真核起始因子4A及组蛋白乙酰转移酶表达水平与卵巢癌患者FIGO分期的相关性

目的分析真核起始因子4A(eIF4A)及组蛋白乙酰转移酶(HAT)表达水平与卵巢癌患者国际妇产科协会(FIGO)分期的相关性。方法选取2012年12月至2014年10月郑州人民医院收治的43例卵巢癌患者作为观察组,另选取同期40例良性卵巢疾病患者作为对照组。检测两组患者HAT、eIF4A表达情况,比较两组HAT及eIF4A阳性表达率、不同FIGO分期HAT及eIF4A阳性表达率以及HAT及eIF4A阳性表达率与FIGO分期的相关性,分析HAT、eIF4A表达水平与卵巢癌患者中位生存期的关系,采用多因素logistic回归分析影响卵巢癌患者预后的因素。结果观察组HAT阳性表达率低于对照组,eIF4A阳性表达率高于对照组(P<0.05)。FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期HAT阳性表达率高于Ⅲ~Ⅳ期,eIF4A阳性表达率低于Ⅲ~Ⅳ期(P<0.05)。Spearman秩相关分析表明,HAT阳性表达率与FIGO分期呈负相关(r=-0.305,P<0.001),eIF4A阳性表达率与FIGO分期呈正相关(r=0.373,P<0.001)。HAT阴性表达患者中位生存期较阳性表达患者短,eIF4A阳性表达患者中位生存期较阴性表达患者短(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,HAT阴性、eIF4A阳性是卵巢癌患者中位生存期短的独立危险因素(P<0.05)。结论HAT及eIF4A在卵巢癌患者中存在异常表达,与卵巢癌发生、进展关系密切,HAT阴性、eIF4A阳性提示卵巢癌患者预后较差,检测HAT及eIF4A表达水平有助于卵巢癌早期诊断及预后分析,可为临床干预提供指导意见。

真核翻译起始因子4G1在老年子宫内膜样癌患者中表达及临床意义

目的 检测真核翻译起始因子(eIF)4G1在老年子宫内膜样癌患者组织中的表达,并分析其与子宫内膜样癌临床病理参数的关系。方法 分别采取实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测eIF4G1 mRNA表达,免疫组化PV-6000法及Western免疫印迹检测eIF4G1蛋白表达水平。统计学方法分析eIF4G1表达与子宫内膜样癌临床病理学参数的关系。结果 免疫组化结果表明,eIF4G1在正常子宫内膜、非典型增生子宫内膜和子宫内膜样癌组织中阳性率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。eIF4G1表达水平与子宫内膜样癌组织分化程度、FIGO分期、肌层浸润深度及脉管癌栓显著相关(P均<0.05)。子宫内膜样癌组织中eIF4G1 mRNA及蛋白表达均明显高于癌旁内膜组织(P<0.05)。结论 eIF4G1在子宫内膜样癌中表达上调,且其表达水平与子宫内膜样癌的恶性生物学行为相关。eIF4G1有望成为子宫内膜样癌疾病诊断与靶点治疗的重要新型生物标志物。

真核翻译起始因子4G1与恶性肿瘤的研究进展

真核翻译起始因子4G1(eIF4G1)是一种大型支架蛋白,在真核生物mRNA翻译起始过程中,可作为蛋白质的对接位点,介导帽依赖性与非帽依赖性翻译启动。eIF4G1是翻译调控中的重要靶标,被认为参与多种肿瘤细胞的生长、迁移、增殖、侵袭和凋亡。近年来,随着对eIF4G1研究的深入,临床对其作用和功能也有了更深的理解,本文总结相关文献,对eIF4G1的功能、研究现状及与肿瘤的关系做一简要综述。

