日本血吸虫谷胱甘肽转移酶基因在真核表达载体中的亚克隆

目的 将日本血吸虫谷胱甘肽转移酶(GST)基因片段克隆到真核表达载体pBKCMV中,以便对其进行核酸疫苗的研究。方法 特定寡核苷酸引物的设计和合成,TRIZOL试剂提取日本血吸虫成虫RNA,RTPCR法扩增GST基因编码序列,将扩增产物连接pGEMT克隆载体,再亚克隆到真核表达载体pBKCMV中。结果 RTPCR法特异性扩增出SjGST编码基因片段,其大小约为670bp,经双酶切、PCR鉴定表明所构建的质粒pGEMTGST和pBKCMVGST中含有目的基因。结论 pBKCMVGST重组质粒的成功构建,为进一步表达GST及其在血吸虫病免疫诊断、免疫预防中的作用研究提供了条件。