应用通用引物建立巢式逆转录聚合酶链反应检测肠道病毒(英文)

目的设计通用引物建立巢式逆转录聚合酶链反应(RT-n-PCR),以达到广泛。特异及快速诊断肠道病毒(Enterovirus,EV)感染。方法在EV基因组5'端非编码区(5'-UTR)设计二对通用第物,建立RT-n-PCR检测方法,对3种EV和3种非EV标准株以及165例可疑EV感染的327份临床标本进行检测。结果EV标准株均在电泳中检测到一清晰312bp扩增条带,而非EV标准株则无扩增条带;共有104份标本检测到相应大小扩增条带,阳性率31.8%;147例病例同时检测了粪便和咽拭子,粪便阳性49例,咽拭子阳性44例,其中粪便和咽拭子同时阳性35例,粪便和咽拭子EV阳性比较无显著性差异(P>0.05)。病例总阳性数64例,阳性率38.8%。结论RT-n-PCR可以准确地检测出肠道病毒,特异性强,用时少,同时检测多份标本可以提高EV阳性率。

聚合酶链反应诊断细菌和真菌性中枢神经系统感染的临床价值

目的探讨聚合酶链反应(PCR)在细菌和真菌性中枢神经系统感染快速诊断中的临床价值。方法收集137例中枢神经系统感染患者留存的脑脊液进行DNA提取,采用细菌和真菌通用引物扩增病原体DNA并进行序列测定,对比同期脑脊液培养方法与PCR方法的检测结果。结果 137份脑脊液标本中PCR检测到细菌50株,真菌6株,脑脊液培养检测到细菌38株,真菌5株;PCR检测法灵敏度为40.9%,特异度为100%,阳性预测值为100%,阴性预测值为38.2%,诊断效率为56.7%;传统培养法则分别为31.4%、100%、100%、34.7%、44.4%。PCR的灵敏度、阴性预测值和诊断效率均明显优于传统培养方法,特异度和阳性预测值与培养法相当,两方法鉴定菌种的符合率为97.7%。结论通用引物PCR扩增法具有快速、特异、灵敏、准确等特点,对细菌和真菌性中枢神经系统感染的病原学快速诊断具有重要的应用价值。

多重聚合酶链反应快速诊断HSK和真菌性角膜炎的研究

目的:探讨多重聚合酶链反应(multiplexPCR,MPCR)技术快速诊断单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK)和真菌性角膜炎的价值。方法:建立单纯疱疹病毒(HSV)和致病性真菌菌株的MPCR检测方法,检测49例患者54眼角膜刮片或泪液标本,对怀疑为真菌和混合感染的与涂片镜检和真菌培养比较。结果:MPCR5h可检测出标本中微量HSV和真菌,54份标本MPCR检测阳性43份(80%),其中怀疑有真菌感染的25份标本中17份真菌检测阳性(68%),阳性率明显高于真菌培养(χ2=11.57,P<0.005)和涂片镜检(χ2=13.33,P<0.005)。结论:MPCR速度快、敏感性和特异性高,有助于HSK和真菌性角膜炎的快速明确诊断。

用内转录间隔区通用引物的聚合酶链反应快速测定念珠菌菌种

目的:应用内转录间隔区(ITS)通用引物建立一种较为快速、简便的检测和鉴定念珠菌的聚合酶链反应(PCR)方法。方法:采用两对ITS通用引物ITS1、ITS4和ITS86、ITS4对7种(8株)念珠菌菌悬液进行PCR扩增。结果:两对引物3.5h内对7种念珠菌的菌悬液扩增出种特异的DNA条带,而第2对引物其种特异性更强。结论:采用ITS通用引物结合快速PCR检测法,可快速、简便、特异、敏感地检测出念珠菌,并能同时鉴定到种,这将在今后念珠菌病的早期诊断和治疗上有潜在的应用价值。

