新城疫病毒在感染早期通过Akt/mTOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1通路激活宿主真核翻译起始因子eIF4E的研究

为阐明新城疫病毒(NDV)在感染宿主细胞后对宿主真核翻译起始因子以及相关调控通路的调节作用,本实验采用western blot检测NDV感染He La细胞早期真核翻译起始因子e IF4F的磷酸化水平以及Akt/m TOR/4E-BP1和p38/Erk/Mnk1调控通路的活化情况,同时用紫外线(UV)灭活的NDV进行对照试验。结果显示,NDV感染He La早期能够迅速诱导真核起始因子e IF4E的磷酸化,而UV灭活NDV作用的细胞则无此现象。通过对相关调控通路的检测发现,NDV在感染早期对e IF4E的磷酸化是通过激活p38/Erk/Mnk1通路实现的。此外,NDV感染还可以激活Akt/m TOR/4E-BP1通路,诱导e IF4E阻遏蛋白4E-BP1发生磷酸化并解离出e IF4E,从而促进e IF4F复合体的形成,确保真核翻译的进行。该结果对深入解析NDV与宿主之间的相互作用以及翻译相关信号通路参与调控病毒复制的机制具有重要意义。

真核转录起始因子4E在食管癌中的表达及其与微淋巴管密度的关系

目的:观察真核转录起始因子4E(eIF4E)在食管癌组织中的表达并计数微淋巴管密度(MLVD),探讨eIF4E与食管癌发生和转移的关系以及在食管癌微淋巴管生成中的作用。方法:应用免疫组织化学技术检测75例食管癌石蜡标本切片中eIF4E和D2-40的表达,以26例癌旁组织、55例正常食管组织为对照;采用Image Pro Plus(IPP)6.0图像分析软件对采集的图片进行分析。结果:eIF4E在食管癌组织(0.048±0.023)中的表达较癌旁(0.028±0.023)和正常食管组织(0.013±0.016)高(P<0.05),且随着食管癌分化程度的降低,表达强度逐渐增强;eIF4E在淋巴结转移组(0.068±0.014)中的表达高于非淋巴结转移组(0.033±0.016)(P<0.05);eIF4E在中晚期食管癌组中的表达高于早期食管癌组(P<0.05);eIF4E的表达与患者的性别、年龄无关(P>0.05)。低分化食管癌组中的MLVD较中分化和高分化的MLVD高;淋巴结转移组MLVD较未转移组高(P<0.05)。eIF4E的表达与食管癌MLVD呈正相关(r=0.624,P<0.01)。结论:eIF4E在食管癌组织中有较高的表达,且与淋巴结转移、分化程度及食管癌组织的MLVD密切相关,提示食管癌的发生和淋巴转移可能与eIF4E有关,eIF4E可能作为食管癌新的标志物以及评估食管癌进展的客观指标。

E2F转录因子4在肿瘤中的研究进展

E2F转录因子4(E2F4)是一种转录抑制因子,可通过调控其靶基因影响细胞周期和细胞增殖、分化等过程。过去普遍认为E2F4是肿瘤抑制因子,但近年来研究表明,E2F4可促进多种肿瘤的发生、发展和转移。本文主要对E2F4的结构、功能和在不同肿瘤中的作用及其机制进行综述,以探讨E2F4在肿瘤细胞生命活动中的意义,为肿瘤诊治和预后判断中靶点的选择提供参考。

真核细胞翻译起始因子eIF4E与头颈部鳞状细胞癌

真核细胞翻译起始因子 e IF4 E对 m RNAs的翻译起重要作用 ,其过度表达可影响细胞的生长和分化 。

心脏转录因子GATA结合蛋白4真核表达质粒的构建

背景:有研究表明心脏转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)与先天性心脏病的发生有密切的关系,但其机制不明,而目前尚未查及GATA4真核表达质粒构建类的报道。目的:构建人类心脏特殊转录因子GATA4的真核表达质粒。方法:对重组质粒pUC57-GATA4进行酶切获得GATA4基因编码区序列,将真核表达载体pCMV-Myc和GATA4基因在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pCMV-Myc-GATA4,转化至大肠杆菌,提取质粒后经聚合酶链反应、双酶切及测序鉴定。结果与结论:实验成功酶切重组质粒获得GATA4基因编码区约1.3kb的目的片段,聚合酶链反应和酶切鉴定以及基因测序结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的GATA4基因序列,证实成功构建了含有GATA4基因的真核表达重组质粒。