真核翻译起始因子4E在初治多发性骨髓瘤患者中的表达和临床意义

目的:探讨初治多发性骨髓瘤(NDMM)患者骨髓标本中真核翻译起始因子4E(eIF4E)的表达情况及其临床意义。方法:采用免疫组织化学染色方法分析75例NDMM患者和25例良性骨髓疾病ITP患者骨髓活检标本中eIF4E蛋白的表达情况。收集临床资料,分析NDMM患者骨髓标本中eIF4E蛋白表达与临床特征的相关性及其预后意义。结果:NDMM患者骨髓标本中eIF4E蛋白表达阳性率明显高于良性骨髓疾病患者(P<0.001)。eIF4E蛋白表达阳性与NDMM患者血清乳酸脱氢酶升高存在相关。单因素和多因素分析结果表明,eIF4E蛋白表达阳性与NDMM患者总生存期(OS)缩短显著相关,是影响NDMM患者OS的独立危险因素。结论:eIF4E蛋白表达阳性是NDMM患者OS的独立不良预后因素。

真核翻译起始因子4γ2调控N-乙酰氨基半乳糖转移酶1 mRNA对胃癌细胞恶性表型的影响

目的探讨真核翻译起始因子4γ2(EIF4G2)通过调控N-乙酰氨基半乳糖转移酶1(GALNT1)mRNA对胃癌进展的影响。方法通过生物信息数据库分析GALNT1、EIF4G2在胃癌细胞和胃癌组织中的表达及与胃癌患者预后的关系,并分析胃癌组织中EIF4G2、GALNT1表达的相关性。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测GALNT1 mRNA、EIF4G2 mRNA在人胃黏膜上皮细胞GES-1和人胃癌细胞(AGS细胞等)中的表达水平,并采用蛋白质印迹法(Western blot)检测GALNT1、EIF4G2蛋白表达水平。建立干扰GALNT1和过表达EIF4G2的AGS细胞株,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,采用TUNEL实验检测细胞凋亡能力,采用划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力,采用Western blot检测凋亡和转移相关蛋白表达水平,采用RIP实验和RNA下拉实验检测GALNT1 mRNA与EIF4G2的结合关系。结果胃癌组织和胃癌细胞中的GALNT1、EIF4G2水平分别高于正常组织和人胃黏膜上皮细胞,差异有统计学意义(P<0.001),且与胃癌患者预后差相关;胃癌组织中,EIF4G2表达与GALNT1表达呈正相关。敲低GALNT1后,AGS细胞活力降低,克隆形成数、迁移和侵袭细胞数减少,凋亡细胞数增加,Bcl-2、MMP2、MMP9蛋白表达降低,Bax、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达增加,差异有统计学意义(P<0.001)。EIF4G2可与GALNT1 mRNA结合,促进GALNT1 mRNA、GALNT1蛋白表达及GALNT1 mRNA稳定性,差异有统计学意义(P<0.001)。共转染sh-GALNT1-1与oe-EIF4G2可逆转sh-GALNT1-1对AGS细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。结论EIF4G2可通过稳定GALNT1 mRNA促进胃癌细胞增殖、迁移、侵袭并抑制细胞凋亡,其或可成为胃癌临床诊疗的新靶点。

脾相关酪氨酸激酶、蛋白激酶B、真核翻译起始因子4E、细胞周期蛋白依赖性激酶4在胃癌及癌前病变中的表达及相关性

目的探讨脾相关酪氨酸激酶(SYK)、蛋白激酶B(AKT)、真核翻译起始因子4E(EIF4E)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)在胃癌及癌前病变中的表达及相关性。方法收集90例患者的胃黏膜组织进行蛋白质印迹实验,其中癌旁正常组织30例,萎缩性胃炎组织30例,胃癌组织30例。另收集胃癌组织、萎缩性胃炎组织、癌旁正常组织存档蜡块各30例进行免疫组化实验。分别采用蛋白质印迹法和免疫组化法检测各组织中SYK、AKT、EIF4E、CDK4表达情况。分析萎缩性胃炎组织与胃癌组织中SYK、AKT、EIF4E、CDK4的相关性。结果癌旁正常组织中SYK蛋白表达水平及阳性表达率均高于萎缩性胃炎组织,萎缩性胃炎组织中SYK蛋白表达水平及阳性表达率均高于胃癌组织;癌旁正常组织中AKT、EIF4E、CDK4蛋白表达水平及阳性表达率均低于萎缩性胃炎组织,萎缩性胃炎组织中AKT、EIF4E、CDK4蛋白表达水平及阳性表达率均低于胃癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,胃癌组织和萎缩性胃炎组织中SYK与AKT、EIF4E、CDK4表达均呈负相关(P<0.05),AKT、EIF4E、CDK4三者表达均呈正相关(P<0.01)。结论SYK、AKT、EIF4E、CDK4可能通过相互作用共同参与了胃癌的发生,其可能的机制与磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/AKT信号通路有关。SYK、AKT、EIF4E、CDK4有希望成为胃癌诊断和防治的靶标,检测SYK、AKT、EIF4E、CDK4对胃癌诊断、早期治疗及预防具有重要价值。