聚合酶链反应快速检测丝状真菌

目的 建立并评价一种新的丝状真菌的快速PCR检测方法。方法 将 13种培养的不同丝状真菌菌种经匀浆器研磨处理后直接放入一个新建立的PCR体系 ,用 2对真菌通用引物进行PCR扩增。结果 13种不同的丝状真菌菌种均在 2h内通过该PCR方法成功地获得了靶DNA的扩增 ,无需任何DNA抽提步骤 ,可用于直接扩增处于任何生长期的未经处理的丝状真菌DNA。结论 此法简便、快速 ,敏感性、特异性均高 ,对丝状真菌引起的深部真菌感染的早期诊断将具潜在意义。

聚合酶链反应技术对真菌性角膜炎快速诊断的实验研究及临床应用

目的探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术与真菌性角膜炎快速诊断的可行性和优越性及其在临床应用中的价值。方法以一段真菌特异性通用引物并配合热启动聚合酶链反应技术来检测临床上常见的病原性真菌。结果８种真菌均扩增出了一条 ３１０ ｂｐ的阳性条带，而其它细菌、病毒和人体角膜组织均为阴性。在动物造型中，ＰＣＲ技术的敏感性为８６．７％，特异性为１００％；真菌培养的敏感性为５６．７％，特异性为７２．７％。在对临床标本的研究中，ＰＣＲ技术的敏感性为６６．６％，真菌培养的敏感性为３３．３％，角膜刮片的敏感性为４０％。结论采用通用性特异引物并配合热启动ＰＣＲ技术来检测实验室和临床标本中是否有真菌存在有重要的应用价值。

多重聚合酶链反应检测革兰阳性/阴性细菌、真菌和mecA基因的临床评价

目的评价多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）直接检测革兰阳性／阴性细菌、真菌和耐甲氧西林葡萄球菌（ＭＲＳ）的可靠性和准确性。方法采用细菌 １６ｒＲＮＡ基因通用引物、革兰阴性细菌特异引物、全真菌通用引物和 ｍｅｃＡ基因特异引物，通过多重 ＰＣＲ对２７１份临床无菌性体液扩增检测革兰阳性／阴性细菌、真菌和ＭＲＳ，同时对这些标本进行细菌、真菌培养和甲氧西林对葡萄球菌ＭＩＣ测定。结果多重ＰＣＲ诊断无菌性体液革兰阳性／阴性细菌、真菌和ＭＲＳ感染的特异性、灵敏度、阳性预测值、阴性预测值和诊断效率分别为９８．５％、９７．０％、９７．０％、９９．０％．、９８．２％，９９．ｌ％、９５．９％、９５．９％、９９．ｌ％、９８．５％，９９．６％、１１％、８３．３％、１００％、９９．６％，１００％、４８．０％、１００％、６１．８％、７１．７％。结论 多重ＰＣＲ直接检测无菌性体液中革兰阳性／阴性细菌、真菌和ｍｅｃＡ基因所致的ＭＲＳ具有敏感、快速、特异、准确的优点，是一种可靠的实验诊断手段，但不能代替培养法。

一种通用高效的聚合酶链反应产物克隆方法

聚合酶链反应(PCR)自问世以来已在生物学界、医学界等领域中得到广泛的应用.其中一个重要方面是将其产物克隆,然后测定核苷酸序列.常用的 PCR产物克隆法是将 PCR 产物以粘性末端或平头连接于 M13噬菌体或 pUC 质粒中,然后转染大肠杆菌.粘性末端连接克隆法效率高,但需在 PCR 产物两端有特定的限制性内切酶切点.且在酶切时易受到多种因素影响而不能得到理想的产物,平头连接克隆法无须酶切,可适用于任何 PCR 产物,但缺点是效率低,笔者在国外工作期间,将平头连接法进行了改进,得到了令人满意的高效率克隆.

