2014～2018年北京协和医院酵母菌血流感染菌种分布和抗真菌药物敏感性分析

目的分析酵母菌血流感染菌种分布和抗真菌药物的敏感性,为临床诊治提供依据。方法回顾性分析北京协和医院2014年1月~2018年12月血培养鉴定结果为酵母菌的临床资料,对菌种分布、抗真菌药的敏感性、阳性报警时间、科室分布等进行分析。结果血培养中共分离非重复酵母菌206株。真菌瓶、需氧瓶和厌氧瓶酵母菌的阳性检出率分别为1.32%(79/6003),0.43%(371/85855)和0.06%(47/77168)。排在前3位的念珠菌分别为白念珠菌72株(34.95%),热带念珠菌42株(20.39%)和光滑念珠菌39株(18.93%);少见菌包括季也蒙念珠菌、毕赤酵母菌、葡萄牙念珠菌、酿酒酵母、郎比可念珠菌、尼瓦利亚念珠菌、红酵母和希木龙念珠菌。我院酵母菌血流感染好发于>60岁的老年患者(42.23%),男性115例(55.83%)。酵母菌血流感染前3位科室为急诊科41株(19.90%),内科ICU和外科ICU均为36株(17.48%)。阳性报警时间从长到短依次为:光滑念珠菌(55.36±26.87)h,近平滑念珠菌(52.58±45.94)h,白念珠菌(49.17±35.37)h和热带念珠菌(23.38±19.32)h。白念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌和热带念珠菌对氟康唑敏感率分别为98.61%、97.44%、89.66%和71.43%。结论本院酵母菌血流感染以白念珠菌为主,绝大多数念珠菌对抗真菌药具有较高敏感性,热带念珠菌的耐药率相对较高。

Sensititre YeastOne显色药敏板与微量肉汤稀释法检测曲霉体外抗真菌药物敏感性的一致性研究

目的评估显色药敏板Sensititre YeastOne与微量肉汤稀释法检测曲霉体外抗真菌药物敏感性的一致性。方法使用同样的孢子悬液按照CLSI M38-A2微量肉汤稀释法和Sensititre YeastOne YO10对307株曲霉进行体外抗真菌药物敏感性试验,计算两种药敏方法结果间的基本一致性、分类一致性以及错误率。结果CLSI M38-A2药敏试验显示98.4%(302/307)曲霉菌株对测试的6种抗真菌药物持野生型状态,Sensititre YeastOne则检出97.1%(298/307)菌株为野生型。除伊曲康唑外,其余5种抗真菌药物在Sensititre YeastOne与CLSI M38-A2间的基本一致性均>90%。两种方法在曲霉药物敏感性检测的分类一致性为98.1%(301/307),极显著错误率为0.3%(1/307),显著错误率为1.6%(5/307)。结论Sensititre YeastOne在检测曲霉体外药物敏感性方面与CLSI方法一致性良好,可用于临床实验室曲霉体外药敏检测。

曲霉菌临床分离株的分子鉴定及体外抗真菌药物敏感性分析

目的研究曲霉菌临床分离株的分子鉴定及体外抗真菌药物的敏感性。方法采用Internal Transcribed Spacer(ITS)及β-tubulin基因部分测序对临床分离的53株经形态学鉴定为曲霉的菌株进行分子鉴定,并按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的M38-A2微量液基稀释法测定唑类(伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑),两性霉素B和棘白菌素类(米卡芬净、阿尼芬净和卡泊芬净)共7种抗真菌药物对所有菌株的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)或最低有效浓度(minimum effective concentration,MEC)。结果 53株曲霉菌包含烟曲霉复合体22株(烟曲霉21株和仑图卢斯曲霉1株),黑曲霉复合体23株(塔宾曲霉16株、黑曲霉5株和百岁兰曲霉2株)及土曲霉和黄曲霉各4株;米卡芬净、阿尼芬净、卡泊芬净、泊沙康唑、伏立康唑、伊曲康唑、两性霉素B对曲霉菌株的MIC_(90)为0.031、0.031、0.25、0.5、0.5、1、2μg/mL。除1株烟曲霉对伊曲康唑(MIC≥16μg/mL)和伏立康唑(MIC为2μg/m L)耐药及1株仑图卢斯曲霉对两性霉素B耐药(MIC为8μg/m L)外,其余菌株对7种药物均敏感。4种曲霉复合体对7种抗真菌药物的敏感性差异有统计学意义(P<0.05)。结论棘白菌素类药物体外抗曲霉菌活性最好,两性霉素B体外抗曲霉菌活性相对较差,唑类药物介于以上两者之间。不同种曲霉菌对不同抗真菌药物的敏感性存在差别。

