颅痛宁颗粒对眶下神经缩窄环术诱导三叉神经痛大鼠的治疗作用研究

目的研究颅痛宁颗粒对三叉神经痛模型大鼠的治疗作用,为其临床应用提供参考资料。方法采用眶下神经缩窄环术(ION-CCI)制备大鼠三叉神经痛模型,大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、卡马西平阳性药组、颅痛宁高剂量组(2.70 g生药·kg^(-1)·d^(-1))、颅痛宁低剂量组(1.35 g生药·kg^(-1)·d^(-1))。Von Frey毛刷测定大鼠触须垫机械痛阈值,生化法检测血液血流变和凝血功能,HE染色观察眶下神经病理变化,Western blot技术检测三叉神经内P38和P-P38的蛋白水平。结果颅痛宁颗粒能提高模型大鼠的痛阈值(P<0.05,P<0.01)降低模型大鼠血浆黏度(P<0.05,P<0.01)和全血还原黏度(P<0.05,P<0.01),提高模型大鼠血流变能力;提高模型大鼠血液凝血酶原时间(prothrombintime,PT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplatin time,APTT)和凝血酶时间(thrombin time,TT)水平(P<0.05,P<0.01),降低模型大鼠纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)水平(P<0.01),改善凝血功能;改善模型大鼠眶下神经的病理改变;并降低模型大鼠三叉神经内P-P38的表达量(P<0.01)。结论颅痛宁颗粒具有改善三叉神经痛作用,可能与其活血化瘀功能有关。

BK_(Ca)通道激动剂NS1619和Kv通道拮抗剂4-AP对眶下神经慢性缩窄环术大鼠面部机械痛阈的影响

三叉神经痛(trigeminal neuralgia)是临床上的顽疾,长期以来为医学界所重视,但其发病机制尚不清晰,临床上也无有效的治疗方法。本研究首先通过免疫荧光化学法和动物行为学测定,对经眶下孔达三叉神经节目标注射给药法的效果进行了评价,然后行眶下神经慢性缩窄环术(chronic constriction injury of the infraorbital nerve,ION-CCI)建立三叉神经病理性痛大鼠模型,用经眶下孔达三叉神经节目标注射法分别注射BKCa通道激动剂NS1619和Kv通道拮抗剂4-AP,观察药物对大鼠面部机械痛阈的影响。结果显示,通过经眶下孔达三叉神经节目标注射法,药物可以准确到达三叉神经节,并产生了比一般眶下孔注射给药法更为持久的注射效果。ION-CCI术后第6天大鼠术侧面部触须垫部产生了显著的异常性疼痛(allodynia),并可以维持到至少术后第42天。在ION-CCI术后第15天大鼠,运用经眶下孔达三叉神经节目标注射法注射BKCa通道激动剂NS1619可以剂量依赖性地显著提高ION-CCI组大鼠的面部机械痛阈,逆转面部痛觉过敏;而在ION-CCI术后第35天痛阈部分恢复的大鼠,同样方法注射Kv通道拮抗剂4-AP又可以显著降低面部痛阈。以上结果表明,BKCa通道激动剂NS1619和Kv通道拮抗剂4-AP可以显著影响ION-CCI大鼠的面部机械痛阈,提示激活BKCa通道可以抑制由ION-CCI引起的三叉神经病理性痛,而激活Kv通道可能对ION-CCI引起的三叉神经病理痛有紧张性的抑制作用。

实验性三叉神经痛慢性缩窄环术动物模型建立

目的 :为探讨三叉神经痛的发病机制及治疗等提供实验基础 ,建立一种可靠的三叉神经痛模型。方法 :将大鼠随机分为手术组及假手术组 ,手术组用两根铬线疏松环扎大鼠的眶下神经造成慢性缩窄损伤 ,而假手术组只暴露神经 ,但不结扎 ,观察术后不同时段大鼠对机械刺激的反应阈值及相关的痛觉行为变化。结果 :手术组术后 9～ 6 0天左右 ,在眶下神经支配区域内 ,大鼠出现痛觉超敏现象 ,与手术对侧、术前及对照组比较存在显著差异 (P <0 .0 1) ,极低的外在刺激即可激发强烈的疼痛行为反应 ,持续至术后 30天 ,然后逐渐恢复 ,术后 80天左右恢复术前水平。结论 :大鼠眶下神经的慢性环扎损伤可导致三叉神经痛出现 ,压迫解除后疼痛可缓解。该模型成功地模拟了临床因压迫导致三叉神经痛的情况 ,简单易行 ,成功率高。