应用聚合酶链反应检测某些机会致病真菌的初步探讨

目的 探讨快速检测某些机会致病性真菌的方法。方法 以源于医学机会致病性真菌 1 8srRNA保守区的一对寡核苷酸序列为引物 ,利用聚合酶链反应对医学上重要机会致病性真菌DNA进行扩增。结果 3属 7种 2 9株重要机会致病性真菌 ,经扩增均出现一条 1 97bp的DNA片段 ,而对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、人白细胞则不扩增。以溴化乙啶染色 ,该PCR方法对白念珠菌DNA的最低检出限为 1 pg。 30份临床标本的真菌培养阳性率为2 3.3% ,而经扩增阳性率为 40 %。结论 该法具有较高的灵敏度与特异性 ,有可能应用于临床 。

聚合酶链反应快速诊断真菌性角膜炎

目的 探讨聚合酶链反应 (PCR)技术快速诊断真菌性角膜炎的价值。方法 建立常见致病性真菌菌株的PCR检测方法 ,对兔茄病镰刀菌角膜炎模型研究并应用于临床检测 33例角膜刮片标本 ,结果与涂片镜检和真菌培养做比较。结果 PCR 5h可检测出标本中微量真菌 ,细菌、HSV、人和兔正常角膜组织均为阴性。动物模型和临床标本PCR敏感性分别为 84 .4 %和 81.8% ,均明显高于涂片镜检和真菌培养 (P <0 .0 5 )。结论 PCR速度快、敏感性和特异性高 ,有助于真菌性角膜炎的快速明确诊断。

通用引物SPF1/GP6++与SPF1/GP6+聚合酶链式反应检测多型别人乳头瘤病毒敏感度的比较

目的对比通用引物SPF1/GP6++与SPF1/GP6+PCR两种方法检测人乳头瘤病毒(HPV)的敏感度和感染型别范围。方法以包含HPV16全长DNA序列的质粒为模板,应用HPV L1基因型别特异性引物进行PCR扩增,获得15种型别HPV模拟靶基因序列并克隆入p EASY-T1载体,将梯度稀释的重组质粒掺入50 ng正常人基因组DNA,模拟各型别HPV感染的待测样本,对比SPF1/GP6+和SPF1/GP6++两组通用引物的检测敏感度。进一步在68例人宫颈癌组织DNA样本中进行对比验证。结果与SPF1/GP6+PCR比较,SPF1/GP6++PCR对HPV11,31,34,39,51,52,53,56,58,61和66型别的检测敏感度提高了1到2个数量级,对于HPV16,18,33和35常见感染型别的检测敏感度相似。应用SPF1/GP6++PCR检测宫颈癌组织HPV感染的总阳性率为98.5%(67/68),检测到11例双重感染和2例三重感染;而应用SPF1/GP6+PCR检测的总阳性率为95.6%(65/68),仅检测到7例双重感染。结论在SPF1/GP6+PCR基础上建立了SPF1/GP6++PCR方法,并证实SPF1/GP6++PCR具有更高的检测敏感度和更广的HPV型别检测范围。

应用聚合酶链反应检测真菌性角膜炎

目的:探讨应用聚合酶链反应(PCR)快速检测临床疑似真菌性角膜炎(FK)的方法。方法:以源于医学机会性致病性真菌18srDNA保守区的一对寡核苷酸序列B2F(5'-ACTTTCGTAGGATAG-3')和B4R(5'-TGATCGTCTTCGATAAATA-3')为通用引物,对临床疑似FK的标本进行PCR,并与培养进行对比。结果:在687bp处出现DNA扩增带者为阳性。30份临床标本的真菌培养率为23.3%,而经扩增阳性率为50%。结论:真菌通用引物PCR反应检测真菌性角膜溃疡有较好的敏感性和特异性。

聚合酶链反应方法检测阴道毛滴虫准确性的meta分析

目的系统评价聚合酶链反应检测阴道毛滴虫的应用价值。方法检索中国知网数据库(CNKI)、万方数据知识服务平台、维普数据库和PubMed数据库自建库到2023年5月30日以来基于PCR方法检测阴道毛滴虫的研究文献。经文献筛选、数据提取后,使用软件RevMan 5.4.1和网页服务Meta-Disc 2.0进行Meta分析。结果共纳入36篇文献,16454个临床样本。Meta分析结果显示:聚合酶链反应检测阴道毛滴虫的合并敏感度为0.972(0.943,0.987),合并特异度为0.979(0.968,0.986),诊断比值比为1643.398(673.168,4012.008),阳性似然比为46.209(30.549,69.897)和阴性似然比为0.028(0.013,0.059);亚组分析表明不同性别的临床样本不会影响聚合酶链反应的检测准确性,但不同的PCR检测方法的准确性有差异。结论聚合酶链反应检测阴道毛滴虫的准确性较高,具有良好的应用价值。

