眼柄切除快速诱导甲壳动物生长发育研究进展

眼柄切除因对性腺发育具有显著的促进作用普遍应用于甲壳类动物的人工养殖中。眼柄切除通过直接影响眼柄中X-器官窦腺复合体(XO-SG)的神经内分泌功能发挥作用,眼柄XO-SG复合体是甲壳动物的重要内分泌器官,是甲壳动物内分泌学的重点研究内容。简述了眼柄XO-SG复合体的生物结构及其生理功能,对眼柄内分泌的分子机制进行归纳,为进一步揭示眼柄神经内分泌系统的调控机理提供理论参考。

眼柄切除及注射黄体酮对中华绒螯蟹幼蟹卵巢发育的影响

采用切除单侧、双侧眼柄及注射黄体酮药物的方法研究对幼蟹卵巢发育的影响。结果表明 ,切除双侧眼柄可明显增加幼蟹体重、蜕壳频率 ,极显著提高卵巢指数、肝胰腺指数和卵巢 /肝胰腺质量比 ,极显著增大卵母细胞直径 ;切除单侧眼柄可极显著增加卵巢指数和卵巢 /肝胰腺质量比 ,极显著增大卵母细胞直径 ;注射黄体酮药物可极显著增大卵母细胞直径 ,卵巢指数、卵巢 /肝胰腺质量比增加未达统计学上的显著水平。

CaM与PMCA可能参与眼柄切除诱导克氏原螯虾卵巢成熟的早期分子过程

目前对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)眼柄切除诱导卵巢成熟的分子机制还很不清楚。借鉴国外最新研究结果,探讨了克氏原螯虾单侧眼柄切除后第1、7、15天体长、体重及卵巢的一系列变化情况,利用实时定量PCR技术比较分析了眼柄切除前、后卵巢组织中钙调蛋白基因(CaM)与质膜Ca2+-ATPase基因(PMCA)的表达情况。结果表明,在克氏原螯虾眼柄切除诱导卵巢成熟的早期分子过程中,钙信号通路可能发挥了重要作用。实验结果为进一步深入研究克氏原螯虾眼柄切除促进卵巢成熟的分子机制积累了研究资料。

能量代谢相关基因在眼柄切除诱导克氏原螯虾卵巢成熟中后期的表达量

借鉴国外最新研究结果,探讨了克氏原螯虾单侧眼柄切除后15 d内卵巢的一系列变化情况,利用实时定量RT-PCR技术比较分析了眼柄切除前、后卵巢组织中NADH脱氢酶、ATP合成酶F0及细胞色素C氧化酶的基因表达情况。结果显示,在克氏原螯虾眼柄切除诱导卵巢成熟的中后期,这些能量代谢相关基因表达量大幅上调。说明在克氏原螯虾养殖过程中卵巢快速发育阶段,卵巢组织细胞要消耗大量能量,须要在饲料配方中提高能量饲料的比例。

眼柄切除对克氏原螯虾蜕皮·生长·性腺发育的影响

于1996年在虾池试验中用烧烫挤压法切除雌性克氏原螯虾单侧、双侧眼柄,研究了眼柄切除对克氏原螯虾蜕皮、生长及性腺发育的影响。结果表明,在该试验条件下,去除眼柄后,克氏原螯虾蜕皮加快,蜕皮周期缩短,生长速度同比例增长。蜕皮、生长速度和性腺发育均是双侧组>单侧组>对照组,组间差异极显著(P<0.01)。切除单侧、双侧眼柄后,克氏原螯虾加快卵巢成熟,而且组间差异极显著(P<0.01)。