新生隐球菌生物膜体外抗真菌药物敏感性研究

目的了解新生隐球菌生物膜对氟康唑、两性霉素B、伊曲康唑和卡泊芬净的体外敏感性。方法采用标准微量稀释法测定上述4种抗真菌药物对20株新生隐球菌悬浮状态与生物膜状态的最低抑菌浓度(MIC),MIC结果判定采用四甲基偶氮唑盐[XTT,2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilide inner salt]-降解法。结果悬浮新生隐球菌20株均对两性霉素B敏感(<1μg/mL),3株对氟康唑耐药(>64μg/mL);1株对伊曲康唑耐药;20株均对卡泊芬净耐药。而生物膜新生隐球菌显示:在20株中,除4株对两性霉素B敏感外,其余各株均对两性霉素B耐药。20株菌均对氟康唑和伊曲康唑耐药,远远高于耐药浓度。对卡泊芬净,均高于其耐药浓度。结论标准微量稀释法结合四甲基偶氮唑盐(XTT)-降解法测定新生隐球菌生物膜对抗真菌药物的敏感性其结果具有可重复性和一致性的特点;新生隐球菌生物膜的明显降低抗真菌药物的敏感性。

一种全自动药敏系统检测念珠菌抗真菌药物敏感性的应用评价

目的评价一种全自动真菌药敏分析系统检测念珠菌属对常用抗真菌药物体外敏感性的临床应用价值。方法利用微量肉汤稀释法CLSI M27-A4和全自动真菌药敏系统检测100株念珠菌对9种抗真菌药物的敏感性,对两种方法的一致性进行分析。结果两种方法的一致性与所检测的念珠菌属及抗真菌药物种类有关,检测白念珠菌时,卡泊芬净的基本一致性为75%,检测光滑念珠菌时,卡泊芬净和伏立康唑的分类一致性分别为61.1%和66.7%,其他基本一致性和分类一致性为83%~100%;两种方法测定100株念珠菌对9种抗真菌药物总的基本一致性在89%以上,总的分类一致性在91%以上。结论全自动真菌药敏分析系统检测念珠菌属体外药物的敏感性与CLSI方法一致性较好,具有快速和自动的优势,在临床微生物实验室具有很好的应用价值。

烟曲霉在支气管上皮细胞上形成生物被膜导致抗真菌药物敏感性下降

烟曲霉可能引起免疫缺陷宿主（如粒细胞减少的恶性肿瘤患者）侵袭性肺曲霉病，也是支气管哮喘和囊性肺纤维化患者的呼吸道常见定植菌。根据已有研究，某些细菌和酵母形成被膜，致使感染慢性化，并可能导致抗生素耐药。考虑到免疫缺陷宿主感染烟曲霉后的病死率较高，且体外药敏试验与临床疗效之间存在差异，我们推测烟曲霉能够在体内形成被膜。

