大鼠深Ⅱ°烧伤创面修复中羟脯氨酸、胶原比例和真皮细胞DNA增殖周期动态变化

目的探讨大鼠深Ⅱ°烧伤创面修复过程中羟脯氨酸、胶原比例和真皮细胞DNA增殖周期动态变化。方法建立深Ⅱ°烧伤模型SD大鼠35只,其中10只大鼠观察创面愈合面积累积百分比,其余25只均分为5组,分别于烧伤后3、5、7、14和21 d观测创面中羟脯氨酸、胶原比例和真皮细胞DNA增殖周期及创面愈合百分比的变化。另取5只大鼠作为正常对照组。结果烧伤组第14和21天羟脯氨酸含量高于对照组。烧伤组第7、14和21天皮肤组织中Ⅲ/Ⅰ型胶原比例、真皮细胞S期DNA分布高于对照组。创面愈合时间(21.3±1.3)d。结论深Ⅱ°烧伤创面,烧伤后7～21 d主要表现为成纤维细胞增殖和新生胶原合成,伤后14～21 d主要为表皮细胞增殖和迁移。

硒对大鼠肝细胞增殖周期和DNA合成的影响

目的 研究亚硒酸钠对大鼠肝细胞增殖周期和DNA合成的影响。方法 选用雄性SD大鼠 ,每组 5只 ,用 5 ,10和 2 0 μmol/kg的亚硒酸钠腹腔注射染毒。用流式细胞术研究大鼠肝细胞增殖周期和DNA相对含量(DNARC) ,用单细胞凝胶电泳检测DNA损伤。结果 10和 2 0 μmol/kg的亚硒酸钠均可使大鼠肝细胞G0 /G1期细胞显著减少 ,5 μmol/kg的亚硒酸钠虽可使G0 /G1期细胞减少 ,但无显著性差异。S期和G2 /M期细胞以及增殖指数变化不明显。 5 ,10和 2 0 μmol/kg的亚硒酸钠可引起大鼠肝细胞DNARC下降 ,DNA损伤率较对照组显著增高 ,而且DNARC和DNA损伤率之间存在负相关关系 ,随DNA损伤率的增高 ,DNARC下降 ,相关系数为 :- 0 9887(P <0 0 1)。结论 一定剂量的亚硒酸钠不仅改变了大鼠肝细胞的增殖周期 ,还引起DNA损伤 ,并影响DNA合成 ,使DNA相对含量显著下降。

缺锌对胸腺和脾脏细胞增殖周期DNA及蛋白质含量的影响

通过建立大鼠缺锌（ＺＤ）模型，采用流式细胞术，研究缺锌对胸腺、脾脏细胞增殖周期、ＤＮＡ及蛋白质含量的影响。结果表明：（１）ＺＤ组的最终体重、体重增长值、饲料效价、以及血清、毛发、股骨锌均非常显著地低于缺锌对喂（ＰＦ）组。（２）ＺＤ组胸腺、脾细胞的增殖指数和Ｇ＿２＋Ｍ期细胞的百分率非常显著地低于ＰＦ组；胸腺、脾脏的Ｇ０／Ｇ＿１期细胞百分率却非常显著地高于ＰＦ组。（３）ＺＤ组胸腺、脾脏细胞的ＤＮＡ含量、ＤＮＡ指数、蛋白质含量、蛋白质指数显著低于ＰＦ组。缺锌时，ＤＮＡ复制和蛋白质合成受到抑制，致使细胞停滞于Ｇ０／Ｇ＿１期，仅少量进入Ｓ期和Ｇ＿２＋Ｍ期、使增殖指数减低。

