丝状真菌细胞色素氧化酶CYP-cl3的原核表达

真菌细胞色素P450是一种可催化甾体化合物选择性氧化的膜蛋白.为实现丝状真菌亚麻刺盘孢ST-1(Colletotrichum lini)来源的细胞色素氧化酶CYP-cl3在大肠杆菌中的可溶性表达,通过ProtScale和TMHMM软件预测CYP-cl3的N端膜锚定区,并对其进行不同长度的沉默,分别评估其对CYP-cl3原核表达的影响.筛选获得适宜沉默长度的CYP-cl3重组菌,进一步通过融合增溶标签提高CYP-cl3的溶解性.分别在大肠杆菌BL21(DE3)和C43(DE3)中进行表达.结果表明,CYP-cl3的N端含有一段40个氨基酸残基组成的膜锚定区,可将细胞色素P450锚定于生物膜.当N端被沉默40个氨基酸残基后,CYP-cl3在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达量较未沉默形式显著提高.通过融合MBP标签提高了重组蛋白的溶解性,实现了CYP-cl3在大肠杆菌中的完全可溶性表达.此外,经CYP17A1 N端替换的重组CYP-cl3也在大肠杆菌C43(DE3)实现了可溶性表达.本研究采用N端沉默和N端替换策略实现了CYP-cl3在大肠杆菌系统中的表达,可作为真菌细胞色素P450原核表达的改进策略.(图6表1参23)