AST-YS08药敏卡片检测酵母菌体外抗真菌药物敏感性的评价

目的评估使用AST-YS08真菌药敏卡片进行酵母菌体外抗真菌药物敏感性试验的准确性。方法选取该院2019年3月29日至2022年5月8日临床分离的念珠菌和新型隐球菌,共100株,分别使用该卡片及微量肉汤稀释法(BMD法)检测菌株对5-氟胞嘧啶、伏立康唑、米卡芬净、两性霉素B、氟康唑、卡泊芬净的最小抑菌浓度(MIC),比较该卡片与BMD法的检测时长、基本一致率(EA)和分类一致率(CA)。结果对于念珠菌,AST-YS08卡片检测时长为(13.63±2.55)h,与BMD法检测的总EA为87.2%,6种药物中EA最低的为卡泊芬净(55.8%);AST-YS08卡片与BMD法检测白色念珠菌及近平滑念珠菌复合群的各类药物CA均>90.0%,CA较低的念珠菌及对应药物为光滑念珠菌伏立康唑(78.9%)及卡泊芬净(5.3%)、克柔念珠菌卡泊芬净(0.0%)、热带念珠菌氟康唑(81.3%)及伏立康唑(56.3%)。对于培养48 h的新型隐球菌,AST-YS08卡片检测时长为(20.67±5.13)h,与BMD法检测的总EA为100.0%,各类药物两种方法的CA均>90.0%;AST-YS08卡片检测培养24 h菌株时检测时长为(20.31±5.84)h,AST-YS08卡片检测与BMD法检测的总EA为96.3%,除两性霉素B(78.6%)外,其余药物两种方法的CA均>90.0%。结论检测念珠菌和新型隐球菌药物敏感性时,AST-YS08药敏卡片与BMD法一致率较高,是一种准确、快速的商品化酵母菌药敏试剂,但念珠菌对卡泊芬净非敏感的结果需谨慎报告,似平滑念珠菌对伏立康唑的药物敏感性需使用其他方法检测。

光滑念珠菌及其相似种的鉴定、流行病学和抗真菌药物敏感性研究

念珠菌病是由念珠菌属的某些种所致的原发或继发感染，可侵犯皮肤、黏膜和脏器，是最重要的机会性感染之一。近年来，由于广谱抗菌药物、糖皮质激素与免疫抑制剂的广泛应用，器官移植、导管技术、静脉高营养等治疗手段的开展以及肿瘤、白血病、严重烧伤、艾滋病等病种的增多，使得念珠菌所致院内感染呈上升趋势。据报道，念珠菌血症为住院患者最常见的侵袭性真菌病，病死率显著高于其他致病菌所致血流感染。据报道，白念珠菌仍为念珠菌血症中的主要致病菌，其次为光滑念珠菌、近平滑念珠菌和热带念珠菌。

白色念珠菌TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应快速检测及抗真菌药物敏感性分析

目的:建立TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应方法,快速定量检定临床标本中的白色念珠菌并进行抗真菌药物敏感性分析。方法:针对白色念珠菌内转录间隔区和26S核糖体核糖核酸基因设计特异性引物和探针,构建含有上述基因的标准质粒进行定量分析,建立TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法,评价其特异性、灵敏度、重复性和稳定性。对1 185份临床标本中的白色念珠菌进行检测,同时进行真菌培养、普通PCR、基因克隆和测序鉴定。对所有真菌分离株进行抗真菌药物敏感性试验。结果:研究结果显示,建立的白色念珠菌TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法专属性强,能准确检出白色念珠菌,而与其他念珠菌属真菌、非念珠菌属真菌、细菌、寄生虫和病毒均无交叉反应,特异性为100%。该技术灵敏度高,能精确定量检测白色念珠菌DNA线性范围达11个数量级,白色念珠菌最低检测限度为5个菌落形成单位。该方法重复性非常好,组内和组间相对标准偏差均小于2%。测试中相关系数、斜率和效率没有显著变化,表明该方法稳定性好,精密度高。将其成功应用于临床标本中白色念珠菌载量的定量检测,用普通PCR和基因克隆测序分析进行了确证。整个检测过程可在2 h内完成,可以用作定量分析快速诊断方法。应用TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应从1 185份临床标本中检出94份白色念珠菌阳性标本,真菌培养获得8株存活的白色念珠菌,抗真菌药物敏感性试验分析结果显示:这些白色念珠菌分离株对制霉菌素、咪康唑、克霉唑、益康唑、氟康唑、沃尔康唑均敏感,但对两性霉素B、酮康唑、特比萘芬、氟胞嘧啶已经产生了耐药性。结论:本研究新开发评价的TaqMan-小沟结合物探针实时荧光定量聚合酶链式反应,可以快速简易,精准稳定,特异灵敏地定量检定白色念珠菌,适用于动物源性产品中白色念珠菌检测、食品药品生物制品医疗器械安全检查、环境监测、流行病学调查。