三叉神经慢性缩窄环术后大鼠行为反应与组织学变化的关系

目的:观察慢性缩窄环术前后大鼠对机械刺激的反应阈值与三叉神经的组织学改变,探讨三叉神经痛的发病机制,为治疗等提供实验基础。方法:在大鼠一侧三叉神经分支眶下神经(ION)行缩窄环术(CCI),观察术后不同时段大鼠对机械刺激的反应阈值及三叉神经组织学改变。结果:1.术后2周到8周,在ION支配区域内,大鼠出现痛觉超敏现象,与术前及对照组比较存在显著差异(P<0.01),术后4周开始逐渐恢复,术后12周左右恢复至术前水平。2.术后2周,I0N-CCI区域神经纤维肿胀,髓鞘脱失,正常结构消失;术后4到8周,神经纤维仍有脱髓鞘改变;术后12周神经纤维密度均匀,髓鞘与轴突比例恢复正常。结论:慢性缩窄环术后大鼠对机械刺激的反应阈值与其局部神经纤维脱髓鞘改变密切相关。

三叉神经慢性缩窄环术大鼠血降钙素基因相关肽及P物质变化

目的测定三叉神经慢性缩窄环术前后大鼠血降钙素基因相关肽(CGRP)及P物质(SP)的浓度,探讨CGRP、SP与三叉神经痛的关系。方法 18只成年雄性SD大鼠随机分为3组,每组6只:手术组(A组)用铬肠线疏松结扎大鼠右侧眶下神经造成慢性缩窄性损伤;假手术组(B组)仅暴露眶下神经而不结扎;对照组(C组)不行眶下神经暴露及结扎。观察术后大鼠对机械性刺激的行为反应。分别于术前(T0)、术后3d(T1)、9d(T2)、15d(T3)给予大鼠机械性刺激后抽取右侧颈外静脉血,用酶联免疫法(ELISA)测定CGRP及SP的浓度。结果与B、C组比较,A组大鼠术后9d起眶下神经支配区出现痛觉过敏。血中CGRP浓度与术前比较,术后3d时A、B、C组均无统计学差异(P>0.05);术后9d、15dA组浓度均升高(P<0.05,P<0.01),B、C组与术前比较无统计学差异(P>0.05)。与B、C组比较,A组大鼠术后9d、15d血中CGRP浓度均明显升高(P<0.05)。血中SP浓度术后3dA、B、C组较术前均无统计学差异(P>0.05);术后9d、15dA组浓度均升高(P<0.01),B、C组与术前比较均无统计学差异(P>0.05)。与B、C组比较,A组大鼠术后9d、15d血中SP浓度均明显升高(P<0.01)。结论三叉神经慢性缩窄性损伤可引起大鼠三叉神经痛,术后9d、15d大鼠疼痛发作时血中CGRP及SP表达均增高,可能参与了三叉神经痛的发生。

眶下神经慢性缩窄环三叉神经痛动物模型的研究进展

三叉神经痛(TGN)的病因及病理机制尚不清楚,诊断标准趋于主观化,因而模型的制作成为研究的热点,有较多难点需要克服。近年来,眶下神经慢性缩窄环模型由于具有操作简单、存活率高等特点,在研究TGN中被广泛应用。该文就眶下神经慢性缩窄环模型的背景、意义、研究现状和制作方法予以综述。

建立三叉神经痛慢性缩窄环术大鼠模型的体会

目的建立三叉神经痛慢性缩窄环术大鼠模型,并总结经验。方法经口腔入路暴露并结扎眶下神经,建立三叉神经痛慢性缩窄环术大鼠模型。观察术后不同时段大鼠对机械刺激的反应阈值(疼痛阈值)及相关的痛觉行为变化。结果手术组术后14d,在眶下神经支配区域内,大鼠出现痛觉超敏现象,与术前及对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论大鼠眶下神经的慢性环扎损伤可导致三叉神经痛出现。

