真核转录因子-κB、真核转录因子κB抑制因子激酶βmRNA在染铅近曲肾小管上皮细胞中的表达

目的研究铅对近曲肾小管上皮细胞真核转录因子κB(NF-κB)、真核转录因子κB抑制因子激酶βmRNA(IKKβmR NA)表达的影响,探讨其与铅致近曲肾小管上皮损伤的可能关系。方法应用SYBR Green I标记双链接酸;ABI Prism 7000荧光定量PCR检测染铅近曲肾小管上皮细胞中NF-κB、IKKβmRNA的表达。结果 NF-κB、IKKβ在染铅近曲肾小管上皮细胞中的表达水平均明显高于对照组(P均<0．01);其表达水平随染铅水平升高而升高。结论 NF-κB、IKKβ基因表达异常,可能与铅引起免疫功能失衡导致小管上皮细胞损伤有关。

真核转录起始因子4E在食管癌中的表达及其与微淋巴管密度的关系

目的:观察真核转录起始因子4E(eIF4E)在食管癌组织中的表达并计数微淋巴管密度(MLVD),探讨eIF4E与食管癌发生和转移的关系以及在食管癌微淋巴管生成中的作用。方法:应用免疫组织化学技术检测75例食管癌石蜡标本切片中eIF4E和D2-40的表达,以26例癌旁组织、55例正常食管组织为对照;采用Image Pro Plus(IPP)6.0图像分析软件对采集的图片进行分析。结果:eIF4E在食管癌组织(0.048±0.023)中的表达较癌旁(0.028±0.023)和正常食管组织(0.013±0.016)高(P<0.05),且随着食管癌分化程度的降低,表达强度逐渐增强;eIF4E在淋巴结转移组(0.068±0.014)中的表达高于非淋巴结转移组(0.033±0.016)(P<0.05);eIF4E在中晚期食管癌组中的表达高于早期食管癌组(P<0.05);eIF4E的表达与患者的性别、年龄无关(P>0.05)。低分化食管癌组中的MLVD较中分化和高分化的MLVD高;淋巴结转移组MLVD较未转移组高(P<0.05)。eIF4E的表达与食管癌MLVD呈正相关(r=0.624,P<0.01)。结论:eIF4E在食管癌组织中有较高的表达,且与淋巴结转移、分化程度及食管癌组织的MLVD密切相关,提示食管癌的发生和淋巴转移可能与eIF4E有关,eIF4E可能作为食管癌新的标志物以及评估食管癌进展的客观指标。

真核转录的结构生物学——2006年诺贝尔化学奖简介

用X射线晶体学方法测定的一系列RNA聚合酶Ⅱ复合物结构揭示了真核转录的分子机制.

真核转录的分子基础——2006年诺贝尔化学奖成果简介

美国斯坦福大学医学院教授RogerD.Kornberg被授予2006年度诺贝尔化学奖,以表彰他在“真核转录的分子基础”研究领域所作出的杰出贡献。Kornberg的贡献在于,其花费10年时间构建了体外酵母细胞转录体系,并将结晶学与生化知识相结合,描述了RNA聚合酶II及包括通用转录因子、调节器、DNA和RNA在内的复合物结构图。此外,他还首先在分子水平上阐明了真核细胞中转录机制的全过程。现有的证据表明转录分子机制的研究对于各种疾病的治疗以及干细胞的分化调节均具有重大的实际意义。

揭开真核细胞转录的奥秘

2006年度诺贝尔化学奖授予美国科学家罗杰·科恩伯格（Roger D．Kornberg）教授，以表彰他在研究真核细胞转录分子机制中做出的卓越贡献。存储在基因中的遗传信息如何被“阅读”转录，又如何被“翻译”生产为蛋白质，是研究生命活动的中心问题。科恩伯格在分子水平向人们展示了真核细胞从DNA（脱氧核糖核酸）到RNA（核糖核酸）转录过程的详实图片。

蛋白质－DNA相互作用与真核基因转录

结合最近几年对真核转录调节因子和ＤＮＡ的结构与机能研究，概述了蛋白质－蛋白质及蛋白质－ＤＮＡ相互作用方式以及介导相互作用的分子结构基础，论述了转录因于之间、转录因子与ＤＮＡ之间相互作用过程中的协同与拮抗作用、发生机制及其在真核基因转录调节中的普遍性和重要意义。

真核基因转录的分子机制——2006诺贝尔化学奖简介

2006年10月2日,瑞典皇家科学院宣布,将本年度诺贝尔化学奖授予美国科学家罗杰·科恩伯格(RogerD.Kornberg),以表彰他在真核基因转录的分子基础研究领域所做出的杰出贡献。真核基因转录的分子机制是什么?这一机制是怎样被发现的?本文拟从这两个方面对这一领域做一点粗浅的介绍。