眼柄切除对口虾蛄卵巢、肝胰脏和肌肉生化组分的影响

采用镊烫法切除体长10.20~15.20cm雌性口虾蛄单侧眼柄,测量性腺指数和肝胰腺指数,测定卵巢、肝胰脏和肌肉中的生化组分含量的变化,以探讨眼柄切除对口虾蛄卵巢发育的影响。结果显示,切除单侧眼柄后,口虾蛄性腺指数上升,切除后第5、10、15d极显著高于对照组(P<0.01)。试验组和对照组口虾蛄的肝胰腺指数在试验后期均显著下降(P<0.05)。试验组卵巢中的糖原含量高于对照组,在第5、15d分别与对照组间具有显著(P<0.05)和极显著差异(P<0.01);肝胰脏中的糖原含量也显著或极显著高于对照组(P<0.05和P<0.01);而肌肉中的糖原含量自第5d开始下降,早于对照组。切除单侧眼柄第10d后,肝胰脏中蛋白含量开始显著上升(P<0.05),之后均高于对照组;试验组卵巢中蛋白含量也高于对照组,第15d时差异具有统计学意义;而试验组与对照组肌肉中的蛋白含量均表现出先升后降趋势,二者间差异不显著(P>0.05)。试验结果表明,眼柄切除可以促进口虾蛄体内营养物质积累和转移,有助于卵巢发育。

切除眼柄对凡纳滨对虾亲虾卵巢、肝胰腺、血清生化组成的影响

为探讨眼柄切除对凡纳滨对虾性成熟的促进机理,采用镊烫法切除雌性凡纳滨对虾单侧眼柄,并测量肝胰腺指数和性腺指数,测定卵巢、肝胰腺和血清中生化组分含量的变化。结果表明,切除眼柄7 d后,1)肝胰腺指数降低,性腺指数上升,差异均有统计学意义(P<0.05);2)卵巢、肝胰腺中总蛋白含量增加,差异有统计学意义(P<0.05),血清中总蛋白含量无明显改变(P>0.05);3)卵巢和血清中胆固醇含量增加,肝胰腺中胆固醇含量降低,差异均有统计学意义(P<0.05);4)血清中钙离子和无机磷含量增加,差异有统计学意义(P<0.05)。切除眼柄后,卵巢和肝胰腺中卵黄蛋白原等营养物质大量合成,肝胰腺中的总蛋白、胆固醇等营养物质先转移至血淋巴,再转移至卵巢,从而促进性腺的成熟。

饥饿和切除眼柄对日本囊对虾亲虾性腺发育及血淋巴生化成分含量的影响

亲虾性腺发育过程实质上是一个营养积累的过程,为了探讨在这个过程中亲虾对营养物质有何种需求,采用形态解剖、称量法和酶学法测定了日本囊对虾亲虾性腺发育过程中的性腺指数(GSI)、肝胰腺指数(HPI)及其血淋巴的葡萄糖、胆固醇和甘油三酯的含量,对来自台湾海峡的亲虾[体质量为(83.26±1.47)g/ind]进行了饥饿和切除眼柄等处理,并研究了这两种处理方法对日本囊对虾亲虾性腺发育及血淋巴生化含量变化的影响.结果表明:1)实验前后,饥饿组和交并组亲虾的GSI和HPI均有显著下降(p<0.05);切除眼柄组和对照组亲虾的GSI上升极显著(p<0.01),其中切除眼柄组与对照组相比HPI显著下降(p<0.05);2)4个组实验前后血淋巴葡萄糖和甘油三酯水平都显著上升(p<0.01),胆固醇水平均呈现出单峰形式变化,峰值都出现在实验中期.可以认为:繁殖期间,日本囊对虾亲虾性腺发育的能源主要来自于食物中,饥饿不利于亲虾性腺积累营养物质,而切除眼柄可以促进亲虾体内营养物质的吸收和转移,从而促进性腺发育.