镉对大鼠肝细胞增殖周期和DNA合成的影响

目的 研究氯化镉对大鼠肝细胞增殖周期和DNA合成的影响。方法 选用雄性SD大鼠 ,每组 5只 ,用5 ,10和 2 0 μmol/kg的氯化镉腹腔注射染毒。用流式细胞术研究大鼠肝细胞增殖周期和DNA相对含量 (DNARC) ,用单细胞凝胶电泳检测DNA损伤。结果 5 ,10和 2 0 μmol/kg的氯化镉均可使大鼠肝细胞G0 /G1期细胞显著减少 ,S期和G2 /M期细胞以及增殖指数变化不明显。 5 ,10和 2 0 μmol/kg的氯化镉可引起大鼠肝细胞DNARC显著下降 ,DNA损伤率较对照组显著增高 ,而且DNARC和DNA损伤率之间存在负相关关系 ,随DNA损伤率的增高 ,DNARC下降 ,相关系数为 :- 0 9990 (P <0 0 1)。结论 一定剂量的氯化镉不仅改变了大鼠肝细胞的增殖周期 。

高氟对大鼠口腔粘膜细胞增殖周期和DNA合成的影响

目的 研究高氟对大鼠口腔粘膜细胞增殖周期和DNA合成的影响。方法 雄性SD大鼠饮用含 15 0mg/LNaF的蒸馏水溶液 4周 ,用流式细胞术研究大鼠口腔粘膜细胞增殖周期和DNA相对含量 (DNARC) ,用单细胞凝胶电泳检测DNA损伤。结果 高氟能引起大鼠口腔粘膜细胞增殖周期的改变 ,使G2 /M期细胞明显下降 ,DNARC也显著下降 ,DNA损伤率明显升高。另外 ,高氟也造成口腔粘膜组织的氧化应激 ,活性氧族、脂质过氧化产物显著增高 ,还原型谷胱甘肽明显下降。结论 高氟不仅改变了大鼠口腔粘膜细胞的增殖周期 ,还造成氧化应激 。

DPPC抑制A549细胞增殖、阻滞细胞周期及诱导DNA损伤的初步探究

目的探讨鬼臼毒素衍生物（DPPC）抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖作用,阐述DPPC对A549细胞周期阻滞以及DNA损伤的相关分子机制。方法体外培养A549细胞,噻唑蓝（MTT）实验观察DPPC不同浓度或不同时间处理A549细胞后肿瘤细胞的增殖情况;倒置显微镜下观察0.5μmol/L DPPC处理A549细胞后的形态学变化;细胞流式仪检测不同浓度DPPC处理A549细胞后细胞周期的变化;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测周期调控蛋白cyclin B1、cdc2（p34）和p-cdc2以及DNA损伤因子γ-H2AX的表达。并与依托泊苷和未予任何药物处理的A549细胞做对照。结果 MTT实验显示,DPPC不同浓度（0.001~10μmol/L）处理A549细胞48 h后或不同时间（12~72 h）同浓度（0.1μmol/L）处理A549细胞后,能够明显抑制肿瘤细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性;倒置显微镜下见DPPC处理后的A549细胞呈现整体萎缩,出现细胞碎片,细胞膜边缘出现小气泡等形态改变;细胞流式实验表明,DPPC能够显著影响A549细胞周期,使其多数阻滞在G2/M期;Westen blot实验结果显示,DPPC能够促进cyclin B1和cdc2（p34）的表达,同时抑制p-cdc2的表达,并使组蛋白H2AX的磷酸化增加。结论 DPPC能够显著抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖,使细胞周期阻滞在G2/M期,可能与其上调周期调节蛋白cyclin B1、抑制cdc2（p34）磷酸化、诱导细胞DNA损伤有关;此外,DPPC体外表现出优越的抗肿瘤细胞增殖作用。

