因素。结论:eIF4E蛋白表达阳性是NDMM患者OS的独立不良预后因素。

真核翻译起始因子4γ2调控N-乙酰氨基半乳糖转移酶1 mRNA对胃癌细胞恶性表型的影响

目的探讨真核翻译起始因子4γ2(EIF4G2)通过调控N-乙酰氨基半乳糖转移酶1(GALNT1)mRNA对胃癌进展的影响。方法通过生物信息数据库分析GALNT1、EIF4G2在胃癌细胞和胃癌组织中的表达及与胃癌患者预后的关系,并分析胃癌组织中EIF4G2、GALNT1表达的相关性。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测GALNT1 mRNA、EIF4G2 mRNA在人胃黏膜上皮细胞GES-1和人胃癌细胞(AGS细胞等)中的表达水平,并采用蛋白质印迹法(Western blot)检测GALNT1、EIF4G2蛋白表达水平。建立干扰GALNT1和过表达EIF4G2的AGS细胞株,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,采用TUNEL实验检测细胞凋亡能力,采用划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力,采用Western blot检测凋亡和转移相关蛋白表达水平,采用RIP实验和RNA下拉实验检测GALNT1 mRNA与EIF4G2的结合关系。结果胃癌组织和胃癌细胞中的GALNT1、EIF4G2水平分别高于正常组织和人胃黏膜上皮细胞,差异有统计学意义(P<0.001),且与胃癌患者预后差相关;胃癌组织中,EIF4G2表达与GALNT1表达呈正相关。敲低GALNT1后,AGS细胞活力降低,克隆形成数、迁移和侵袭细胞数减少,凋亡细胞数增加,Bcl-2、MMP2、MMP9蛋白表达降低,Bax、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达增加,差异有统计学意义(P<0.001)。EIF4G2可与GALNT1 mRNA结合,促进GALNT1 mRNA、GALNT1蛋白表达及GALNT1 mRNA稳定性,差异有统计学意义(P<0.001)。共转染sh-GALNT1-1与oe-EIF4G2可逆转sh-GALNT1-1对AGS细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。结论EIF4G2可通过稳定GALNT1 mRNA促进胃癌细胞增殖、迁移、侵袭并抑制细胞凋亡,其或可成为胃癌临床诊疗的新靶点。

脾相关酪氨酸激酶、蛋白激酶B、真核翻译起始因子4E、细胞周期蛋白依赖性激酶4在胃癌及癌前病变中的表达及相关性

目的探讨脾相关酪氨酸激酶(SYK)、蛋白激酶B(AKT)、真核翻译起始因子4E(EIF4E)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)在胃癌及癌前病变中的表达及相关性。方法收集90例患者的胃黏膜组织进行蛋白质印迹实验,其中癌旁正常组织30例,萎缩性胃炎组织30例,胃癌组织30例。另收集胃癌组织、萎缩性胃炎组织、癌旁正常组织存档蜡块各30例进行免疫组化实验。分别采用蛋白质印迹法和免疫组化法检测各组织中SYK、AKT、EIF4E、CDK4表达情况。分析萎缩性胃炎组织与胃癌组织中SYK、AKT、EIF4E、CDK4的相关性。结果癌旁正常组织中SYK蛋白表达水平及阳性表达率均高于萎缩性胃炎组织,萎缩性胃炎组织中SYK蛋白表达水平及阳性表达率均高于胃癌组织;癌旁正常组织中AKT、EIF4E、CDK4蛋白表达水平及阳性表达率均低于萎缩性胃炎组织,萎缩性胃炎组织中AKT、EIF4E、CDK4蛋白表达水平及阳性表达率均低于胃癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,胃癌组织和萎缩性胃炎组织中SYK与AKT、EIF4E、CDK4表达均呈负相关(P<0.05),AKT、EIF4E、CDK4三者表达均呈正相关(P<0.01)。结论SYK、AKT、EIF4E、CDK4可能通过相互作用共同参与了胃癌的发生,其可能的机制与磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/AKT信号通路有关。SYK、AKT、EIF4E、CDK4有希望成为胃癌诊断和防治的靶标,检测SYK、AKT、EIF4E、CDK4对胃癌诊断、早期治疗及预防具有重要价值。

胃癌中微小RNA-424-5p与真核翻译起始因子5A的表达特征研究

目的:观察胃癌中微小RNA-424-5p(miR-424-5p)与真核翻译起始因子5A(eIF5A)的表达特征,分析二者的靶向关系。方法:收集确诊为胃癌并行根治术的患者共65例作为研究对象,留取肿瘤组织和正常胃黏膜组织,应用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测miR-424-5p的表达,应用免疫组化法检测eIF5A的表达。选择胃癌MGC-803细胞株,应用双荧光素酶报告基因实验观察miR-424-5p与eIF5A的结合情况。结果:胃癌中miR-424-5p的表达量明显低于正常胃黏膜组织(P<0.05),eIF5A的阳性率明显高于正常胃黏膜组织(P<0.05),miR-424-5p与eIF5A在不同肿瘤最大径、不同浸润深度、有无淋巴结转移分组的比较中有统计学差异(P<0.05)。miR-424-5p与eIF5A呈负相关性(Y=-2.572X+7.662,P<0.05)。miR-424-5p和eIF5A的表达与术后生存时间相关(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-424-5p与eIF5A具有靶向关系。结论:胃癌组织中miR-424-5p表达下调、eIF5A表达升高,且具有靶向负调控关系。miR-424-5p和eIF5A的表达可能与患者术后生存时间有关。