大鼠三叉神经慢性缩窄环术后延髓尾侧段和上颈髓后角c-Fos蛋白表达

目的 :探讨慢性压缩性损害引起三叉神经痛的中枢机制。方法 :将 2 0只大鼠随机分为两组 ,手术组 (10只 )进行三叉神经分支 (眶下神经 )缩窄环术 ,即用两根铬线将眶下神经疏松环扎 ,对照组 (10只 )只暴露眶下神经 ,但不结扎。在痛觉超敏期 ,将大鼠处死 ,进行免疫组化 ,观察延髓尾侧段及上颈段 (C1～ 2 )后角c Fos蛋白表达。结果 :术后 15天左右 ,手术组动物出现痛觉超敏。两组动物c Fos蛋白主要分布于延髓尾侧段及上颈段脊髓后角Ⅰ、Ⅱ层内 ,手术同侧c Fos较对侧及对照组明显升高 (P <0 .0 1) ,在统计学上有显著差异。结论 :三叉神经慢性压缩性损害诱导中枢传入信号的改变 ,是构成神经性疼痛的基础。

三叉神经痛慢性缩窄环术大鼠动物模型建立的研究

目的 探讨建立三叉神经痛慢性缩窄环术大鼠动物模型的效果.方法 将大鼠随机分为手术组及假手术组,手术组用两根铬线疏松环扎大鼠的眶下神经造成慢性缩窄损伤,而假手术组只暴露神经,但不结扎,观察术后不同时段大鼠对机械刺激的反应阈值（疼痛阈值）及相关的痛觉行为变化.结果 手术组术后2～8周,在眶下神经支配区域内,大鼠出现痛觉超敏现象,与手术对侧、术前及对照组比较存在显著差异（P〈0.01）,术后12周左右恢复至术前水平.结论 大鼠眶下神经的慢性环扎损伤可导致三叉神经痛出现,压迫解除后疼痛可缓解.

HMGB1在三叉神经痛中的作用

目的构造大鼠三叉神经痛(TN)模型探索三叉神经节(TG)内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达情况及HMGB1对疼痛影响的可能机制。方法采用眶下神经缩窄术构造大鼠TN模型,分为手术组(CCI组)和空白组(Sham组),机械痛阈检测鉴定模型构建是否成功;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及Western blot检测Sham组及CCI组大鼠术侧TG中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达量;连续两周每天腹腔注射50 mg/kg HMGB1抑制剂甘草酸(GL),以生理盐水(NS)作为对照,分为CCI组、CCI+NS组、CCI+GL组;RT-qPCR及Western blot检测CCI组、CCI+NS组、CCI+GL组大鼠术侧TG中HMGB1,TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达量。结果大鼠术侧机械阈值持续降低(P<0.05),TN模型构造成功,大鼠眶下神经受到慢性压迫性损伤,术侧TG中的HMGB1、TLR4、NF-κB mRNA及蛋白表达量升高(P<0.05);腹腔注射GL后,术侧TG中的HMGB1、TLR4、NF-κB降低(P<0.05)。结论HMGB1与TN有关,HMGB1可能通过TLR4/NF-κB通路调控TN。

三叉神经慢性缩窄环术大鼠半月节射频热凝的实验研究

目的观察三叉神经慢性缩窄环术大鼠半月节射频热凝的大体及镜下改变,探讨射频热凝温度和时间与半月神经节损伤的关系。方法 36只成年雄性SD大鼠,随机选取33只建立慢性缩窄性损伤三叉神经痛模型。建模成功2周后,随机分为3组:射频热凝组(R组,n=24),假手术组(S组,n=6),热凝对照组(C组,n=3)。经中颅窝开颅暴露半月神经节,R组行半月节穿刺热凝,根据温度、时间随机分为8个小组,每组3只,分别为:65℃120"、180"组,70℃120"、180"组,75℃120"、180"组,80℃120"、180"组。S组仅行半月节穿刺不热凝,按留针时间分为120"、180"两组;C组不行半月神经节穿刺及热凝。余3只SD大鼠作为正常对照组(N组)。R组及S组热凝或穿刺结束即取出大鼠半月神经节,C组、N组直接取出半月神经节,观察半月神经节大体变化,游标卡尺测量神经节毁损区直径,光镜下观察神经节细胞的变化。结果 S组、C组与N组比较,大鼠半月神经节大体及光镜下均无明显变化。R组在65℃时大鼠半月节大体及镜下无明显损伤;70℃时开始在肉眼及镜下出现损伤;75℃、80℃时半月节则出现明显凝固区,毁损区直径测量较70℃组明显增大(P<0.01),光镜下神经元细胞核出现不同程度的固缩改变。毁损温度越高、时间越长,损伤范围越大,程度越重。结论 75℃、80C射频热凝可导致神经节细胞明显变性,损伤程度及范围随温度升高、时间延长逐渐加重与增大。