真核翻译起始因子4A在上皮性卵巢癌中的表达及与患者预后的关系

目的探讨真核翻译起始因子4A(eIF4A)蛋白在不同卵巢组织中的表达及其与上皮性卵巢癌(EOC)患者预后的关系。方法取123例EOC组织、30例交界性卵巢癌组织、15例卵巢良性病变组织和20例正常卵巢上皮组织,采用免疫组化法检测eIF4A蛋白的表达情况,并比较不同临床特征EOC患者EOC组织中eIF4A蛋白的表达情况,荧光原位杂交(FISH)检测eIF4A基因扩增情况。EOC患者预后的影响因素采用Cox比例风险回归模型分析。结果eIF4A蛋白高表达率在正常卵巢上皮组织、卵巢良性病变组织、交界性卵巢癌组织及EOC组织中依次升高,差异有统计学意义(P﹤0.05)。123例EOC患者EOC组织中,eIF4A蛋白高表达93例,低表达30例,FIGO分期为Ⅲ~Ⅳ期、组织学分级为G3级、有淋巴结转移、有腹腔积液EOC患者EOC组织中eIF4A蛋白高表达率分别高于临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、组织学分级为G1~2级、无淋巴结转移、无腹腔积液的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。eIF4A高表达患者的5年总生存率为28.8%,明显低于低表达患者的45.8%(P﹤0.01)。Cox比例风险回归模型分析结果显示,临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、组织学分级为G3级、术后病变残余均是EOC患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论eIF4A在EOC的发生、发展中发挥重要作用,其高表达与患者的不良预后密切相关。

食蟹猴疟原虫 (Plasmodium cynomolgi)中一个真核翻译起始因子4A(eIF-4A)同源蛋白的cDNA克隆、表达和ATP酶活性测定(英文)

真核翻译起始因子 4A(eukaryoticinitiationfactor 4A ,eIF 4A)是DEAD盒蛋白家族的ATP依赖性的RNA解旋酶类中的一个原型成员 .它在真核细胞的蛋白质合成的起始过程中起着关键性作用 .通过PCR扩增和放射探针杂交相结合的方法筛选食蟹猴疟原虫 (Plasmodiumcynomolgi)的cDNA文库 ,克隆了一个eIF 4A同源蛋白的完整cDNA序列 ,命名为CH1F .CH1F全长 1 75 3bp ,包含一个1 1 97bp的完整阅读框 ,推测编码一个由 398个氨基酸组成的蛋白 .对CH1F的蛋白序列用BlastP进行搜索和分析 ,提示它应该是DEAD盒家族的一个eIF 4A同源蛋白 ;用DNAStar将其与许多典型的DEAD盒蛋白序列进行比对分析 ,结果显示 :比起其它的DEAD盒蛋白 ,它与eIF 4A或eIF 4A的同源蛋白具有更高的同源性和更多序列上的相似结构域 .将包含完整阅读框的片段亚克隆进表达载体pET 2 8a (+) ,在大肠杆菌DH5α中表达 ,产生的融合蛋白大小在 4 5kD左右 .对该融合蛋白进行纯化、重新折叠和初步鉴定 .ATP酶活性检测显示 ,该融合蛋白只有很低的ATP酶活性 ,而且它的ATP酶活性似乎不依赖于核酸底物 .对这一检测结果给出 3种可能的原因 .这一检测结果与根据序列分析得到的推论———CH1F蛋白可能是一个eIF