结肠腺癌细胞中eIF-4E调节NF-κB表达及对乙酰肝素酶转录表达和活性的影响

背景与目的:近期研究显示,人类肿瘤细胞部分转录因子可能受真核细胞起始因子-4E(eukaryoticinitiationfactor4E,eIF-4E)在翻译水平上的调节,此关键转录因子表达水平的变化可从转录水平改变某些恶性相关基因产物的表达。本研究旨在探讨结肠腺癌LS-174T细胞中eIF-4E对转录因子NF-κB表达和活性的影响,并观察NF-κB活性水平对乙酰肝素酶基因转录的作用。方法:将与eIF-4EmRNA翻译起始区互补的反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)经脂质体包裹后转染人结肠癌细胞LS-174T,以阻抑eIF-4E表达。随之使用Westernblot和电泳迁移改变分析(electrophoreticmobilityshiftassays,EMSA)方法检测NF-κB蛋白表达量及活性水平。通过RT-PCR、Westernblot方法观察乙酰肝素酶转录水平和蛋白表达量的改变;乙酰肝素酶活力采用特异酶活性检测方法,以放射性标记的硫酸乙酰肝素做为底物,凝胶过滤层析分离酶降解产物来分析。结果:针对eIF-4E的20个残基的ASODN经脂质体转染LS-174T细胞后,eIF-4E基因表达在转录和翻译水平都受到显著阻滞。eIF-4E基因阻抑表达引起结肠癌LS-174T细胞NF-κB蛋白表达量及其活性的显著下降;此外,转录因子NF-κB的下调也导致乙酰肝素酶基因的转录表达下降。

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠磷酸化真核翻译起始因子2α和激活转录因子4表达的变化

目的:了解新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后磷酸化真核翻译起始因子2α[eIF2α(p)]、激活转录因子4(ATF4)表达的变化。方法:7日龄新生SD大鼠80只,随机分为2组:假手术组和HIBD组,每组各40只。HIBD组采用Rice方法建立新生大鼠HIBD模型,分别于缺氧缺血(HI)后6、12、24和72 h取其脑组织切片,采用免疫组织化学方法检测病变侧大脑皮质eIF2α(p)、ATF4蛋白的表达。假手术组不行缺氧缺血处理,采用同样方法检测其eIF2α(p)、ATF4蛋白的表达。结果:假手术组eIF2α(p)、ATF4蛋白少量表达,各时间点无明显变化(P>0.05);HIBD组6 h可以观察到较多eIF2α(p)、ATF4蛋白,12 h达到高峰,72 h明显减少,但仍高于假手术组。HIBD组与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。HIBD组各时间点比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:eIF2α(p)、ATF4参与了新生大鼠HIBD病理生理过程。HIBD可能诱发了内质网应激反应,启动了PKR样内质网激酶(PERK)介导的未折叠蛋白应答(UPR)通路。