大鼠慢性缩窄环术三叉神经痛模型的行为与组织学变化研究

目的研究三叉神经慢性缩窄环术大鼠对机械刺激的行为与反应阂值和三叉神经的组织学改变的关系。方法在大鼠左侧三叉神经分支眶下神经（infraorbital nerve，ION）行缩窄环术（chronic constriction iniury，CCI），观察术后不同时段大鼠对机械刺激的反应阈值（疼痛阈值）及三叉神经组织学改变。结果术后2--8周，在ION支配区域内，大鼠出现痛觉超敏现象，与术前及对照组比较存在统计学差异（P〈0．01），ION—CCI区域神经纤维肿胀，髓鞘脱失，正常结构消失，术后12周左右疼痛阈值恢复至术前水平，神经纤维基本恢复正常。结论三叉神经慢性缩窄环术后大鼠对机械刺激的反应阅值降低且与其局部神经纤维脱髓鞘改变密切相关。

p38信号通路在三叉神经痛ION-CCI模型大鼠中的研究

目的检测三叉神经痛(TN)模型大鼠三叉神经节(TG)内p-p38蛋白表达量的变化。方法采用眶下神经缩窄术(ION-CCI)制备大鼠三叉神经痛模型,将雄性SD大鼠随机分为两组,即对照组(sham组)和眶下神经缩窄术组(ION-CCI组)。Frey毛刷测定大鼠触须垫机械痛阈,Western blot检测p-p38的表达量。结果 ION-CCI组大鼠机械痛阈明显低于sham组(n=5,P<0.01)。ION-CCI组大鼠TG内p-p38的蛋白表达量均明显高于建模前正常大鼠(n=3,P<0.05)。结论 p38信号通路可能与TN的发生发展密切相关。

碘对大鼠三叉神经痛抑制作用的实验研究

目的:探讨碘对三叉神经痛的治疗作用及评价其与酒精的疗效。方法:将60只SD大鼠建立左侧眶下神经慢性缩窄环模型并随机分为3组,术后分别于神经周围立即注射碘酊、酒精及盐水。于术后第3、7、14天测疼痛阈值,并将每组大鼠分别随机抽取3只处死,应用组织学检测观察神经组织形态变化。结果:碘酊对三叉神经痛的抑制作用较酒精显著。碘酊的作用使大鼠痛阈升高较酒精显著(P<0.01);组织学检测可见神经纤维非选择性破坏,而酒精对神经的破坏程度较轻。结论:碘对三叉神经痛有治疗作用,且其疗效优于酒精。

牛痘疫苗致炎兔皮提取物治疗三叉神经痛的作用机制研究

目的:观察牛痘疫苗致炎兔皮提取物(analgecine)对于三叉神经痛的效果及镇痛机制。方法:将大鼠制成单侧缩窄性三叉神经痛模型,在痛觉超敏期随机分为两组。牛痘疫苗致炎兔皮提取物组:腹腔内注入牛痘疫苗致炎兔皮提取物100u/kg;生理盐水组:腹腔内注入生理盐水10m l/kg。2周后,观察大鼠疼痛阈值(PT)变化及缩窄环区域神经组织的改变。结果:(1)术后2周,动物出现痛觉过敏,PT明显减低;牛痘疫苗致炎兔皮提取物组PT逐渐升高,与治疗前及生理盐水组相比存在显著差异性(P<0.01)。(2)痛觉超敏期大量神经纤维肿胀变性、髓鞘脱失。2周后,生理盐水组髓鞘脱失明显,无髓纤维数目增多;牛痘疫苗致炎兔皮提取物组神经纤维肿胀消失,髓鞘板层结构致密,与正常结构类似。结论:动物实验表明,牛痘疫苗致炎兔皮提取物对于三叉神经痛的镇痛效果肯定,其作用机制部分是通过促进受损变性的神经纤维修复实现。