切除眼柄对日本囊对虾亲虾摄食、性腺发育及能量转化的影响

在水温（22．5±2．50）℃，盐度30-32，pH7．8～8．3，光照1000lx的条件下，分别对切除眼柄和未切除眼柄的台湾海峡日本囊对虾亲虾（平均体长（19．2±0．95）cm，平均体质量（82．7±10．57）g）进行为期30d的摄食、性腺发育及能量转化的初步研究．结果表明：1）实验组（切除眼柄）日本囊对虾的摄食量与摄食强度均高于对照组（未切除眼柄），夜间摄食强度分别为白天的1．39倍和1．28倍（p〈0．01）；促熟期间实验组亲虾摄食量保持上升之势，而对照组为上升与下降交替出现．2）实验结束时，实验组和对照组性腺指数（GSI）的增幅分别为504．07％和91．42％（p〈0．01）；性腺的干／湿质量比值（Gd／m）亦为实验组高于对照组，但二者之间差异不显著（P〉0．05）．3）实验结束时，实验组和对照组亲虾的躯体能值（Eb）均略有下降，性腺能值（E）实验组增幅大于对照组，且两组之间差异极显著（p〈0．01），从能值的角度来看，繁殖期间的亲虾表现为负生长；实验过程中，饵料转化效率（FCE）实验组和对照组分别为10．17％和1．76％，饵料能量转化效率（ECE）分别为14．30％和2．37％，均为实验组大于对照组．说明切除眼柄可以提高日本囊对虾亲虾的摄食量和摄食强度、促进性腺发育并提高其能量转化效率，亲虾性腺发育期间的能量除主要由食物转化之外，还消耗了机体其它组织器官的储能．由此可以了解日本囊对虾亲虾繁殖期间的摄食规律、性腺发育情况和能量转化特点并为其养殖阶段的科学管理提供理论依据．

饥饿和切除眼柄对日本囊对虾卵巢发育过程中肝胰腺内生化组分含量的影响

在水温为23.5±1.5℃,pH =7.0 ～8.0,盐度为30 ～32,光照为1 000 Lux左右的条件下,对来自台湾海峡的日本囊对虾亲虾（体质量为83.26±1.47 g/ind.）进行饥饿和切除眼柄的处理,实验为期9d,设置对照组、切除眼柄组、饥饿组和饥饿＋切除眼柄4个组,采用形态解剖称量法和酶学法测定亲虾卵巢发育过程肝胰腺内葡萄糖、胆固醇和甘油三酯含量的变化情况.实验结果表明,繁殖期间亲虾肝胰腺中的葡萄糖、胆固醇和甘油三酯的含量变化随着促熟时间延续呈下降走势,其中切除眼柄组亲虾肝胰腺内葡萄糖含量和胆固醇含量变化最大,分别从（66.72±3.82）× 10-3、（48.70±4.81）×10-3 mg/g下降到（12.13±1.52） ×10-3、（14.50±1.47）×10-3 mg/g,而切除眼柄＋饥饿组甘油三酯含量从（32.00±3.18）×10-1 mg/g下降到（5.92±1.24）×10-1 mg/g,降幅达到81.50％;实验过程3种生化储备物含量水平,切除眼柄组一直低于对照组,切除眼柄＋饥饿组低于饥饿组,而饥饿组远远低于对照组;分析认为繁殖期间亲虾肝胰腺中葡萄糖、胆固醇和甘油三酯的吸收和积累小于转移;切除眼柄能促进亲虾肝胰腺中葡萄糖、胆固醇和甘油三酯通过血淋巴转移到性腺,加快能量的转化效率;性腺发育所需的生化储备物质主要来源于食物,饥饿不利于性腺发育.

切除眼柄对清洁虾繁殖及环境因子对其幼体存活率和变态所需时间的影响

采用镊烫法切除清洁虾（Lysmata amboinensis）亲虾的单侧眼柄,研究切除眼柄对亲虾生长、怀卵量、孵化率、幼体数量、蜕皮周期、产卵周期的影响;在人工控制条件下研究不同温度（20、23、26、29、32℃）、盐度（24、27、30、33、36）以及饵料（小球藻、角毛藻、轮虫、卤虫）对清洁虾幼体存活及生长变态的影响。结果表明：切除眼柄对清洁虾亲虾的生长速度影响显著,在试验期间（126 d）,试验一组（1尾切除眼柄）亲虾体长增长了24.2（±2.3）mm、试验二组（两尾切除眼柄）增长24.2（±2.7）mm、对照组（两尾眼柄均未切）增长16.2（±0.8）mm,差异显著;切除眼柄对清洁虾的怀卵量影响显著,试验一组、二组及对照组分别为1 746.0（±1.5）、1 982.0（±44.1）、1 343.0（±25.2）粒/尾;试验组的幼体数量也显著高于对照组,分别为1 146.0（±5.5）、1 254.0（±26.3）、699.3（±7.8）个/尾;切除眼柄后亲虾的蜕皮次数有所增加,分别为12、12、11次;产卵周期缩短,分别为10.8、10.0、11 d。清洁虾幼体生长的适宜温度为23~29℃,最适温度为26℃;适宜盐度为27~33,最适盐度为33;Z1~Z2期幼体的最佳饵料为角毛藻,Z3~Z6期幼体的最佳饵料为卤虫。前期以角毛藻为主辅以卤虫和轮虫,后期以卤虫为主辅以轮虫和单细胞藻类饲喂清洁虾幼体,可取得较好的饵料效果。