番茄真核翻译起始因子4E基因RNA干涉及其抗病毒特性研究

植物真核翻译起始因子4E(eIF4E)在蛋白质翻译过程中发挥重要作用.最近研究表明eIF4E在参与植物病毒互作,影响病毒在寄主中复制和侵染过程.文中通过RNA干涉调控番茄eIF4E表达,鉴定eIF4E在植物病毒互作中的作用.根据数据库假设性一致序列(TC171564,TC170275)分别克隆了番茄"中蔬五号"SleIF4E基因及其异构体基因SleIF(iso)4E.构建了SleIF4E RNAi抑制表达载体pSL4D,通过农杆菌介导的方法导入番茄品种"中蔬五号"基因组.PCR检测和Southern blot结果表明,目标基因已整合到番茄基因组中.通过半定量RT—PCR对转基因番茄进行eIF4E表达分析,表明pSL4D转化番茄中eIF4E得到不同程度抑制.转基因植株分别接种PVY和CMV两种病毒,病毒ELISA测定和病毒RNA积累量分析表明,pSL4D转化植株相对于对照组均获得不同程度的病毒抗性,番茄eIF4E参与PVY的复制或侵染寄主过程.就不同病毒而言,RNAi对PVY抗性的调控效果比CMV调控效果好,抑制eIF4E表达可提高植物对PVY的抗性.

真核细胞翻译起始因子4E在肾癌细胞中的表达及意义

目的:探讨真核细胞翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor 4E,eIF4E)在人肾癌细胞中的表达及意义。方法:采用Western blot法检测不同人肾癌细胞系中eIF4E和phospho-eIF4E蛋白的表达水平。siRNA转染肾癌细胞敲除eIF4E,检测肾癌细胞生长。Western blot法检测雷帕霉素处理过的肾癌细胞中phospho-e4E和Akt的表达。结果:在肾癌细胞系中786-0、769-P和OS-RC-2中,eIF4E和phospho-eIF4E基因及蛋白表达明显高于人肾细胞系组(P<0.05)。敲除肾癌细胞eIF4E基因可抑制肾癌细胞的生长。雷帕霉素处理过的肾癌细胞phospho-eIF4E和Akt的表达明显升高。结论:eIF4E和phospho-eIF4E在肾癌细胞中高表达,可促进肾癌细胞生长,与肾癌的进展密切相关。

喉癌eIF4E基因的体外转录

目的克隆喉癌eIF4E基因编码区的cDNA序列,并构建其体外转录载体,获得eIF4E基因编码区mRNA,以便进一步的体外实验研究。方法利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法,以喉癌Hep-2细胞mRNA为模板,扩增获得全长eIF4E编码区cDNA,与pMD18T连接作全自动测序,并利用基因重组技术构建eIF4E基因mRNA体外转录载体pGEM-7zf+eIF4E。用内切酶XhoI将含有eIF4E基因mRNA的pGEM-7zf+eIF4E质粒消化成线性,以此为模板体外转录出用[a-32P]UTP标记的靶eIF4E基因编码区mRNA。结果经测序证实获得的eIF4E基因cDNA序列与GeneBank一致,并成功构建了体外转录质粒pGEM-7zf+eIF4E。结论成功构建了体外转录质粒pGEM-7zf+eIF4E,为进一步研究eIF4E的功能奠定了基础。

乳腺浸润性导管癌患者术后癌组织中真核翻译起始因子4e、3h和富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体5表达特征

目的检测乳腺浸润性导管癌患者术后癌组织中真核翻译起始因子(EIF)4e、3h和富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体(LGR)5的表达及其相关性。方法 132例乳腺浸润性导管癌术后组织蜡块及临床资料为研究组,经病理证实为正常乳腺小叶和导管上皮组织85例为对照组,选择EIF4e、3h和LGR5的多克隆性抗体,应用免疫组化SP法检测3种蛋白的表达。结果研究组EIF4e、3h和LGR5表达阳性率明显高于对照组,研究组EIF4e、3h和LGR5表达与肿瘤最大径、脉管浸润、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和Ki67的表达均具有相关性,EIF4e表达与淋巴结转移相关。研究组EIF4e和3h、EIF3h和LGR5表达正相关。结论乳腺浸润性导管癌患者术后组织中EIF4e、3h和LGR5高表达且具有协同作用,三者参与肿瘤的发生和进展,术后联合检测EIF4e、3h和LGR5的表达可能对判断预后有一定价值。