三叉神经痛模型大鼠的三叉神经节中JAK/STAT3通路的活化

目的检测用眶下神经缩窄术建立的大鼠三叉神经痛(TN)模型中三叉神经节(TG)内pSTAT3蛋白表达的变化及其定位的细胞类型。方法随机将成年雄性SD大鼠分成两组:眶下神经缩窄术组(CCI-ION组)和假手术组(Sham组),用Von Frey毛刷检测两组大鼠的机械敏感阈值。通过Western blot检测术后TG内pSTAT3蛋白表达量变化,并用免疫荧光实验观察pSTAT3的荧光染色情况及其定位细胞类型。结果CCI-ION组大鼠在术后第1~14天出现机械敏感阈值的显著降低(P<0.05)。CCI-ION组内大鼠TG的pSTAT3蛋白表达量相较于Sham组大鼠明显升高(P<0.05)。CCI-ION组大鼠pSTAT3的荧光染色亦明显强于Sham组,行免疫荧光双染实验发现pSTAT3定位于大鼠TG的小胶质细胞内而非卫星胶质细胞或神经元细胞内。结论在TN模型大鼠的TG小胶质细胞内有JAK/STAT3通路的活化。

miR-30b在三叉神经痛模型大鼠中的表达及作用

目的探讨miR-30b在三叉神经痛(TN)模型大鼠三叉神经节(TG)中发挥的作用。方法采用眶下神经缩窄术(ION-CCI)构建大鼠TN模型。用Von Frey毛刷检测大鼠的机械痛阈。通过qRT-PCR及Western blot检测术侧TG内miR-30b和激活转录因子3(ATF3)表达变化。经眶下孔分别向ION-CCI大鼠的TG内定位注射miR-30b的类似物(agomir)和agomir的阴性对照(agomir NC),检测大鼠的机械痛阈及干预后ATF3表达的变化。结果ION-CCI组大鼠在术后第2~28天出现机械痛阈的降低(P<0.05)。ION-CCI组较假手术组(Sham组)术后TG中miR-30b表达降低,ATF3表达升高(P<0.05)。ION-CCI组过表达miR-30b后,大鼠机械痛阈升高,TG中ATF3表达降低(P<0.05)。结论miR-30b参与调控TN的发生、发展,miR-30b可能是TN潜在的治疗靶点。

不同浓度阿霉素影响大鼠三叉神经痛模型超微结构及行为学研究

目的:本实验是在建立改良的大鼠三叉神经疼痛模型(颧骨下入路)基础上,通过眶下神经周围(眶下孔)注射两种不同浓度的阿霉素,比较大鼠的行为学变化及对三叉神经节超微结构影响,从微观角度验证阿霉素治疗三叉神经痛的有效性及其机制。方法:建立实验鼠上颌神经分支即眶下神经慢性缩窄环术(infraorbital nerve,chronic constriction injury,ION-CCI)模型,在该三叉神经痛模型成功建立的基础上,挑选出现三叉神经痛样反应的雄性SD大鼠60只,随机分成生理盐水组(A组),无水酒精组(B组),0.33%阿霉素组(C组),0.75%阿霉素组(D组),四组分别于注射前,注射后10 d、20 d、30 d的观察大鼠痛反应阈值,并在各时间点随机抽取3只大鼠观察三叉神经节做超微结的变化。结果:1行为学变化:0.75%阿霉素组注射后10 d可见痛阈值明显上升,并持续至注射后30 d,与其他三组比较有显著差异(P<0.01);其余三组注射前后各时间点无统计学差异。2三叉神经节超微结构的改变:D组在注射后10 d可见神经节细胞明显水肿,以线粒体和内质网为主要病理学改变;注射30 d时可见神经节细胞核固缩、崩解,细胞器消失,部分细胞轻度水肿。A、B、C、D四组在注射前神经节细胞核及细胞器无明显改变;A、B、C三组在注射前与注射后各时间点比较,神经节细胞核及细胞器均无显著改变。结论:1阿霉素能通过逆轴浆运输机制,靶向破坏三叉神经半月节,从而起到镇痛的效果;2在本次实验中,0.75%阿霉素比0.33%阿霉素在抑制大鼠三叉神经疼痛方面起到较好的疗效,且未见明显副作用。