采用异种真皮去细胞基质复合脂肪间充质干细胞行尿道重建修复的实验研究

目的探讨异种真皮去细胞基质（acellular dermal matrix，ADM）种植脂肪间充质干细胞（adipose derived stemceils，ADSC）在兔的尿道重建修复中应用的效果。方法2012年3—11月选取成年雄性新西兰白兔12只，体质量2．5～4．0kg。体外构建长约1cm的尿道缺损模型，随机分为实验组和对照组，每组6只。无菌条件下手术获取实验组的脂肪组织，体外原代培养获取第3代ADSCs，通过细胞形态学和流式细胞术对其进行鉴定；将ADSC种植于人来源的ADM上制成组织工程化尿道。实验组用组织工程化尿道行尿道重建修复，对照组单纯使用ADM重建修复。于术后3、6个月时，每组分别取3只行尿道造影后处死并取修复处尿道行组织学检查，通过HE染色及免疫组化染色方法，使用抗兔细胞角蛋白AE1／AE3抗体检测尿路上皮细胞生长情况及抗兔肌间蛋白抗体检测平滑肌细胞生长情况，评估尿道缺损重建修复的效果。结果光镜下见分离培养的ADSC呈不规则长梭形，大小较为均匀，细胞间有交互联系，呈巢状生长。流式细胞术鉴定：分离培养的ADSC阳性表达CD166、CD105、CD90、CD44阴性表达CD45、CD13两组术后均可通过尿道排尿，尿路造影检查示无狭窄形成。术后3个月组织学检查示实验组修复材料上有平滑肌细胞长人，对照组则未见平滑肌细胞，两组修复材料上均未见上皮细胞生长。术后6个月组织学检查示两组修复材料上均有平滑肌细胞长入，但对照组平滑肌细胞较少；实验组修复材料上可见上皮细胞生长，形成尿路上皮细胞层；对照组未见上皮细胞生长。结论应用组织工程学方法，在异种的ADM上种植ADSCs制成组织工程化尿道进行尿道缺损修复，可促进缺损处尿道的再生，改善尿道修复的效果。

移植异种(猪)去细胞真皮基质修复深度烧伤创面的可行性:12个月随访

背景:深度烧伤患者需要进行植皮治疗,以往的自体皮移植存在皮源不足的问题。目的:探讨异种(猪)去细胞真皮基质修复深度烧伤创面的可行性。方法:纳入41例深度烧伤患者,按照患者意愿分为2组,对照组21例,实施自体刃厚皮移植治疗,观察组20例,实施自体刃厚皮联合异种(猪)去细胞真皮基质移植治疗。移植后随访12个月,观察患者移植后1,2,3,4周的植皮成功率和移植后3,6,9,12个月的植皮收缩率以及创面修复情况,以及移植后1,2,3个月的炎性因子水平,并进行比较。结果与结论:(1)植皮成功率:对两组患者移植后1,2,3,4周的植皮成功率进行差异无显著性意义(P>0.05);(2)植皮收缩率:移植后3,6,9,12个月植皮收缩率比较差异无显著性意义(P>0.05);(3)炎性因子水平:移植后1,2,3个月对两组的炎性因子水平进行检测,不同时间点均无明显改变,且各时间点两组相关炎症检测各项指标水平差异无显著性意义(P>0.05);(4)随访结果:对两组患者进行12个月的随访观察,对照组创面部位未出现严重的瘢痕增生,触之质地柔软;观察组3例早期出现局部色素沉着现象,随时间延长逐渐消退;均未出现明显的瘢痕,仅存在细小、点状瘢痕,修复创面触之柔软;(5)不良事件:两组治疗过程中均未出现不良事件,无死亡病例;(6)结果表明:自体刃厚皮联合异种(猪)去细胞真皮基质移植治疗深度烧伤患者可获得理想的创面修复效果,可改善创面愈合质量,是一种安全有效的修复方案。

无细胞毒性猪去细胞真皮基质制备及转归研究

目的制备无细胞毒性猪去细胞真皮基质(PADM),评价其生物安全性,并观察基质在体内的转归情况。方法取0.3～0.4mm厚的猪断层皮片,用高渗盐水浸泡去除表皮,然后置于氢氧化钠溶液中,常温下水浴持续震荡去除真皮细胞,获得PADM,经交联和消毒后进行细菌学及猪病毒微生物学检测。将PADM植入SD大鼠皮下,于术后动态观察PADM大体及组织学形态变化。结果所获PADM柔软而有弹性,易于塑形,便于手术操作。PADM内无任何细胞成分,胶原纤维排列规则有序,弹力纤维丰富。细菌和病毒微生物学检测结果均为阴性。PADM植入SD大鼠皮下后未引发免疫排斥。术后3周,PADM与创面黏附牢固,不易从创面揭离;术后24周仍然可见其结构;早期PADM被大量炎性细胞浸润,随时间延长成纤维细胞逐渐增多,并出现新生的毛细血管,胶原纤维逐渐排列规则、致密。结论高渗盐水/氢氧化钠方法制备PADM过程简单,所得真皮基质无细胞毒性,生物安全性高,在体内可作为真皮支架长期存在。

