疏水蛋白HFBI及胶原共修饰的PLGA对神经干细胞贴附和生长的影响

目的:探讨神经干细胞(NSCs)在经疏水蛋白HFBI和Ⅰ型胶原联合修饰的聚乳酸-乙醇酸(PLGA)膜上贴附和生长的可行性。方法:将神经干细胞分离、纯化及扩增后,在无血清和有血清的条件下,分别接种到PLGA膜和经疏水蛋白HFBI和Ⅰ型胶原联合修饰的PLGA膜上,观察神经干细胞的贴附、生长情况。结果:经过培养,无血清组中,在PLGA膜上没有观察到神经干细胞;在疏水蛋白HFBI与胶原联合修饰的PLGA膜上,观察到有少量的神经干细胞呈圆形状贴附,生长。血清组中,在PLGA膜以及疏水蛋白HFBI和胶原联合修饰的PLGA膜上,均观察到存在大量细胞生长,并且在疏水蛋白HFBI和胶原联合修饰的PLGA膜上,观察到更多含有突起的细胞。结论:疏水蛋白HFBI和Ⅰ型胶原联合修饰PLGA膜有利于促进神经干细胞贴壁,在血清的条件下明显促进神经干细胞生长和分化。

抗肿瘤真菌蛋白的研究进展

药用真菌具有明显的抗癌作用。以往认为多糖是真菌抗肿瘤活性的主要成分,但真菌中分离出的真菌免疫调节蛋白、凝集素、核糖核酸酶等蛋白质,具有提高机体免疫、抑制细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡等抗肿瘤活性。真菌蛋白质是另一种重要的生物活性物质,对其抗肿瘤活性和机制的研究有广大的开发空间和挖掘潜力。

建立FQ-PCR定量体系检测新型隐球菌CAP10 mRNA

目的建立荧光定量PCR(FQ-PCR)技术定量检测新型隐球菌(CN)的荚膜相关蛋白10(CAP10)基因mRNA,为新型隐球菌的诊断、预后及疗效判断提供依据。方法用逆转录PCR的方法从CN标准株(ATCC34874)中扩增得到CAP10,构建重组质粒标准品pGEMT-Easy-CAP10,以倍比稀释的标准品制备标准曲线。设计引物和探针,建立FQ-PCR反应体系并对其重复性、特异性和线性范围进行评价。结果成功构建了重组质粒标准品pGEMT-Easy-CAP10,并用倍比稀释的标准品制备了标准曲线Y=-3.11X+38.84。批内重复性试验CV值为0.31%,批间重复性试验CV值为2.73%。FQ-PCR体系能特异扩增新型隐球菌,特异性好,该体系的线性范围为101copies/μL～108copies/μL。结论成功建立CN的CAP10 mRNA的定量检测方法;该方法重复性好,特异性强。

荚膜相关蛋白10与DEAD-box的RNA解旋酶基因联合检测诊断新生隐球菌性脑膜炎

目的建立定量检测新生隐球菌荚膜相关蛋白10（cAPl0）和DEAD-box的RNA解旋酶（VADl）基因的方法，比较两者单独及联合应用诊断新生隐球菌感染的价值。方法选择行脑脊液真菌培养、墨汁染色或隐球菌抗原检测，其中一项阳性的新生隐球菌性脑膜炎患者23例，以同期颅脑外伤患者为对照。以新生隐球菌标准株构建质粒标准品，建立实时荧光定量PCR（RT-FQ-PCR）体系，检测脑脊液中的CAPl0和VADl。并与墨汁染色、真菌培养、隐球菌抗原检测比较。卡方检验评价两者单独或联合应用的诊断价值。结果在23例隐球菌性脑膜炎患者中，RTFQ-PCR法检测CAPl0mRNA阳性22例，阳性率为95。6％，墨汁染色法阳性16例，阳性率为69．6％（X^=4．167，P〈0．05），真菌培养阳性15例，阳性率为65．2％（X^=5．143，P〈0．05），抗原检测法阳性21例，阳性率为91。3％（X^=20．500，P〉0。05）。联合检测CAPl0及VADl基因诊断新生隐球菌性脑膜炎与单独检测cAPl0或VADl比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论成功建立以新生隐球菌毒力基因为靶标的RT-FQ-PCR检测方法，检测结果优于传统方法。

耐氟康唑白念珠菌临床株ERG11基因突变检测

目的筛查耐氟康唑白念珠菌ERG11基因突变，探讨其与耐药的关系。方法用柯玛嘉显色培养基和25S rDNA转座内含子保守区分型方法，收集鉴定白念珠菌临床株。联用微量稀释法和Roseo药敏纸片扩散法体外测定试验菌株对氟康唑的敏感性。以ERG11序列明确的白念珠菌标准耐药株ATCC 76615-19和达令顿株为质控，以标准敏感株C1b和临床敏感株02928为对照，分3段扩增临床耐药株ERG11基因并测序。结果获得15株A型白念珠菌临床耐药株。ERG11基因测序共发现16处同义突变和11处错义突变。质控株突变与既往报道一致。敏感株共出现9处同义突变和3处错义突变G640A（E165K）、A945C（E266D）、G1609A／G（V488I）。耐药临床株中的14株均出现2处共有的错义突变G487T（A114S）和T916C（Y257H），不伴其他突变；另1株出现8处同义突变和4处错义突变，T541C（Y132H）、T495A（D116E）、A530C（K128T）、T1493A（F449Y），其中T1493A（F449Y）未见报道。结论不同来源的白念珠菌临床耐药株集中发生G487T（A114S）和T916C（Y257H）突变，暗示这2处突变极可能参与菌株耐药。耐药株可以发生T1493A（F449Y）突变。