真核翻译起始因子4G1在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨真核翻译起始因子4G1(eukaryotic translation initiation factor 4 gamm 1,EIF4G1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及意义。方法收集接受手术治疗的NSCLC患者81例(男性49例,女性32例),应用实时定量聚合酶链反应(PCR)和免疫组织化学方法检测癌组织及配对癌旁组织中EIF4G1mRNA和蛋白的表达,分析其在NSCLC癌组织中的表达特点及与患者临床病理特征的关系。结果 EIF4G1 mRNA在NSCLC癌组织中的表达(6. 92±1. 87)明显低于癌旁组织(8. 33±1. 69)(t=7. 01,P<0. 001)。将NSCLC分为3种不同病理类型:鳞癌、腺癌和其他类型,EIF4G1 mRNA在各组表达差异均具有统计学意义(P<0. 05)。EIF4G1mRNA在低分化癌组织中的表达水平(8. 90±1. 33)明显高于在中分化(1. 70±0. 17)和高分化(0. 84±0. 15)癌组织(F=14. 04,P<0. 001)。EIF4G1 mRNA在Ⅳ期癌组织中的表达(15. 42±3. 99)明显高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期癌组织(分别为1. 67±0. 37、2. 96±0. 77、5. 44±0. 99)(F=11. 84,P<0. 001)。不同年龄、性别和病理类型EIF4G1 mRNA表达水平均未见明显差异(均P>0. 05)。Logistic回归分析显示EIF4G1高表达与NSCLC癌细胞分化程度密切相关(OR=23. 74,P<0. 001)。免疫组化结果显示EIF4G1在低分化癌组织中的蛋白表达水平明显高于中分化和高分化癌组织(P<0. 05)。结论 EIF4G1在NSCLC中特异性高表达,且其表达强度与癌细胞的分化程度密切相关。

真核转录起始因子4E在食管癌中的表达及其与微淋巴管密度的关系

目的:观察真核转录起始因子4E(eIF4E)在食管癌组织中的表达并计数微淋巴管密度(MLVD),探讨eIF4E与食管癌发生和转移的关系以及在食管癌微淋巴管生成中的作用。方法:应用免疫组织化学技术检测75例食管癌石蜡标本切片中eIF4E和D2-40的表达,以26例癌旁组织、55例正常食管组织为对照;采用Image Pro Plus(IPP)6.0图像分析软件对采集的图片进行分析。结果:eIF4E在食管癌组织(0.048±0.023)中的表达较癌旁(0.028±0.023)和正常食管组织(0.013±0.016)高(P<0.05),且随着食管癌分化程度的降低,表达强度逐渐增强;eIF4E在淋巴结转移组(0.068±0.014)中的表达高于非淋巴结转移组(0.033±0.016)(P<0.05);eIF4E在中晚期食管癌组中的表达高于早期食管癌组(P<0.05);eIF4E的表达与患者的性别、年龄无关(P>0.05)。低分化食管癌组中的MLVD较中分化和高分化的MLVD高;淋巴结转移组MLVD较未转移组高(P<0.05)。eIF4E的表达与食管癌MLVD呈正相关(r=0.624,P<0.01)。结论:eIF4E在食管癌组织中有较高的表达,且与淋巴结转移、分化程度及食管癌组织的MLVD密切相关,提示食管癌的发生和淋巴转移可能与eIF4E有关,eIF4E可能作为食管癌新的标志物以及评估食管癌进展的客观指标。

siRNA对人食管癌EC9706细胞真核起始因子4E表达的影响

目的探讨siRNA对人食管癌EC9706细胞中eIF4E表达的影响。方法针对GeneBank中eIF4E基因的不同靶点,设计并合成两条特异siRNA及一条无义siRNA寡核苷酸模板,利用体外转录法合成siRNA,在脂质体介导下以150ng/μl、200ng/μl和250ng/μl三种浓度转染EC9706细胞,分别培养24h、48h、72h,同时设正常对照组。采用免疫细胞化学及原位杂交技术检测转染前后EC9706细胞中eIF4E蛋白和mRNA的表达;应用流式细胞技术检测转染前后EC9706细胞周期的变化情况。结果转染siRNA后细胞形态发生明显改变。不同浓度的两条特异siRNA转染细胞后,eIF4E蛋白及mRNA表达量均较正常对照组降低,并且具有显著的剂量依赖性(P<0.05),但两转染组之间相比,差异无统计学意义(P>0.05);无义siRNA未表现出对eIF4E基因表达的抑制效应(P>0.05);两条特异siRNA转染组与无义siRNA转染组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。三种不同浓度siRNA转染细胞72h后与无义转染组及正常对照组相比,G0/G1期细胞比例显著增加,S期细胞比例相对减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论特异性siRNA能有效抑制人食管癌EC9706细胞中eIF4E基因的表达,抑制细胞增殖。