聚合酶链反应用于深部真菌病早期诊断及分子流行病学研究进展

近些年来 ,免疫缺损患者的大量增加 ,使条件性真菌感染的发病率迅速上升。由于系统性真菌病治疗困难 ,预后不良 ,及早确立诊断和判明感染来源显得十分重要。现就聚合酶链反应用于深部真菌感染的早期诊断以及非白念珠菌感染的分子流行病学研究的一些近期进展及应用前景作一综述。

实时定量聚合酶链反应检测在恶性血液系统疾病患者侵袭性真菌感染早期诊断中应用价值

侵袭性真菌感染是指真菌引起的感染,常见为侵袭性肺部真菌感染。真菌对气管支气管和肺部的侵犯,引起气道黏膜炎症和肺部炎症肉芽肿,严重者引起坏死性肺炎,甚至血行播散到其他部位。研究表明,免疫力较弱的患者无法抵挡侵袭性直菌感染(IFIs)的袭击,深受折磨,且该疾病易被原发病掩盖[1],早期诊断在临床医疗上有非凡的意义。既往表明干细胞或器官移植患者IFIs发病率最高,随着各种药物在治疗中的普遍使用,产生了类似优胜劣汰的作用,烟曲霉菌在感染中的致病作用呈上升趋势[2]。实时定量聚合酶链反应(PCR)检测的敏感性及特异性比一般的临床检测要高出很多,并克服了许多现有检测方法的不足。在本次研究中,PCR检测结合半乳糖甘露聚糖检测,对比分析评价其诊断疗效,为快速的诊断试剂提供了理论数据,具有很高的医学价值和应用前景。现报告如下。

探讨多重聚合酶链反应系统用于儿童常见细菌及真菌血流感染的价值

目的:探讨在儿童常见细菌及真菌血流感染中应用多重聚合酶链反应系统的价值。方法:选择140例疑诊血流感染患儿作为研究对象,采集患儿血液标本后实施血培养法与多重聚合酶链反应系统检测,比较两种检测方式的阳性率。结果:血培养法检测阳性标本为16份(阳性率为11.43%);多重聚合酶链反应系统检测阳性标本为30份(阳性率为21.43%),血培养法与多重聚合酶链反应系统阳性检出率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:多重聚合酶链反应系统检测儿童常见细菌及真菌血流感染具有更高的应用价值,可在短时间内检测微生物阳性率,且操作简便,更值得临床推广与应用。

聚合酶链反应检测无菌性体液中真菌

目的 :评价聚合酶链反应 (PCR)直接检测无菌性体液中真菌结果可靠性。方法 :采用真菌通用引物 ,通过PCR对 96份临床无菌性体液扩增检测真菌DNA ,同时对这些标本进行细菌、真菌培养。结果 :PCR诊断无菌性体液真菌感染与培养法完全一致 ,培养出细菌的标本PCR检测真菌DNA均阴性。结论 :PCR直接检测无菌性体液中真菌敏感、特异、快速、准确 。

聚合酶链反应快速诊断酿酒工人浅部真菌病的实验研究

为探讨聚合酶链反应(PCR)法诊断酿酒工人浅部真菌病的意义,采用蛋白酶消化法和煮沸法处理临床标本,提取真菌DNA后进行PCR扩增检测,并与培养法对比。收集的191例标本经PCR法检出阳性者173例(占90.58%),培养法检出阳性者162例(占84.82%)。研究表明,PCR法具有快速、简便、敏感性和特异性高等特点,可用于职业性浅部真菌病的检测和诊断。