心脏转录因子Nkx2-5、GATA-4真核表达质粒的构建

目的:构建人类心脏特异性转录因子Nkx2-5、GATA-4的真核表达质粒,探讨Nkx2-5、GATA-4在心脏发育及先天性心脏病发病过程中的作用奠定基础。方法:以质粒人脑c DNA为模板,并设计上下游引物扩增Nkx2-5、GATA-4编码区序列。将真核表达载体pCDNA 3.1-HA、pCDNA 3.1-flag分别和Nkx2-5、GATA-4的PCR产物分别在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pCDNA 3.1-HA-Nkx2-5、pCDNA 3.1-flag-GATA-4,转化至大肠杆菌,质粒抽提后经PCR、双酶切及测序鉴定。结果:成功设计引物扩增出Nkx2-5、GATA-4基因编码区约1 kbp及1.3 kbp的目的片段,PCR和酶切鉴定结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的Nkx2-5、GATA-4基因序列。结论:成功构建了含有Nkx2.5、GATA4的真核表达重组质粒,为后续研究奠定基础。

siRNA对人食管癌EC9706细胞真核起始因子4E表达的影响

目的探讨siRNA对人食管癌EC9706细胞中eIF4E表达的影响。方法针对GeneBank中eIF4E基因的不同靶点,设计并合成两条特异siRNA及一条无义siRNA寡核苷酸模板,利用体外转录法合成siRNA,在脂质体介导下以150ng/μl、200ng/μl和250ng/μl三种浓度转染EC9706细胞,分别培养24h、48h、72h,同时设正常对照组。采用免疫细胞化学及原位杂交技术检测转染前后EC9706细胞中eIF4E蛋白和mRNA的表达;应用流式细胞技术检测转染前后EC9706细胞周期的变化情况。结果转染siRNA后细胞形态发生明显改变。不同浓度的两条特异siRNA转染细胞后,eIF4E蛋白及mRNA表达量均较正常对照组降低,并且具有显著的剂量依赖性(P<0.05),但两转染组之间相比,差异无统计学意义(P>0.05);无义siRNA未表现出对eIF4E基因表达的抑制效应(P>0.05);两条特异siRNA转染组与无义siRNA转染组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。三种不同浓度siRNA转染细胞72h后与无义转染组及正常对照组相比,G0/G1期细胞比例显著增加,S期细胞比例相对减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论特异性siRNA能有效抑制人食管癌EC9706细胞中eIF4E基因的表达,抑制细胞增殖。

真核翻译起始因子4G1在老年子宫内膜样癌患者中表达及临床意义

目的 检测真核翻译起始因子(eIF)4G1在老年子宫内膜样癌患者组织中的表达,并分析其与子宫内膜样癌临床病理参数的关系。方法 分别采取实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测eIF4G1 mRNA表达,免疫组化PV-6000法及Western免疫印迹检测eIF4G1蛋白表达水平。统计学方法分析eIF4G1表达与子宫内膜样癌临床病理学参数的关系。结果 免疫组化结果表明,eIF4G1在正常子宫内膜、非典型增生子宫内膜和子宫内膜样癌组织中阳性率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。eIF4G1表达水平与子宫内膜样癌组织分化程度、FIGO分期、肌层浸润深度及脉管癌栓显著相关(P均<0.05)。子宫内膜样癌组织中eIF4G1 mRNA及蛋白表达均明显高于癌旁内膜组织(P<0.05)。结论 eIF4G1在子宫内膜样癌中表达上调,且其表达水平与子宫内膜样癌的恶性生物学行为相关。eIF4G1有望成为子宫内膜样癌疾病诊断与靶点治疗的重要新型生物标志物。