真核起始因子4E反义寡核苷酸对人食管癌EC-1细胞中真核起始因子4E表达的影响

目的:探讨真核起始因子4E(eIF4E)反义寡核酸(ASODN)对人食管癌EC-1细胞中eIF4E表达的影响。方法:将针对eIF4E不同基因位点的2条反义寡核苷酸(ASODN1、2)和1条无义寡核苷酸(N-ODN)转染EC-1细胞(设5、10、15μmol/L3个转染浓度),分别培养24、48、72h,并设空脂质体转染作为空白对照,采用免疫细胞化学和原位杂交方法检测转染后细胞中eIF4E蛋白和mRNA表达的变化。结果:ASODN1、2转染EC-1细胞培养24、48、72h后,各组中eIF4E蛋白和mRNA的表达均降低,2者分别与空白对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);ASODN1、2组每个时间段内随浓度增加ASODN抑制效应增强,差异具有统计学意义(F=9.423、10.284、10.496、7.621、8.420和9.089,P<0.05),组间相同时间点、相同浓度的抑制效应比较差异无统计学意义(P>0.05);NODN组和空白对照组对eIF4E的表达均无抑制效应。结论:特异性的ASODN能有效抑制人食管癌EC-1细胞中eIF4E的表达。

乳腺浸润性导管癌患者术后癌组织中真核翻译起始因子4e、3h和富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体5表达特征

目的检测乳腺浸润性导管癌患者术后癌组织中真核翻译起始因子(EIF)4e、3h和富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体(LGR)5的表达及其相关性。方法 132例乳腺浸润性导管癌术后组织蜡块及临床资料为研究组,经病理证实为正常乳腺小叶和导管上皮组织85例为对照组,选择EIF4e、3h和LGR5的多克隆性抗体,应用免疫组化SP法检测3种蛋白的表达。结果研究组EIF4e、3h和LGR5表达阳性率明显高于对照组,研究组EIF4e、3h和LGR5表达与肿瘤最大径、脉管浸润、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和Ki67的表达均具有相关性,EIF4e表达与淋巴结转移相关。研究组EIF4e和3h、EIF3h和LGR5表达正相关。结论乳腺浸润性导管癌患者术后组织中EIF4e、3h和LGR5高表达且具有协同作用,三者参与肿瘤的发生和进展,术后联合检测EIF4e、3h和LGR5的表达可能对判断预后有一定价值。

真核起始因子4E-小干扰RNA对舌鳞状细胞癌细胞粘附和运动能力的影响

目的:研究真核起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)-小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对舌鳞状细胞癌(简称鳞癌)细胞粘附和运动能力的影响。方法:舌鳞癌细胞SCC25感染靶向eIF4E干扰的慢病毒,用实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western blot方法检测沉默效果,噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)方法测定细胞增殖和粘附能力,划痕愈合实验测定细胞运动能力,Transwell实验测定细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测细胞中间质标志物神经性钙粘蛋白(N-cadherin)、上皮标志物上皮钙粘蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(matrix metalloprotease,MMP)-9、MMP-2蛋白表达情况。结果:靶向eIF4E干扰的慢病毒感染后的SCC25细胞中eIF4EmRNA和蛋白表达水平均降低。沉默eIF4E后的SCC25细胞的增殖活性降低,细胞粘附能力降低,细胞运动能力降低,侵袭和迁移能力降低,上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平升高,间质标志物N-cadherin蛋白表达水平降低,细胞中MMP-9、MMP-2蛋白表达水平降低。结论:eIF4E-siRNA能够下调舌鳞癌细胞中eIF4E的表达,抑制舌鳞癌细胞粘附、运动、侵袭、迁移能力。