DNA甲基转移酶抑制剂对结肠癌细胞增殖、凋亡及细胞周期影响的体外研究

目的探讨DNA甲基转移酶抑制剂SGI-1027对结肠癌LoVo细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法取对数生长期LoVo细胞,实验组加入终浓度分别为0.1、1、5、10μmol/L SGI-1027的培养液,对照组用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基同步培养。MTT法检测SGI-1027作用于LoVo细胞24、48、72 h的增殖抑制率;倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;SGI-1027处理后每个浓度收集细胞1×10-6个,采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/碘化丙啶（PI）双染或PI单染流式细胞术分别检测SGI-1027处理后的细胞凋亡率和细胞周期时相分布情况;Western blotting检测SGI-1027对PI3K/Akt通路的影响。结果倒置相差显微镜观察显示,随SGI-1027浓度和作用时间的增加,LoVo细胞的凋亡形态学改变更为显著。除0.1μmol/L SGI-1027处理24 h后的LoVo细胞增殖抑制率与对照组无差异外,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,SGI-1027对LoVo细胞的增殖抑制作用不断增强。与对照组比较,SGI-1027（0.1-10μmol/L）处理LoVo细胞24、48h的凋亡率均升高,且各浓度间的差异均有统计学意义（P〈0.05）。与对照组比较,1-10μmol/L SGI-1027处理后G0/G1期细胞比例及PTEN水平均高于对照组,S期和G2/M期细胞比例及Akt水平均低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论SGI-1027可抑制LoVo细胞的增殖并诱导细胞凋亡及G0/G1期阻滞,可能与其抑制PI3K/Akt通路激活有关,且SGI-1027作用的时间和浓度均对LoVo细胞恶性行为有影响。

细胞周期蛋白K促进食管鳞癌细胞增殖的机制研究

目的:探讨细胞周期蛋白K(CCNK)促进食管鳞状细胞癌(ESCC)发生发展的机制。方法:对中国ESCC高发区155例患者的转录组数据及GSE53625数据库进行CCNK基因差异表达分析;通过转染慢病毒分别在KYSE150、KYSE30及KYSE180细胞中构建CCNK基因稳定敲减(CCNK-SH)和阴性对照(NC)细胞株;利用集落形成实验和CCK-8法检测敲减CCNK基因对ESCC细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测敲减CCNK基因对ESCC细胞周期的影响;分析155例ESCC患者转录组数据,对CCNK差异表达基因进行信号通路富集;应用免疫荧光染色检测DNA损伤的指标γ-H2AX;分析155例ESCC患者转录组数据和RT-qPCR实验验证CCNK基因与DNA损伤修复相关基因表达的情况。结果:CCNK基因在ESCC组织中高表达(P<0.01);与NC组相比,CCNK-SH组细胞增殖和集落形成能力显著降低(P<0.01);敲减CCNK基因能够将ESCC细胞阻滞于G2/M期(P<0.01);免疫荧光染色结果显示,与NC组相比,CCNK-SH组γ-H2AX信号显著增强(P<0.01);CCNK基因表达与DNA损伤相关基因存在显著相关性。结论:CCNK可能通过DNA损伤修复机制参与细胞周期调控,从而影响ESCC细胞的增殖。

植物增殖细胞核抗原与DNA复制关系的研究现状

为了更深入的对植物增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)进行研究,本研究归纳了PCNA的研究现状,总结了PCNA的结构特征和包括PCNA参与DNA复制、DNA损伤修复和细胞周期调控等在内的PCNA的功能特点。目前有关PCNA的研究以医学和动物体为主,有关植物PCNA研究的报道很少且相对落后,但已有文献指出,PCNA调控DNA复制,参与DNA复制以确保植物体正常生长发育,因此植物PCNA的功能值得继续研究。

细胞周期相关基因微阵列在中药抑制肝癌细胞增殖作用机理研究中的应用

目的 :设计DNA微阵列并利用其研究中药抗肿瘤的分子机制。方法 :制备了包含有与细胞周期和DNA损伤调控检测相关的 2 4个基因的cDNA微阵列 ,选择了本实验室已证明对肝癌细胞有抑制效果的中药 ,通过流式细胞仪检测其对细胞周期的影响 ,提取药物作用后的RNA ,反转录后标记探针与微阵列杂交 ,检测中药作用细胞后对细胞周期及损伤检测相关基因转录的影响。结果 :4种中药作用SMMC 772 1后 ,细胞周期基因和损伤检测点基因均有不同程度改变 ,表现为部分上调 ,部分下调 ,这些和流式细胞术检测的结果是相符合的。结论