真核起始因子4E反义寡核苷酸对人食管癌EC-1细胞中真核起始因子4E表达的影响

目的:探讨真核起始因子4E(eIF4E)反义寡核酸(ASODN)对人食管癌EC-1细胞中eIF4E表达的影响。方法:将针对eIF4E不同基因位点的2条反义寡核苷酸(ASODN1、2)和1条无义寡核苷酸(N-ODN)转染EC-1细胞(设5、10、15μmol/L3个转染浓度),分别培养24、48、72h,并设空脂质体转染作为空白对照,采用免疫细胞化学和原位杂交方法检测转染后细胞中eIF4E蛋白和mRNA表达的变化。结果:ASODN1、2转染EC-1细胞培养24、48、72h后,各组中eIF4E蛋白和mRNA的表达均降低,2者分别与空白对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);ASODN1、2组每个时间段内随浓度增加ASODN抑制效应增强,差异具有统计学意义(F=9.423、10.284、10.496、7.621、8.420和9.089,P<0.05),组间相同时间点、相同浓度的抑制效应比较差异无统计学意义(P>0.05);NODN组和空白对照组对eIF4E的表达均无抑制效应。结论:特异性的ASODN能有效抑制人食管癌EC-1细胞中eIF4E的表达。

真核翻译起始因子4E

真核翻译起始因子4E（eukaryotictranslationini—tiationfactor4E，eIF4E）在肿瘤形成和进展过程中起重要作用。目前，直接或间接针对eIF4E的治疗药物的研究已取得很大进展。深入了解elF4E的功能及其在翻译起始阶段调节肿瘤形成的作用，为更好地研制新型有效的抗肿瘤药物提供理论依据。

乳腺癌eIF4E对免疫细胞浸润的影响及机制的初步研究

目的:研究乳腺癌真核翻译起始因子4E(eIF4E)表达对免疫细胞浸润的影响及作用机制。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)网站获取乳腺癌数据,分析eIF4E的表达与预后和临床特征的关系。通过TISIDB数据库分析乳腺癌eIF4E表达与免疫亚型及免疫细胞浸润的关系。通过单样本基因集富集分析对免疫细胞浸润和上皮-间充质转化(EMT)抑制基因集进行评分;分析eIF4E不同表达水平时免疫细胞浸润的差异以及EMT抑制基因集和免疫细胞浸润的相关性。蛋白免疫印迹和免疫荧光实验研究乳腺癌eIF4E表达对EMT相关蛋白表达的影响,Transwell实验研究eIF4E表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:eIF4E在乳腺癌淋巴细胞减少型(C4)中表达最高。乳腺癌中eIF4E高表达时抗肿瘤免疫细胞浸润减少(P<0.05),免疫抑制细胞浸润增多(P<0.05);同时eIF4E表达与EMT抑制基因集评分呈负相关(P<0.05),而EMT抑制基因集评分与许多抗肿瘤免疫细胞浸润呈正相关(均P<0.05)。免疫印迹结果显示,乳腺癌eIF4E高表达时EMT相关蛋白波形蛋白(Vimentin)的表达升高(t=11.83、5.927,均P<0.05),而E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达降低(t=2.848、8.599,均P<0.05),免疫荧光实验得到了相同的结果(t=6.577、7.843、12.48、4.406,均P<0.05)。Transwell实验显示eIF4E的高表达增强了乳腺癌细胞迁移和侵袭能力(t=13.81、8.9、15.27、4.954,均P<0.05)。结论:乳腺癌eIF4E表达通过促进EMT来影响免疫细胞的浸润。

真核翻译起始因子4E在初治多发性骨髓瘤患者中的表达和临床意义

目的:探讨初治多发性骨髓瘤(NDMM)患者骨髓标本中真核翻译起始因子4E(eIF4E)的表达情况及其临床意义。方法:采用免疫组织化学染色方法分析75例NDMM患者和25例良性骨髓疾病ITP患者骨髓活检标本中eIF4E蛋白的表达情况。收集临床资料,分析NDMM患者骨髓标本中eIF4E蛋白表达与临床特征的相关性及其预后意义。结果:NDMM患者骨髓标本中eIF4E蛋白表达阳性率明显高于良性骨髓疾病患者(P<0.001)。eIF4E蛋白表达阳性与NDMM患者血清乳酸脱氢酶升高存在相关。单因素和多因素分析结果表明,eIF4E蛋白表达阳性与NDMM患者总生存期(OS)缩短显著相关,是影响NDMM患者OS的独立危险因素。结论:eIF4E蛋白表达阳性是NDMM患者OS的独立不良预后因素。