烟曲霉临床菌株对体外抗真菌药物的敏感性研究

目的揭示国内烟曲霉临床分离株对目前常用及新型抗真菌药物敏感性及不同地区烟曲霉对抗真菌药物的敏感性特点。方法实验室保存的分离自2011—2015年中国不同地区的159株临床烟曲霉菌株为试验菌株。采用美国标准化实验室与研究所(CLSI)推荐的M38-A2微量液基稀释法为药敏方法,按规定的标准进行。结果 12种抗真菌药物伊曲康唑(ITC)、伏立康唑(VRC)、泊沙康唑(POS)、里氟康唑(RAV)、艾沙康唑(ISA)、氟康唑(FLC)、米卡芬净(MCF)、阿尼芬净(ANI)、卡泊芬净(CBF)、两性霉素B(AMB)、特比萘芬(TBF)和5-氟胞嘧啶(5-FC)对159株烟曲霉菌的MIC_(90)分别为1、0.5、0.25、0.5、1、64、0.063、0.063、0.5、2、4、64 mg/L。烟曲霉唑类耐药率分别为:ITC为4.4%,ISA和RAV均为3.77%,POS为3.14%,VRC为1.9%。除VRC、FLC和5-FC外,烟曲霉临床分离株对其他9种抗真菌药物的敏感性在不同地区间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论三唑类(除FLC外)和棘白菌素类体外抗烟曲霉菌活性较高,优于AMB和TBF;烟曲霉在体外对FLC、5-FC表现为高度耐药。目前我国烟曲霉临床株唑类耐药率相对较低。烟曲霉株体外抗真菌药物的敏感性存在地区差异。

含有额外拷贝黄曲霉cyp51同源基因的烟曲霉对抗真菌药物的敏感性测定

目的通过构建黄曲霉cyp51同源基因额外拷贝株,研究这些基因对抗真菌药物敏感性的影响。方法通过序列同源性比对,在黄曲霉基因组中找出其cyp51基因的开放读码框(ORF)及其上下游约1 000 bp的基因序列,PCR扩增后利用DNA重组技术将该片段克隆到穿梭质粒pRG3-AMA1-NotI;用重组后的质粒和空质粒转化烟曲霉嘧啶营养缺陷株(pyrG-)AF293.1,并利用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)M38-A2中的微量液基稀释法和E-test法测定转化株对两性霉素B(AMB)、伊曲康唑(ITC)、伏立康唑(VRC)、泊沙康唑(POS)和卡泊芬净(CAS)敏感性。结果黄曲霉cyp51同源基因有3个:cyp51A、cyp51B和cyp51C,ORF大小约为1 400～2 000 bp;将其克隆到穿梭质粒pRG3-AMA1-NotI产生重组质粒pRG3-AMA1-CYP51A、pRG3-AMA1-CYP51B和pRG3-AMA1-CYP51C;连同空质粒转化AF293.1后得到阳性转化子rC-YP51A、rCYP51B、rCYP51C和rpRG;微量液基稀释法和E-test法显示,rCYP51A和rCYP51B对VRC和ITC交叉耐药,对AMB和CAS敏感;rCYP51C和rpRG对VRC和ITC中度敏感,而对AMB和CAS敏感。结论额外拷贝黄曲霉cyp51A或cyp51B基因影响烟曲霉对唑类药物的敏感性,对AMB和CAS的敏感性没有影响;额外拷贝黄曲霉cyp51C对测试药物的敏感性没有明显影响。

