eIF4A1表达与胃癌发生发展及对胃癌细胞侵袭能力的影响

目的探讨真核起始因子4A1(eIF4A1)在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞侵袭、增殖的影响。方法选取2016年1月至2019年12月我院保存的胃癌组织标本190例,同时选取癌旁正常组织作为对照,采用免疫组化染色法检测eIF4A1表达;选取人胃癌细胞株AGS和SGC7901,将细胞随机分为对照组、阴性对照组和干预组,其中对照组加细胞培养液,阴性对照组加含0.5%DMSO的细胞培养液,干预组加eIF4A1表达抑制剂Silvestrol(在DMSO中溶解),采用MTT法检测细胞增殖,Transwell检测细胞侵袭能力。结果胃癌组织eIF4A1阳性表达率为81.05%,明显高于癌旁组织16.84%(P<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移胃癌组织eIF4A1阳性表达率分别为92.31%和92.78%,明显高于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移胃癌组织(P<0.05)。在AGS细胞试验中,干预组培养12 h、24 h和48 h时的OD值分别为0.312±0.101、0.511±0.106和0.663±0.109,明显低于对照组和阴性对照组(P均<0.05);在SGC7901细胞试验中,干预组培养12 h、24 h和48 h时的OD值分别为0.355±0.103、0.542±0.109和0.700±0.101,明显低于对照组和阴性对照组(P均<0.05)。在AGS细胞试验中,干预组细胞侵袭数为(12.03±3.11)个,明显低于对照组和阴性对照组(P均<0.05);在SGC7901细胞试验中,干预组细胞侵袭数为(57.64±10.11)个,明显低于对照组和阴性对照组(P均<0.05)。结论胃癌组织中eIF4A1呈高表达,与临床分期、淋巴结转移有一定相关性;抑制eIF4A1表达,对胃癌细胞增殖、侵袭有一定抑制作用。

EIF4A1在胃癌组织中表达及其抑制剂对人胃癌细胞株增殖、存活、侵袭、迁移能力影响观察

目的观察真核翻译起始因子4A1(EIF4A1)在胃癌组织中的表达变化;另观察EIF4A1抑制剂(Silvestrol)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、存活、侵袭、迁移能力影响,并分析其可能机制。方法淋巴结转移阳性、阴性胃癌组织及匹配癌旁正常组织各20例份,采用免疫组化法检测各组织EIF4A1。取对数生长期SGC-7901细胞并分为3组,药物组加含120μg/m L Silvestrol(在DMSO溶剂溶解)的细胞培养液100μL,模型组加含0. 5%DMSO的细胞培养液100μL,对照组加细胞培养液100μL; CCK-8法检测细胞增殖活性,CountessⅡFL细胞计数仪计数活细胞数,Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,qRT-PCR法和Western blotting法分别检测EIF4A1和AKT mRNA、蛋白。结果与癌旁正常组织比较,淋巴结转移阳性胃癌组织中EIF4A1高表达例数多(P<0. 05)。各组OD值及活细胞数两两比较,P均> 0. 05;与模型组、对照组比较,药物组侵袭细胞数少,细胞迁移距离长,EIF4A1和AKT蛋白、mRNA表达降低(P均<0. 05)。结论淋巴结转移阳性胃癌组织中EIF4A1表达量高于癌旁正常组织; Silvestrol不影响SGC-7901细胞的增殖、存活能力,但可抑制细胞侵袭、迁移能力,其机制可能与Silvestrol调控AKT信号通路有关。

胃癌中eIF4A1表达特征及其在胃癌细胞增殖中的作用

目的:探讨胃癌中真核起始因子4A1(eIF4A1)表达特征及其在胃癌细胞增殖中的作用。方法:选择2016年10月—2019年10月我院收治的61例胃癌患者,收集其胃癌组织以及相对应的癌旁正常组织制作标本,均进行免疫组化检测,比较胃癌组织及癌旁组织中eIF4A1的表达。并且选择生长期的SGC-7901细胞分为两组,药物组加内含120μg/ml Silvestrol(于DMSO溶剂溶解)的100μl细胞培养液,对照组加0.5%DMSO的100μl细胞培养液。比较两组免疫组化评分,使用CCK-8法及CountessⅡFL细胞计数仪分别检测细胞增殖活性以及活细胞数。结果:检测后,胃癌组织中免疫组化评分高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中eIF4A1高表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);培养后,药物组中SGC-7901细胞OD值及活细胞计数均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胃癌细胞中eIF4A1免疫组化评分及表达量均高于癌旁细胞,eIF4A1能有效结合Silvestrol,继而影响eIF4A1的活性以及增殖能力。