雄激素受体对真核基因转录的调控

雄激素受体是典型的核受体,它对真核基因转录的调控作用受到日益广泛的重视。本文主要阐述了雄激素受体的分子结构,重点总结了雄激素受体介导真核基因转录起始的过程,概述了激素受体辅助作用因子及受体的核转运等对受体功能的调控,这些是进一步研究真核基因表达调控机制及治疗雄激素相关疾病的理论基础。

中介体复合物结构与转录调控机制

在真核生物中,中介体复合物(Mediator complex)接收转录激活子/基因特异型转录因子携带的转录激活信号,并将之传递给核心转录机器——RNA聚合酶II,在这个过程中起到桥梁的作用。中介体复合物与RNA聚合酶II、各种通用转录因子组装成转录前起始复合物,对于真核生物几乎所有基因的转录都是必需的。中介体复合物成分复杂多变,结构柔性较强,针对它的结构生物学和转录调控机制的研究已超过30年。文章小结了中介体复合物的发现历程、功能和组成以及结构生物学方面的突出成果,并对它可能的转录调控机制进行了初步阐释。

皮肤鳞状细胞癌中Axl、NF-κB的表达及意义

目的观察Axl(Aexekleto)、真核转录因子-κB[NF-κB(P65)]在正常皮肤组织和皮肤鳞状细胞癌(SCC)组织中的表达情况及特点,并探讨其在皮肤SCC发生发展中可能的意义。方法采用免疫组化SABC法检测20例正常皮肤组织及40例皮肤SCC中Axl、NF-κB(P65)的表达。结果 Axl在皮肤SCC组织和正常皮肤组织中的阳性表达率分别是87.5%和0%,两者相比差异有统计学意义(χ2=42.0,P<0.05)。NF-κB(P65)在皮肤SCC组织和正常皮肤组织中阳性表达率分别为82.5%和10.0%,两者相比差异有统计学意义(χ2=28.83,P<0.05)。Axl及NF-κB(P65)在皮肤SCC中的表达等级相关系数rs=0.224,P=0.165,差异无统计学意义。结论 Axl介导的信号通路可能在皮肤SCC的发生发展过程中发挥一定的作用。

我国辣椒种质资源eIF4E基因多态性分析

利用国家蔬菜种质资源库的1904份辣椒资源材料,采用测序技术获得eIF4E(eukaryotic translation initiation 4E)基因exon1序列,研究e IF4E基因多样性及我国辣椒种质资源群体多样性。结果表明:在1904份材料中共发现17个单倍型,14个有义多态性位点,其中9个为新的位点,位点大多集中在eIF4E蛋白表面环上;8个地理群体的平均单倍型多样性(Hd)和平均核苷酸多样性(Pi)分别为0.519和0.00210;群体间分化指数(Fst值)及基因流(Nm)表明不同群体间表现差异的分化程度;AMOVA分析表明总变异主要来源于群体内个体间的变异(97.23%),只有2.77%变异发生在群体间。本研究将有助于了解我国辣椒eIF4E基因多样性,为抗PVY育种提供更多抗源材料。

大鼠睾丸组织uPA基因启动子区的克隆与分析

目的:克隆大鼠睾丸组织uPA基因的启动子区并对该序列进行分析。方法:从大鼠睾丸组织中提取基因组DNA,以其为模板设计uPA基因引物,运用降落PCR法扩增uPA基因5'端上游的真核转录调控序列。测序得到的PCR产物用启动子区的分析软件分析,并与其DNA序列进行比对。结果:得到的uPA基因长度为1572bp(登录号X65651)。经软件分析:该序列包含uPA基因完整的开放阅读框(ORF)、21bp的外显子部分,1551bp区域为转录起始的上游部分在其5'端UTR区的-30bp位置有一个不典型的TATA盒,其上游有非常明显的GC盒及启动子区常见的AP1(activeprotein1)、SP1等结合位点。结论:成功克隆了大鼠睾丸组织uPA基因启动子区。分析表明,该片段包含真核转录调控区域、不典型的TATA盒、典型的GC盒及启动子区所常见的AP1、SP1等结合区域。

NF-κB/P65,p-IκBα,IκKα在皮肤SCC和BCC中的表达和意义

目的:探讨NF-κB信号转导通路中真核细胞转录因子κ(BNF-κB/P65)、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)以及真核细胞转录因子抑制蛋白激酶(IκKα)在皮肤SCC和BCC中的表达和三者之间关系,为临床治疗提供新思路。方法:采用免疫组化SP法检测53例皮肤癌组织(其中SCC27例,BCC26例)和20例正常皮肤组织中NF-κB/P65,p-IκBα和IκKα蛋白的表达。结果:与正常皮肤组织相比,NF-κB/P65,p-IκBα和IκKα三者在SCC,BCC中均高表达(P<0.05);三者在SCC和BCC中的表达具有统计学意义(P<0.05);IκK蛋白的表达与SCC的分化程度无明显相关性(P>0.05)。在BCC和SCC中,IκKα的表达与p-IκBα的表达呈正相关关系(r=0.536,P<0.05),NF-κB/P65和p-IκBα的表达呈正相关关系(r=0.435,P<0.05)。结论:NF-κB信号传导通路可能在BCC和SCC的发生中起重要作用。