隐球菌临床分离株分子流行病学及抗真菌药物敏感性的研究进展

隐球菌(Cryptococcus)是一种条件致病性真菌,可造成人类严重感染,具有较大的疾病负担。早期给予合理的抗真菌治疗可直接影响患者的治疗结果。抗真菌药物敏感性试验是检测抗菌药耐药性的重要工具,可为抗菌药的选择提供参考、指导治疗。不同基因型隐球菌的地理分布及抗真菌药物敏感性存在一定差异,了解其流行病学对于监测感染现状、改进隐球菌病的诊断及治疗措施、推动隐球菌病研究的发展具有重要意义。现就隐球菌临床分离株的分子流行病学、抗真菌药物敏感性研究作一概述。

343株致病性念珠菌的基因鉴定及药物敏感性检测

目的了解本地区常见致病性念珠菌的基因类型及其药物敏感性。方法采用PCR及ATB FUNGUS3酵母菌样药敏试剂,检测临床分离的343株念珠菌的内部转录问题(ITS)和25 rDNAⅠ型内含子序列及其对常用抗真菌药物敏感性。结果 343株致病性念珠菌的ITS序列鉴定以白假丝酵母菌检出率最高(61.2%),其他依次分别为光滑假丝酵母菌(13.1%)和热带假丝酵母菌(8.4%);210株白假丝酵母菌25S rDNAⅠ型内含子基因鉴定为A型115株(54.8%)、B型58株(27.6%)和C型37株(17.6%),光滑假丝酵母菌与热带假丝酵母菌25S rDNA序列不存在Ⅰ型内含子;白假丝酵母菌的5-氟胞嘧啶(5-FC)和两性霉素B(AMB)敏感率大于90%,唑类药物敏感率在17.1%～23.9%且存在交叉耐药。结论本地区临床分离的致病性念珠菌以白假丝酵母菌及其基因A型最常见,检测ITS序列和25S rDNAⅠ型内含子序列有助于致病性念珠菌的快速鉴定;白假丝酵母菌对唑类药物的高耐药性以及交叉耐药性是造成真菌感染患者临床治疗困难的一个重要因素。

侵袭性热带念珠菌感染流行病学及药物敏感性

全球范围内,随着抗肿瘤药物、免疫抑制剂和广谱抗菌药物的使用,真菌感染的发病率显著提高,其中念珠菌感染占到绝大多数。目前热带念珠菌已经成为非白念珠菌中最常见的病原菌。我国热带念珠菌的临床分离率及对氟康唑及伏立康唑的耐药率都明显高于世界平均水平。但是,相比于白念珠菌,关于热带念珠菌的研究及相关临床信息相对较少。该文就侵袭性热带念珠菌感染危险因素、流行病学以及药物敏感性进行全面的综述。

氟康唑对白念珠菌菌丝相与酵母相体外药物敏感性差异比较

目的:以同一亲本来源的7株白念珠菌为对象,研究氟康唑对其菌丝相与酵母相抗菌活性的差异。方法:参照NCCLS M27-A方案,测定氟康唑对7株白念珠菌菌丝相与酵母相的MIC值,并比较其差异。结果:白念珠菌菌丝相与酵母相对氟康唑的敏感性不同,对菌丝相的MIC值低于酵母相。结论:氟康唑对白念珠菌菌丝相的抗菌活性强于酵母相。