富血小板血浆对体外培养条件下人真皮成纤维细胞增殖能力的影响

目的:探讨富血小板血浆(PRP)对人真皮成纤维细胞(hDFbs)在体外培养条件下增殖能力的影响,探讨PRP促进皮肤、黏膜伤口愈合的机制。方法:PRP和hDFbs来源于健康成年人,两次离心法制备PRP,倒置相差显微镜观察0、12.5%、25.0%、50.0%和100.0%PRP浓度作用下hDFbs的增殖;免疫细胞化学检测50.0%浓度不同剂量PRP作用下细胞血小板源性生长因子(PDGF)的表达;荧光染色技术观察PRP作用下hDFbs在纯钛材料表面的生长;流式细胞术检测PRP培养后不同时间hDFbs细胞周期;CCK-8法检测不同浓度PRP培养条件下细胞增殖活力。结果:倒置相差显微镜下见PRP各浓度组细胞数量均多于对照组,细胞数量增加、折光性增强;免疫细胞化学检测,30μL PRP组PDGF表达量最高且细胞密度最大,但10μL PRP组累积吸光度值(IOD)高于20μL PRP组(836.27±21.15 vs 794.35±30.26,P<0.05);荧光染色技术观察,PRP组材料表面hDFbs细胞密集,数量较对照组高;细胞周期检测,PRP促进细胞进入S期进行DNA复制,PRP作用后第2天PRP组S期细胞百分比高于空白组(34.41%vs 22.00%,P<0.05),第8天PRP组G0/G1期细胞百分比高于空白组(95.07%vs 89.70%,P<0.05);CCK-8测定细胞增殖活性,100.0%PRP组吸光度A450值高于12.5%PRP组(34.41%vs 22.00%,P<0.05)。结论:高浓度的PRP虽然表现较强的促细胞增殖作用,但并不存在浓度、剂量依赖性,适宜浓度的PRP可促进hDFbs的增殖。

周期性机械拉伸对人肺上皮细胞增殖的影响

为了研究周期性拉伸应变对人肺上皮细胞DNA合成的影响 ,应用流式细胞术对拉伸应变下的细胞增殖动力学变化进行了分析。结果表明 :在应变为 15 % ,频率为 2 0次 /min、4 0次 /min的拉伸刺激下 ,在 2 4h ,正常人支气管上皮细胞H72 7的增殖活性指数明显降低 ,细胞的DNA合成受到显著抑制 ;4 8h后 ,人肺腺癌细胞A5 49的增殖活性明显降低 ,且拉伸时间越长 ,抑制作用越强。提示周期性拉伸应变抑制人肺上皮细胞的增殖。

lncRNA NEAT1通过抑制DNA损伤促进肺腺癌PC-9细胞的增殖

目的:研究长链非编码RNA核富集转录体1(lncRNA NEAT1)对肺腺癌PC-9细胞增殖能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法:qPCR检测人肺腺癌PC-9细胞与人胚肺二倍体2BS细胞中lncRNA NEAT1的表达水平;设计并合成lncRNA NEAT1的小干扰RNA(siRNA)序列,采用脂质体法转染PC-9细胞,通过qPCR检测转染前后PC-9细胞NEAT1的表达水平。MTT法、流式细胞术分别检测lncRNA NEAT1敲低对PC-9细胞增殖及细胞周期的影响;WB检测转染前后DNA损伤相关蛋白,即共济失调毛细血管扩张突变蛋白(ATM)和双链DNA损伤标志物γ-H2AX的表达水平。结果:与2BS细胞相比,PC-9细胞中lncRNA NEAT1呈高表达(P<0.05)。成功建立NEAT1敲低的PC-9细胞,转染siRNA 12 h后siNEAT1-1及siNEAT1-2干扰组细胞增殖能力较空白对照组及空转染组明显下降(P<0.05);干扰组细胞周期被阻滞在G1期[(88.97±2.64)%(,88.15±1.48)%vs(84.5±1.72)%,P<0.05]和G2/M期[(8.35±2.02)%,(8.11±1.36)%vs(4.28±1.28)%,P<0.05];干扰组细胞中DNA损伤相关蛋白ATM和γ-H2AX表达水平显著升高(均P<0.05)。结论:lncRNA NETA1在肺腺癌PC-9细胞呈高表达,其可通过抑制DNA损伤导致细胞周期G1/M期转变促进肺腺癌细胞PC-9的增殖能力。

