颅痛宁颗粒对眶下神经缩窄环术诱导三叉神经痛大鼠的治疗作用研究

目的研究颅痛宁颗粒对三叉神经痛模型大鼠的治疗作用,为其临床应用提供参考资料。方法采用眶下神经缩窄环术(ION-CCI)制备大鼠三叉神经痛模型,大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、卡马西平阳性药组、颅痛宁高剂量组(2.70 g生药·kg^(-1)·d^(-1))、颅痛宁低剂量组(1.35 g生药·kg^(-1)·d^(-1))。Von Frey毛刷测定大鼠触须垫机械痛阈值,生化法检测血液血流变和凝血功能,HE染色观察眶下神经病理变化,Western blot技术检测三叉神经内P38和P-P38的蛋白水平。结果颅痛宁颗粒能提高模型大鼠的痛阈值(P<0.05,P<0.01)降低模型大鼠血浆黏度(P<0.05,P<0.01)和全血还原黏度(P<0.05,P<0.01),提高模型大鼠血流变能力;提高模型大鼠血液凝血酶原时间(prothrombintime,PT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplatin time,APTT)和凝血酶时间(thrombin time,TT)水平(P<0.05,P<0.01),降低模型大鼠纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)水平(P<0.01),改善凝血功能;改善模型大鼠眶下神经的病理改变;并降低模型大鼠三叉神经内P-P38的表达量(P<0.01)。结论颅痛宁颗粒具有改善三叉神经痛作用,可能与其活血化瘀功能有关。

HMGB1在三叉神经痛中的作用

目的构造大鼠三叉神经痛(TN)模型探索三叉神经节(TG)内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达情况及HMGB1对疼痛影响的可能机制。方法采用眶下神经缩窄术构造大鼠TN模型,分为手术组(CCI组)和空白组(Sham组),机械痛阈检测鉴定模型构建是否成功;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及Western blot检测Sham组及CCI组大鼠术侧TG中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达量;连续两周每天腹腔注射50 mg/kg HMGB1抑制剂甘草酸(GL),以生理盐水(NS)作为对照,分为CCI组、CCI+NS组、CCI+GL组;RT-qPCR及Western blot检测CCI组、CCI+NS组、CCI+GL组大鼠术侧TG中HMGB1,TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达量。结果大鼠术侧机械阈值持续降低(P<0.05),TN模型构造成功,大鼠眶下神经受到慢性压迫性损伤,术侧TG中的HMGB1、TLR4、NF-κB mRNA及蛋白表达量升高(P<0.05);腹腔注射GL后,术侧TG中的HMGB1、TLR4、NF-κB降低(P<0.05)。结论HMGB1与TN有关,HMGB1可能通过TLR4/NF-κB通路调控TN。

BK_(Ca)通道激动剂NS1619和Kv通道拮抗剂4-AP对眶下神经慢性缩窄环术大鼠面部机械痛阈的影响

三叉神经痛(trigeminal neuralgia)是临床上的顽疾,长期以来为医学界所重视,但其发病机制尚不清晰,临床上也无有效的治疗方法。本研究首先通过免疫荧光化学法和动物行为学测定,对经眶下孔达三叉神经节目标注射给药法的效果进行了评价,然后行眶下神经慢性缩窄环术(chronic constriction injury of the infraorbital nerve,ION-CCI)建立三叉神经病理性痛大鼠模型,用经眶下孔达三叉神经节目标注射法分别注射BKCa通道激动剂NS1619和Kv通道拮抗剂4-AP,观察药物对大鼠面部机械痛阈的影响。结果显示,通过经眶下孔达三叉神经节目标注射法,药物可以准确到达三叉神经节,并产生了比一般眶下孔注射给药法更为持久的注射效果。ION-CCI术后第6天大鼠术侧面部触须垫部产生了显著的异常性疼痛(allodynia),并可以维持到至少术后第42天。在ION-CCI术后第15天大鼠,运用经眶下孔达三叉神经节目标注射法注射BKCa通道激动剂NS1619可以剂量依赖性地显著提高ION-CCI组大鼠的面部机械痛阈,逆转面部痛觉过敏;而在ION-CCI术后第35天痛阈部分恢复的大鼠,同样方法注射Kv通道拮抗剂4-AP又可以显著降低面部痛阈。以上结果表明,BKCa通道激动剂NS1619和Kv通道拮抗剂4-AP可以显著影响ION-CCI大鼠的面部机械痛阈,提示激活BKCa通道可以抑制由ION-CCI引起的三叉神经病理性痛,而激活Kv通道可能对ION-CCI引起的三叉神经病理痛有紧张性的抑制作用。