真核翻译起始因子4E结合蛋白1

真核翻译起始因子4E结合蛋白1（e IF4E-binding protein 1,4E-BP1）是一种高度保守的小分子蛋白,在蛋白翻译起始途径选择中发挥重要的功能。4E-BP1通过与脚手架蛋白e IF4G竞争性结合转录起始因子e IF4E,抑制e IF4E的功能及帽依赖性蛋白质翻译起始。4E-BP1受PI3K/AKT/mT OR、MEK/ERK/MAPK等多种信号通路的调节,4E-BP1发生磷酸化修饰后与e IF4E解离。除负调控蛋白翻译起始功能外,4E-BP1还通过调节cyclin D1的翻译、与PLK1相互作用等,从而影响细胞周期进程。

真核起始因子4E对小鼠动脉粥样硬化发生、发展的炎症调节作用

目的探讨真核起始因子4E(eIF4E)在小鼠动脉粥样硬化发生、发展过程中的炎症调节作用。方法分别用200 ng/μl脂多糖(LPS)和20 ng/μl白细胞介素-4(IL-4)诱导RAW264.7细胞12 h后提取mRNA,24 h后提取蛋白,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting检测eIF4E mRNA和蛋白在M1型和M2型巨噬细胞中的表达变化。复制ApoE^-/-动脉粥样硬化小鼠模型,检测小鼠腹主动脉eIF4E mRNA和蛋白表达变化;组织免疫荧光检测eIF4E在主动脉根部中分别与M1型和M2型巨噬细胞中的共表达。结果M1型巨噬细胞eIF4E mRNA和蛋白表达高于M2型巨噬细胞(P<0.05)。在ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化模型中,ApoE^-/-小鼠腹主动脉eIF4E mRNA和蛋白表达高于C57BL/6J小鼠(P<0.05);eIF4E与CD86的共定位表达高于eIF4E与CD206的共定位表达。结论eIF4E在动脉粥样硬化的发展过程中主要在M1型巨噬细胞中起作用,进而对动脉粥样硬化产生影响。

乳腺癌eIF4E对免疫细胞浸润的影响及机制的初步研究

目的:研究乳腺癌真核翻译起始因子4E(eIF4E)表达对免疫细胞浸润的影响及作用机制。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)网站获取乳腺癌数据,分析eIF4E的表达与预后和临床特征的关系。通过TISIDB数据库分析乳腺癌eIF4E表达与免疫亚型及免疫细胞浸润的关系。通过单样本基因集富集分析对免疫细胞浸润和上皮-间充质转化(EMT)抑制基因集进行评分;分析eIF4E不同表达水平时免疫细胞浸润的差异以及EMT抑制基因集和免疫细胞浸润的相关性。蛋白免疫印迹和免疫荧光实验研究乳腺癌eIF4E表达对EMT相关蛋白表达的影响,Transwell实验研究eIF4E表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:eIF4E在乳腺癌淋巴细胞减少型(C4)中表达最高。乳腺癌中eIF4E高表达时抗肿瘤免疫细胞浸润减少(P<0.05),免疫抑制细胞浸润增多(P<0.05);同时eIF4E表达与EMT抑制基因集评分呈负相关(P<0.05),而EMT抑制基因集评分与许多抗肿瘤免疫细胞浸润呈正相关(均P<0.05)。免疫印迹结果显示,乳腺癌eIF4E高表达时EMT相关蛋白波形蛋白(Vimentin)的表达升高(t=11.83、5.927,均P<0.05),而E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达降低(t=2.848、8.599,均P<0.05),免疫荧光实验得到了相同的结果(t=6.577、7.843、12.48、4.406,均P<0.05)。Transwell实验显示eIF4E的高表达增强了乳腺癌细胞迁移和侵袭能力(t=13.81、8.9、15.27、4.954,均P<0.05)。结论:乳腺癌eIF4E表达通过促进EMT来影响免疫细胞的浸润。