Hsa_circ_0000128通过miR-623/EIF4A1轴促进人胃腺癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的目前对于hsa_circ_0000128是否通过miR-623/EIF4A1轴通路参与胃腺癌的发生过程尚不清楚。文中旨在研究环状RNA hsa_circ_0000128(Circ_01607)在胃腺癌组织、细胞株的表达以及对胃癌细胞的增殖、迁移、凋亡的影响。方法收集2019年9月至2020年8月江苏大学附属人民医院病理科的40份胃腺癌及癌旁组织标本。进行高通量测序筛选出表达明显提高的环状RNA hsa_circ_0000128;通过circBank、TargetScan等数据库预测下游miR-623。采用RT-PCR对40例临床胃腺癌组织、癌旁组织、胃癌细胞株(MGC-803,HGC-27,BGC-823)以及正常人胃粘膜上皮细胞株GES-1中hsa_circ_0000128的表达进行测定及验证结果。挑选出表达量差异最大的两组进行后续实验。将HGC-27、MGC-803细胞株分别接种于两块细胞培养板中,培养板中设置相应的circRNA组别:Si-NC组(Si-NC转染胃腺癌细胞)、Si-circ组(si-hsa_circ_0000128转染胃腺癌细胞)、Si-EIF4A1组(Si-EIF4A1转染胃腺癌细胞)、miR-NC组(miR-623-NC转染胃腺癌细胞)、miR-mimics组(miR-623-mimics转染胃腺癌细胞)、miR-inh组(miR-623-inhibitors转染胃腺癌细胞)、Si-circ+miR-NC组(Si-circ、miR-NC转染胃腺癌细胞)、Si-circ+miR-inh组(Si-circ、miR-inh转染胃腺癌细胞)。采用克隆形成实验测定各组细胞增殖能力;使用Transwell实验测定各组胃癌细胞的迁移能力;蛋白免疫印迹实验测定凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3、bcl-2和Bax的表达水平验证细胞凋亡情况。验证miR-623在组织及细胞中的表达情况,通过荧光素酶实验验证结合靶点信息,加入miRNA对应干扰并将其分组,通过细胞功能学实验,蛋白印迹实验比较胃癌细胞株各组细胞功能的变化。通过PCR及蛋白免疫印迹实验验证各组真核翻译起始因子4A1(EIF4A1)的相关表达水平与miR-623含量的关系。结果hsa_circ_0000128在胃癌组织及细胞株中较癌旁组织及正常胃黏膜上皮细胞中呈高表达状态。SI-circ组hsa_circ_0000128的相对表达量明显低于SI-NC组(P<0.05)。SI-circ+miR-inh组miR-623含量较SI-circ+miR-NC组下降(P<0.05)。SI-circ组Cleaved-caspase-3、Bax相对表达量较SI-NC组增加(P<0.05),Bcl-2相对表达量下降(P<0.05)。HGC-27和MGC-803细胞中Si-circ组的克隆形成率[(11.57±1.724)%、(12.47±2.401)%]明显低于Si-NC组[(32.53±3.250)%、(25.07±1.557)%],差异有统计学意义(P<0.05)。加入miR-623 inhibitor后可逆转抑制现象,SI-circ+miR-NC组克隆形成率[(10.43±1.305)%、(12.50±1.400)%]明显低于Si-circ+miR-inh组[(25.03±1.665)%、(19.63±1.955)%],差异具有统计学意义(P<0.01)。Transwell实验表明,SI-circ组较SI-NC组迁移明显降低(P<0.05)。EIF4A1在40对胃癌组织及胃癌细胞株HGC-27、MGC-803表达较癌旁组织、正常胃黏膜上皮细胞GES-1中呈高表达,差异具有统计学意义(P<0.01)。蛋白免疫印迹实验显示当敲减hsa_circ_0000128时,EIF4A1的含量下降;当加入miR-623 inhibitor逆转敲减circRNA情况时,EIF4A1的表达含量上升(P<0.01)。结论hsa_circ_0000128在胃癌细胞株、组织中呈高表达,hsa_circ_0000128作为miR-623的海绵上调EIF4A1促进胃癌细胞的生物学功能;含量下调后可显著抑制胃癌细胞增殖、迁移并诱导其凋亡。