九孔鲍不同器官DNA相对含量与细胞周期的分析

应用流式细胞术测定了30只九孔鲍Haliotisdiversicolorsupertexte不同器官DNA的相对含量,比较了各器官的细胞周期差异。结果表明,相同条件下生长的2龄九孔鲍足、上足触手、上足、头触角、外套膜、鳃和眼柄组织的DNA含量存在差异,其中头触角的DNA含量较外套膜组织低15 19%。从各器官细胞周期的时相比例分析看,九孔鲍各器官细胞的同步性较好,G1期时相比例都高于80%,其中鳃G1期比例最高,达到88 62%,头触角中G2/M期时相比例最高,达到11 18%,不同器官各细胞时相的比例存在差异。

总状绿绒蒿醇提物对人白血病K562细胞DNA损伤及细胞周期的影响

目的:探讨传统藏药总状绿绒蒿体外对人慢性髓系白血病细胞株K562细胞增殖活性的影响,并阐明其相关作用机制。方法:不同浓度(30、60、90、120和150mg.L-1)总状绿绒蒿醇提物作用于体外培养的白血病K562细胞,同时设置空白对照组,MTT法检测各组细胞增殖抑制率,倒置显微镜观察细胞形态学改变,单细胞凝胶电泳检测细胞DNA损伤,流式细胞术检测细胞周期时相变化。结果:作用于K562细胞24、48和72h后,不同浓度总状绿绒蒿醇提物组K562细胞生长受到明显抑制,与空白对照组比较,其增殖抑制率明显增加(P<0.05),并呈浓度和时间依赖性。倒置显微镜下观察,随着总状绿绒蒿醇提物浓度增加,K562细胞数量减少,细胞形态不规则,轮廓模糊,细胞碎片增多。单细胞凝胶电泳(SCGE)检测,与空白对照组比较,60、90和120mg.L-1总状绿绒蒿醇提物组K562细核内DNA片段化、TailDNA%升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。细胞周期检测,60、90和120mg.L-1总状绿绒蒿醇提物作用于K562细胞24h后,G0/G1期、S期细胞所占比例逐渐下降,G2/M期细胞所占比例逐渐升高,分别为(1.88±0.30)%、(5.46±0.57)%和(19.80±1.03)%,各浓度组与空白对照组[(1.10±0.12)%]比较差异均有统计学意义(P<0.05),总状绿绒蒿醇提物组K562细胞周期发生了G2/M期阻滞。结论:总状绿绒蒿醇提物对K562细胞有显著的增殖抑制作用,其机制可能与诱导DNA损伤引发G2/M期阻滞有关联。

漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2增殖、生长周期和细胞凋亡的影响

目的观察漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞生长增殖和生长周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT比色法研究漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞生长抑制作用;通过流式细胞仪检测DNA含量,分析细胞周期的分布。结果 MTT实验结果表明较高浓度的漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞具有直接的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,200μmol.L-1的漆树黄酮作用于人肝癌细胞株HepG2细胞72 h后,对细胞生长的抑制率最高可达53.78%,同对照组相比(P<0.01);流式细胞术实验结果表明,不同浓度的漆树黄酮作用于人肝癌细胞株HepG2 12 h后,可使G1期肿瘤细胞增多,引起G1期阻滞,作用时间为24 h、48 h时,则可引起S期阻滞;同时,不同浓度的漆树黄酮在不同的时间点都可使HepG2细胞出现明显的凋亡峰。结论漆树黄酮具有直接抑制肿瘤细胞生长的作用,其机制可能与引起细胞周期阻滞和诱导凋亡有关。

hREV3基因对细胞增殖周期的影响

应用反义阻断REV3基因表达的人胚肾上皮细胞（HEK-293-M-REV3-）来研究人类REV3基因对细胞增殖周期的影响，评价该基因在哺乳类细胞突变形成中的作用，探讨其与肿瘤形成的关系。文章应用流式细胞技术分别对在自发或不同理化诱发条件[（紫外线，UVB）和（甲基甲烷磺酸酯，MMS）]下，对体外培养的HEK-293-M—REV3-细胞进行细胞增殖周期和DNA含量的影响进行检测，并计算细胞的增殖指数。结果显示：自发状态下，HEK-293-M—REV3-细胞与对照组细胞相比S期延长；而UVB和MMS不同理化因素诱导时，HEK-293-M—REV3-细胞的G2-M期或S期比例明显比对照组增加，PI值也相应增加。因此可以推测，当REV3基因低表达时，细胞无论在自发还是诱发情况下突变频率均降低，原因可能与细胞周期的改变有关，进而再引起DNA复制叉阻滞、合成减少，导致细胞死亡或凋亡。

沉默Dnmt1基因对结肠癌细胞株HT-29细胞增殖及细胞周期的影响

目的利用RNA干扰技术研究沉默DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,Dnmt1)对结肠癌细胞株HT-29细胞增殖及细胞周期的影响,并探讨其可能的作用机制。方法利用LipofectamineTM2000将Dnmt1 siRNA转染HT-29细胞,实验中将细胞分为3组:未处理组、对照siRNA组和Dnmt1siRNA组。利用CCK-8试剂盒和流式细胞术分别研究其对HT-29细胞增殖和细胞周期的影响,进一步通过Real-time PCR和Western blotting技术研究与增殖和周期相关基因表达的变化。结果与未处理组和对照siRNA组相比,Dnmt1siRNA组中HT-29细胞的增殖受到明显的抑制(P<0.05)。Dnmt1siRNA组中HT-29细胞在G0/G1期的比率高达66.93%,高于未处理组和对照siRNA组中HT-29细胞在G0/G1期的比率(分别为53.45%和54.71%)(P<0.05)。此外,与未处理组和对照siRNA组相比,Dnmt1siRNA组中HT-29细胞的cdk2,cyclin D1和cyclin E基因的mRNA和蛋白的表达明显下调(P<0.05)。结论干扰Dnmt1能明显诱导HT-29细胞周期静止,其可能的机制与cdk2,cyclins D1和cyclin E基因的表达下调密切相关,操纵该基因有可能成为新的结肠癌的分子治疗靶点。

敬钊缨毛蛛蛛毒对人肝癌细胞BEL-7402细胞增殖、细胞周期和C-myc蛋白的影响

通过MTT方法可知敬钊缨毛蛛蛛毒对BEL 7402细胞增殖有较强的抑制作用(p<0.05),时效和量效关系良好.IC50为18mg/L.敬钊缨毛蛛蛛毒可以抑制BEL 7402细胞DNA的合成.流式细胞仪检测发现经过蛛毒作用的BEL 7402细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在G0/G1期.WesternBlot方法进一步检测到蛛毒作用BEL 7402细胞72h后,C myc蛋白表达减弱.实验结果表明,敬钊缨毛蛛蛛毒可以抑制人肝癌细胞BEL 7402的增殖和DNA的合成,其药理作用机理可能除了诱导凋亡外主要是使BEL 7402细胞周期相关蛋白C myc表达减弱,导致细胞周期的变化.