人eIF4A3真核表达载体构建及稳定表达细胞株筛选

目的构建人eIF4A3重组质粒载体,筛选高表达人eIF4A3的稳定细胞株。方法 RT-PCR克隆eIF4A3基因,将获得的基因片段分别连接到含有HA和c-myc标签的质粒载体上,转染HeLa细胞,经G418筛选获稳定表达细胞株,在体外翻译体系中进行体外翻译,通过免疫印迹鉴定eIF4A3的表达。结果成功构建人eIF4A3的真核表达载体,可在HeLa细胞中稳定表达,且能在体外翻译体系中翻译eIF4A3蛋白质。功能研究初步证明eIF4A3可以抑制荧光素酶报告基因的表达。结论获得了可稳定高表达人eIF4A3的HeLa细胞株及可用于体外翻译的真核表达载体。

抑制EIF4E下调VEGFA和CCND1的表达以抑制卵巢癌肿瘤进展

目的探讨真核起始因子(Eukaryotic Initiation Factor,EIF)4E在卵巢癌中的作用以及对血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)A和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1,CCND1)表达的影响。方法使用SKOV3卵巢癌细胞,分析在线数据以比较卵巢癌患者和正常样本中EIF4E、VEGFA和CCND1的表达差异。进行EIF4E抑制剂4EGI-1的三维细胞培养实验,并通过逆转录定量聚合酶链式(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)技术和Western Blot比较mRNA和蛋白水平。结果癌症基因组图谱(Cancer Genome Atlas,TCGA)显示,卵巢癌患者中VEGFA和CCND1的表达水平显著升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。EIF4E与VEGFA和CCND1呈正相关(P均<0.05)。在4EGI-1处理的SKOV3细胞中,EIF4E、VEGFA和CCND1表达均显著降低,差异有统计学意义(t=9.819、3.508、3.289,P均<0.05);此外,4EGI-1处理组的p-EIF4E蛋白表达水平为(0.33±0.14)%,显著低于对照组(1.02±0.07)%,差异有统计学意义(t=8.818,P=0.0001),同时4EGI-1处理组的VEGFA和CCND1蛋白水平也显著降低(t=5.064、6.334,P均<0.05)。结论EIF4E在卵巢癌肿瘤中高表达。EIF4E抑制剂4EGI-1可能通过调节VEGFA和CCND1的表达发挥作用,因此EIF4E可能成为卵巢癌治疗的潜在靶点。

RIP3/MLKL通过激活4EBP1-eIF4E通路诱导程序性坏死

目的:程序性坏死是一种由受体相互作用蛋白3(receptor interacting protein 3,RIP3)和混合谱系激酶域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)介导的细胞死亡形式,有研究指出哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路可能参与程序性坏死的调控,真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(eukaryotic translation initiation factor 4Ebinding protein 1,4EBP1)-真核起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)通路是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白最重要的下游分子通路之一,然而此通路是否参与程序性坏死的发生,目前尚无相关研究。本研究旨在探索4EBP1-eIF4E通路在程序性坏死中是否发生改变。方法:首先向小鼠上皮样成纤维细胞系L929细胞中加入程序性坏死诱导剂TSZ(TNF-α/SM-164/Z-VAD-FMK),在光学显微镜下观察细胞坏死情况;进一步向敲除RIP3和MLKL基因的L929细胞中加入TSZ,采用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色观察细胞坏死情况,实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测4EBP1和eIF4E的mRNA和蛋白质表达水平。结果:野生型L929细胞用TSZ处理后,坏死细胞增加,4EBP1的mRNA和蛋白质表达水平明显下调且磷酸化的4EBP1(phosphorylated 4EBP1,p-4EBP1)/4EBP1值增加(P<0.05或P<0.01),eIF4E的mRNA表达水平明显上调且磷酸化的eIF4E(phosphorylated eIF4E,p-eIF4E)/eIF4E值增加(均P<0.01);在敲除L929细胞中的RIP3和MLKL基因后,PI阳性坏死细胞明显减少,4EBP1的mRNA和蛋白质表达水平明显上调且p-4EBP1/4EBP1值下降(P<0.05或P<0.01),eIF4E的mRNA表达水平明显下调且p-eIF4E/eIF4E值下降(均P<0.01)。结论:4EBP1-eIF4E通路在RIP3/MLKL介导的程序性坏死中发生活化。