长链非编码RNA ABHD11-AS1对结直肠癌细胞生长和转移的影响及调控机制

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)α/β水解酶域11反义RNA1(ABHD11-AS1)对结直肠癌细胞生长和转移的影响,并基于miR-133a/真核起始因子4A1(EIF4A1)轴分析其可能的调控机制。方法 (1)取人结直肠癌细胞HT-29、SW480、DLD-1、HCT116、LOVO、SW620,以及正常结直肠黏膜细胞FHC,检测细胞中lncRNA ABHD11-AS1的表达情况。(2)分别通过miRcode、TargetScan数据库预测ABHD11-AS1与miR-133a、miR-133a与EIF4A1的靶向关系,并进行双荧光素酶报告基因实验以验证。(3)将HT-29细胞分为NC组(转染Negative Control)、siABHD11-AS1组(转染lncRNA ABHD11-AS1 siRNA)、miR-133a inhibitor组(转染miR-133a inhibitor)、siABHD11-AS1+miR-133a inhibitor组(转染lncRNA ABHD11-AS1 siRNA和miR-133a inhibitor)和siABHD11-AS1+miR-133a inhibitor+siEIF4a1组(转染lncRNA ABHD11-AS1 siRNA、miR-133a inhibitor、EIF4A1 siRNA)。检测转染后除miR-133a inhibitor组以外的其他组细胞增殖、迁移和侵袭能力,NC组、siABHD11-AS1组、miR-133a inhibitor组、siABHD11-AS1+miR-133a inhibitor组细胞的EIF4A1蛋白表达量。结果 (1)ABHD11-AS1均高表达于各种结直肠癌细胞,在HT-29细胞中的表达最高。(2)miR-133a为ABHD11-AS1靶基因,EIF4A1为miR-133a靶基因。(3)siABHD11-AS1组HT-29细胞的增殖、迁移和侵袭能力均低于NC组(均P<0.05),siABHD11-AS1+miR-133a inhibitor组HT-29细胞的增殖、迁移和侵袭能力均高于siABHD11-AS1组(均P<0.05),siABHD11-AS1+miR-133a inhibitor+siEIF4A1组HT-29细胞的增殖、迁移和侵袭能力均低于siABHD11-AS1+miR-133a inhibitor组(均P<0.05)。(4)miR-133a inhibitor组HT-29细胞中EIF4A1蛋白表达量高于NC组(P<0.05);siABHD11-AS1组HT-29细胞中EIF4A1蛋白表达量低于NC组,而siABHD11-AS1+miR-133a inhibitor组HT-29细胞中EIF4A1蛋白表达量高于siABHD11-AS1组(均P<0.05)。结论 ABHD11-AS1在结直肠癌细胞中呈高表达,抑制其表达后结直肠癌细胞的生长和转移能力均下降,其可能通过调控miR-133a/EIF4A1信号轴发挥作用。

CAP2和EIF4A1在结肠癌患者中的表达及临床意义

目的探讨腺苷酸环化酶相关蛋白2(CAP2)和真核起始因子4A1(EIF4A1)在结肠癌组织中的表达及临床意义。方法选取2011年1月至2014年10月在本院行手术治疗的79例结肠癌患者的癌组织和对应癌旁组织为研究对象。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组织中CAP2和EIF4A1的mRNA表达水平,免疫组化检测各组织中CAP2和EIF4A1的蛋白表达水平;分析结肠癌组织中CAP2和EIF4A1蛋白表达与患者临床病理特征的关系,Kaplan-Meier法分析CAP2和EIF4A1蛋白表达与患者预后的关系,Cox比例风险模型分析影响结肠癌患者预后的因素。结果结肠癌组织中CAP2和EIF4A1的mRNA表达水平均显著高于癌旁组织,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结肠癌组织中CAP2和EIF4A1的蛋白阳性表达率分别为58.23%、55.70%,癌旁组织中CAP2和EIF4A1的蛋白阳性表达率分别为22.78%、18.99%。与癌旁组织比较,结肠癌组织中CAP2和EIF4A1的蛋白阳性表达率均显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结肠癌组织中CAP2和EIF4A1表达与TNM分期、浸润深度、分化程度及淋巴结转移密切相关,差异均有统计学意义(均P<0.05)。CAP2阳性表达的患者5年生存率显著低于阴性表达患者,EIF4A1阳性表达的患者5年生存率显著高于阴性表达患者,上述差异均有统计学意义(均P<0.05)。淋巴结转移、CAP2及EIF4A1是影响结肠癌患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论 CAP2和EIF4A1参与结肠癌的发生和发展,可成为判断结肠癌治疗和预后的潜在生物学指标。