去细胞真皮基质的黏弹性研究

目的通过对比分析皮肤的物理参数值评价去细胞真皮基质的黏弹性性质。方法将清洁级日本大耳白兔背部皮肤进行3种不同的创面处理,分别为薄自体皮加上去细胞真皮基质移植到创面组(PADM组)、薄自体皮原位回植组(TS组)、正常皮肤真皮组(NS组)。对该3组皮片进行应力-应变关系的实验。结果从PADM、TS、NS 3组皮肤的应力松弛曲线、蠕变曲线和应力-应变关系曲线可知,在一定应力下,PADM组的应变最小,NS组的应变最大,TS组居于两者之间。结论皮肤的黏弹性力学模型是4参量黏弹性模型。用去细胞真皮基质作为皮肤替代物移植到皮肤创面后,该植皮的弹性较差,变形后的恢复能力也较差,与临床结果相符合。

异种去细胞真皮基质防止气管瘢痕狭窄的实验研究

目的研究去细胞真皮基质促进气管创面修复、抑制瘢痕形成的可行性。方法本实验用1 0只犬制造20 mm×25 mm气管全层黏膜缺损模型,实验组用脱细胞真皮基质覆盖修复创面,对照组创面旷置。于术后2、4、6、8、10周定期进行一般、喉镜、大体、最大瘢痕厚度、HE染色、Masson染色、及电镜观察。结果对照组气管创面瘢痕修复,8周时明显畸形。采用异种去细胞真皮基质修复的创面,4周时发现创面上有假复层柱状纤毛上皮覆盖,10周时管腔形态和大小均无明显变化。结论异种去细胞真皮基质能有效促进气管黏膜缺损的修复,并能有效抑制瘢痕的形成,该材料有可能成为良好的气管黏膜修复材料。

活性真皮基质的研制及生物学活性检测

目的构建含有成纤维细胞(Fb)-胶原-猪去细胞真皮基质(PADM)的活性真皮基质。研究培养液中转化生长因子-β1(TGF-β1)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的分泌情况。方法将Fb与胶原混合种植于PADM的表面,收集第2、4、6、8、10d培养液样本,双抗体夹心ELISA法测定其中TGF-β1、bFGF的含量。结果Fb在胶原内结构完整,与PADM形成复合真皮基质。TGF-β1和bFGF浓度培养第4天与第2天比较显著上升(P<0.01),并达到稳定水平。结论Fb-胶原-PADM真皮替代物可作为构建组织工程全层皮肤的真皮支架。

去细胞真皮基质修复兔巨大肩袖损伤的生物力学研究

目的评价去细胞真皮基质对兔巨大肩袖损伤的修复效果。方法将42只成年雄性新西兰大白兔随机分为3组:巨大肩袖损伤常规手术组(对照组,n=18),去细胞真皮基质治疗组(实验组,n=18),正常组(正常组,n=6),对照组和实验组于术后4、8、12周分批随机取出各组12侧肩袖标本行生物力学测试;正常组于12周取出12侧肩袖标本行生物力学测试。结果生物力学测试显示:在术后各个时间点,实验组腱骨界面的断裂载荷显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);但术后12周二者腱骨界面的断裂载荷仍显著低于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论去细胞真皮基质修补巨大肩袖损伤可增强其腱骨界面的抗拉载荷,有利于巨大肩袖损伤的愈合。

应用去细胞真皮基质重建兔巨大肩袖缺损的实验研究

目的研究去细胞真皮基质修复重建兔巨大肩袖缺损的效果。方法选取40只成年雄性新西兰白兔,8只兔不作任何处理,正常单笼饲养(对照组),将8只兔的双前肢冈上肌腱骨连接处人为造成肌腱缺损,不进行重建修复直接缝合切口(模型组),将24只兔的双前肢冈上肌腱骨连接处人为造成肌腱缺损并用去细胞真皮基质对缺损肩袖进行重建修复(实验组)。比较实验组在实验的第4、8、12周肌腱最大负荷强度,比较三组在实验的第12周肌腱最大负荷强度。结果实验组在实验第4周时真皮基质补片可见大量炎症细胞浸润;第8周修补处可见纤维母细胞、毛细血管和少量的胶原纤维;腱骨连接处有少量的纤维软骨细胞;第12周实验组胶原纤维显著增多,纤维母细胞减少,腱骨连接处可见大量纤维软骨细胞和少量纤维软骨。模型组在实验第12周时肩袖缺损处被瘢痕组织覆盖。实验组肌腱最大负荷强度随时间推移而明显上升,实验的第12周实验组肌腱最大负荷强度低于对照组但高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论兔巨大肩袖缺损可瘢痕愈合,但生物力学强度较低,应用去细胞真皮基质修复重建后可获得组织学愈合与一定的生物力学强度。