利用真空侵染法在紫花苜蓿中瞬时表达GUS基因

由于传统的苜蓿遗传转化体系存在周期长的局限性,本研究在紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中建立并优化了一种快速、简单、高效的表达系统,即发芽种子真空侵染法。我们以发芽种子作为真空侵染材料,快速表达了β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase, GUS),并优化了这种表达系统的侵染条件。结果表明当真空侵染压强为0.08 Mpa,农杆菌重悬液浓度OD600为1.0时,被侵染的植物中GUS基因的表达效率较高。GUS化学组织染色检测和半定量RT-PCR检测结果表明,侵染后第14天GUS基因在苜蓿植物中被成功表达。本研究为植物生物反应器和紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中基因功能分析提供了研究基础。

农杆菌介导大豆遗传转化新技术的建立及优化

农杆菌介导的植物稳定遗传转化在提高作物产量、质量及其抗逆性的分子育种中起到至关重要的作用。转基因大豆育种的遗传转化主要通过组织培养的方法获得。由于组织培养法具有实验周期长、容易污染和转化效率低的局限性,本研究在大豆(Glycine max(Linn.)Merr.)中建立并优化了一种新的快速、高效的稳定遗传转化体系,即农杆菌介导的发芽种子真空侵染法。本研究利用这种新体系完成了β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase,GUS)在大豆(Glycine max(Linn.)Merr.)品种‘沈农9号’中的表达;同时,还完成了农杆菌菌液浓度和真空侵染条件的优化。当真空侵染压强为0.08 MPa,农杆菌重悬液浓度OD_(600)为2.0时,稳定遗传转化效率达到10%。GUS化学组织染色检测结果表明,转基因T_(1)代中获得16个GUS转基因大豆植株。半定量RT-PCR结果表明,在T_(2)代转基因植株中GUS基因获得了稳定表达。本研究建立的体系具有快速、操作简单和遗传转化效率较高的优势,为大豆稳定遗传转化研究提供了新的技术方法。

烟草中稳定遗传转化的新技术

农杆菌介导的植物稳定遗传转化技术已经在植物基因工程领域得到广泛应用.本文介绍了一种由农杆菌介导的新型植物遗传转化技术—发芽种子真空侵染法.应用此方法将表达载体p BI121-HC-Pro转化到烟草植株中,并优化了农杆菌的浓度及真空侵染的条件.半定量RT-PCR(Reverse transcription-PCR)方法检测结果表明这种转化方法可以使HC-Pro在烟草中表达,具有广泛的应用前景.