p38信号通路在三叉神经痛ION-CCI模型大鼠中的研究

目的检测三叉神经痛(TN)模型大鼠三叉神经节(TG)内p-p38蛋白表达量的变化。方法采用眶下神经缩窄术(ION-CCI)制备大鼠三叉神经痛模型,将雄性SD大鼠随机分为两组,即对照组(sham组)和眶下神经缩窄术组(ION-CCI组)。Frey毛刷测定大鼠触须垫机械痛阈,Western blot检测p-p38的表达量。结果 ION-CCI组大鼠机械痛阈明显低于sham组(n=5,P<0.01)。ION-CCI组大鼠TG内p-p38的蛋白表达量均明显高于建模前正常大鼠(n=3,P<0.05)。结论 p38信号通路可能与TN的发生发展密切相关。

三叉神经痛模型大鼠的三叉神经节中JAK/STAT3通路的活化

目的检测用眶下神经缩窄术建立的大鼠三叉神经痛(TN)模型中三叉神经节(TG)内pSTAT3蛋白表达的变化及其定位的细胞类型。方法随机将成年雄性SD大鼠分成两组:眶下神经缩窄术组(CCI-ION组)和假手术组(Sham组),用Von Frey毛刷检测两组大鼠的机械敏感阈值。通过Western blot检测术后TG内pSTAT3蛋白表达量变化,并用免疫荧光实验观察pSTAT3的荧光染色情况及其定位细胞类型。结果CCI-ION组大鼠在术后第1~14天出现机械敏感阈值的显著降低(P<0.05)。CCI-ION组内大鼠TG的pSTAT3蛋白表达量相较于Sham组大鼠明显升高(P<0.05)。CCI-ION组大鼠pSTAT3的荧光染色亦明显强于Sham组,行免疫荧光双染实验发现pSTAT3定位于大鼠TG的小胶质细胞内而非卫星胶质细胞或神经元细胞内。结论在TN模型大鼠的TG小胶质细胞内有JAK/STAT3通路的活化。

miR-30b在三叉神经痛模型大鼠中的表达及作用

目的探讨miR-30b在三叉神经痛(TN)模型大鼠三叉神经节(TG)中发挥的作用。方法采用眶下神经缩窄术(ION-CCI)构建大鼠TN模型。用Von Frey毛刷检测大鼠的机械痛阈。通过qRT-PCR及Western blot检测术侧TG内miR-30b和激活转录因子3(ATF3)表达变化。经眶下孔分别向ION-CCI大鼠的TG内定位注射miR-30b的类似物(agomir)和agomir的阴性对照(agomir NC),检测大鼠的机械痛阈及干预后ATF3表达的变化。结果ION-CCI组大鼠在术后第2~28天出现机械痛阈的降低(P<0.05)。ION-CCI组较假手术组(Sham组)术后TG中miR-30b表达降低,ATF3表达升高(P<0.05)。ION-CCI组过表达miR-30b后,大鼠机械痛阈升高,TG中ATF3表达降低(P<0.05)。结论miR-30b参与调控TN的发生、发展,miR-30b可能是TN潜在的治疗靶点。