体内外诱导对阿萨希毛孢子菌形态及药物敏感性的影响研究

目的观察小鼠体内传代与氟康唑体外诱导对阿萨希毛孢子菌(T.asahii)形态及药物敏感性的影响。方法将4株T.asahii在小鼠体内5次传代后,观察传代前后菌株形态和氟康唑最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);选择临床株CBS 2479和环境株CBS 8904,在含不同浓度氟康唑的固体培养基中体外诱导,观察诱导前后菌株形态和MIC值的变化。结果体内传代后所有菌株的MIC值和菌落形态较传代前均有较明显变化,其中临床株的MIC值较传代前增长8倍,而环境株的光镜下形态变化较明显,从以孢子状态为主变为孢子和菌丝的混合状态。体外诱导后,临床株和环境株的MIC值均>256μg/ml,以临床株的MIC值变化幅度最大,其光镜下细胞形态也从诱导前的菌丝状态为主转化为孢子状态为主。结论 T.asahii体内传代及体外诱导前后形态及药物敏感性均发生变化。体内传代后环境株形态有向临床株转变的趋势,而体外诱导后临床株逐渐向环境株转变。临床株标准株两种情况下氟康唑MIC值增高均以临床株更为显著,体外诱导较体内传代氟康唑MIC值增长更高、更快。

鸽源白色念珠菌的分离鉴定及药物敏感性分析

重庆某鸽场1~3周龄幼鸽喉头出现大块干酪样物,堵塞喉头,导致无法进食并陆续死亡。本研究旨在鉴定导致该鸽场大批幼鸽发病的病原。在病鸽喉头、嗉囊、腺胃、肠道等部位采集病料,接种含1%庆大霉素PDA平板分离病原,采用革兰染色、棉蓝染色、芽管生成试验和PCR扩增鉴定病原。分离的病原菌进行动物回归试验和药物敏感性试验。最终在5只病鸽分离到8株革兰染色呈卵圆形、黑色或粉紫色的革兰阳性酵母样菌体,棉蓝染色结果显示菌体长出菌丝和孢子。这些真菌在含1%庆大霉素PDA平板上生长为乳白色、边缘整齐的光滑菌落,在胎牛血清中孵育能生成芽管,能扩增出白色念珠菌特异rDNA基因间转录间隔区序列。动物回归试验结果显示分离菌株能导致雏鸡嗉囊肿胀,嗉囊鳞状上皮细胞变性、坏死、脱落。药物敏感性试验显示分离菌对两性霉素B、制霉菌素和克霉唑敏感。本研究确定了导致鸽场发病的病原为白色念珠菌,且分离菌在体外对部分抗真菌药物敏感。

188例临床样本分离假丝酵母菌对7种抗真菌药物敏感实验结果分析

近年来酵母样真菌感染己成为医院内感染的重要部分，随着广谱抗菌素，糖皮质激素和免疫抑制剂的广泛应用；肿瘤结核等大量慢性消耗性疾病的出现；器官移植，各种导管介入治疗和手术增加；导致条件致病性真菌（念珠菌）感染日益增多。抗真菌药物相继问世和耐药菌株的出现，抗真菌药物敏感实验逐渐为人重视。我们分析了我院2008下半年住院患者188例真菌感染的鉴定及药敏实验的结果目的为临床合理使用抗菌药，有效预防真菌感染提供依据。

临床分离念珠菌对5种常见抗真菌药物的体外敏感试验结果分析

目的:了解临床分离的念珠菌对氟康唑、两性霉素B、氟胞嘧啶、伊曲康唑及酮康唑体外敏感性。方法:采用Sensitire Yeast Oen试验板以微量稀释法测定以上5种抗真菌药物对临床分离的108株念珠菌最低抑菌浓度(MIC)。结果:108株念珠菌中达到氟康唑、伊曲康唑、氟胞嘧啶耐药标准的分别有8株(7.4%)、15株(13.9%)、2株(1.9%),念珠菌MIC值分布种间差异较大。结论:不同念珠菌对常用抗真菌药物敏感性存在差异,准确分离鉴定和药敏试验,对于指导临床合理用药有重要意义。