核因子-κB的活化与大鼠脓毒症胃肠黏膜屏障的关系

目的探讨大鼠脓毒症时胃肠粘膜核因子-κB的活性,以及核因子-κB的活性与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞凋亡的关系。方法采用盲肠结扎穿孔术做大鼠的脓毒症模型。分别在术后1,3,6,12,24,48 h活杀大鼠,取大鼠肠黏膜组织,用酶联免疫法测TNF-α、MCP-1的含量,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用凝胶电泳迁移法测NF-κB的活性。结果NF-κB的活性、TNF-α、MCP-1的含量在大鼠脓毒症时明显升高,细胞凋亡也明显增加,与对照组对比差异有统计学意义(P<0.01);结论TNF-α、MCP-1是脓毒症早期激活的细胞因子,它们的释放与NF-κB的活性密切相关;大量的细胞凋亡是肠道粘膜细菌移位的重要机制之一;明显与细胞因子的大量释放有关。

七叶苷抑制PERK/eIF2A/ATF4信号通路改善肝细胞脂质堆积的研究

目的探讨七叶苷通过抑制蛋白激酶RNA样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)/真核翻译起始因子2A(eukaryotic translation initiation factor 2A,eIF2A)/激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)信号通路改善肝细胞脂肪变性的治疗作用和机制。方法采用人源正常肝细胞系HL-7702,利用0.5mmol/L游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)(油酸:棕榈酸=2:1)诱导体外肝细胞脂肪变性模型,经50μmol/L、200μmol/L七叶苷处理24h。测定细胞内生化指标丙氨酸转氨酶(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)和三酰甘油(triacylglycerol,TG)含量。采用尼罗红脂肪荧光染色法检测细胞内脂滴;采用定量反转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcriptase-mediated polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测细胞内脂质代谢过程相关基因的转录水平。采用蛋白质印迹(Westernblot,WB)检测细胞内促凋亡因子Caspase-3和Bax的蛋白表达量及PERK/eIF2A/ATF4信号通路相关蛋白和磷酸化水平。结果生化指标检测结果证实,50μmol/L和200μmol/L的七叶苷可显著降低FFA诱导肝细胞内MDA、ALT和AST水平(P<0.05),并显著增加细胞内GSH水平(P<0.05)。WB结果显示七叶苷可显著降低细胞内促凋亡因子Caspase-3和Bax的蛋白表达量(P<0.01)。尼罗红染色和TG含量检测结果证实七叶苷可显著减少细胞内脂滴堆积和TG含量(P<0.05)。qRT-PCR结果显示七叶苷处理后肝细胞内PPARγ、FASN、Srebf1、Dgat2、Mvk、Acaca的表达量均显著降低(P<0.05)。在机制方面,七叶苷可显著降低肝细胞中PERK、eIF2A和ATF4的磷酸化水平(P<0.05)。结论七叶苷可通过调控PERK/eIF2A/ATF4信号通路改善肝细胞脂质堆积,对维护肝细胞健康状态起到积极作用。

生命的故事——解读2006年诺贝尔化学奖

2006年诺贝尔化学奖被授予美国科学家罗杰.科恩伯格,以表彰他对真核转录的分子基础的研究工作。本文简单阐释了真核转录的研究历程,重点介绍了科恩伯格在分子水平上展示真核细胞中双链DNA到mRNA的转录过程的研究成果。

NF-κB与MTA2在乳腺浸润性导管癌中的表达及相关性研究

目的探讨核转录因子κB(NF-κB)与肿瘤转移相关基因2(MTA2)在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及其相关性,并分析其与乳腺浸润性导管癌临床病理参数之间的关系。方法采用实时定量聚合酶链反应检测68例乳腺浸润性导管癌患者的癌组织及配对癌旁正常乳腺组织中NF-κB与MTA2基因的表达情况,并分析其与各临床参数的关系。结果 NF-κB和MTA2在乳腺浸润性导管癌组织中的表达都与年龄、肿瘤大小及组织学分期等指标无关(P>0.05);与淋巴结转移及TNM分期等指标有关(P<0.05)。此外,MTA2在乳腺浸润性导管癌ER阳性患者组织中呈高表达(P<0.05)。乳腺浸润性导管癌组织中NF-κB与MTA2的表达呈正相关(r=0.808,P=0.012)。结论检测NF-κB与MTA2在乳腺浸润性导管癌组织中的表达水平,可为乳腺浸润性导管癌的诊断,侵袭转移程度和预后提供理论依据。