切除眼柄对淡水青虾人工育苗的效果

淡水青虾学名日本沼虾(Macrobrachium nipponense),主要分布在日本、东南亚和我国,是淡水虾中的优良品种。我们于1992年4月至5月间,借鉴中国对虾的育苗技术,对青虾进行了切除眼柄手术,取得了人工诱导青虾成熟和产卵的初步成功。现将我们的实验报告如下。

切除眼柄与触角对波纹龙虾存活、蜕壳、摄食和生长的影响

为了探讨切除眼柄或第二触角对波纹龙虾Panulirus homarus幼虾存活、蜕壳、摄食和生长的影响,以体质量为(18.15±1.85)g的波纹龙虾为研究对象,试验设置对照组(无任何处理)、眼柄切除组和触角切除组,每组设3个平行,每个平行放15尾虾,共养殖120 d,试验结束后分析测定波纹龙虾的存活、蜕壳和生长变化情况。结果表明:眼柄切除组波纹龙虾存活率显著高于其他组(P<0.05),而触角切除组与对照组间存活率无显著性差异(P>0.05);切除眼柄对波纹龙虾的蜕壳周期无显著性影响(P>0.05),而切除触角则显著延长了波纹龙虾第1次蜕壳的时间(P<0.05),切除的触角经过2次蜕壳后再生,前后两次蜕壳对整体的蜕壳周期无显著性影响(P>0.05),但切除触角的波纹龙虾平均蜕壳周期显著大于其他两组(P<0.05);与对照组相比,切除眼柄显著提高了波纹龙虾的摄食率(P<0.05),并显著降低了饵料系数(P<0.05),而切除触角则显著提高了波纹龙虾的摄食率和饵料系数(P<0.05);切除眼柄显著促进了龙虾的生长,眼柄切除组龙虾各时间点的体质量增长率、体长增长率和特定生长率均显著高于其他组(P<0.05),而切除触角对上述各项指标均无显著性影响(P>0.05)。研究表明,波纹龙虾眼柄的切除有助于提高养殖存活率,促进其摄食和生长,在养殖生产上值得借鉴和推广,而触角的切除对其生长无益处,还可能因病原入侵而导致龙虾死亡,因此,在养殖生产中应谨慎捕捉波纹龙虾,以保持其触角完整。

东南亚渔业发展中心采用切除眼柄的方法诱导5月令斑节对虾产卵

东南亚渔业发展中心水产养殖部开展对饲养5月令的斑节对虾，采用切除眼柄的方法，进行性腺诱导产卵试验，取得进展。试验方法是：首先将天然对虾苗47尾，放养在咸淡水土池中饲养，共饲养五个月。对雌虾进行生物学测定，每尾平均头胸甲长为55．3毫米、体长189．6毫米、体重为104．4克。切除眼柄，其方法是在水下进行，夹住眼柄，

切除眼柄对加速克氏原螯虾卵巢发育进程的组织学研究

应用组织切片和透射电镜技术研究眼柄切除对加速克氏原螯虾(Procambarus clarkii)卵巢发育进程的影响。实验分成4组,选取眼柄切除15 d和30 d两个时间点进行。切除眼柄30 d后,雌虾体长增长显著,从(11.50±2.30)cm增长至(18.20±3.40)cm(P<0.05),性腺指数(GSI)从4.56%±2.81%增长至8.05%±2.51%(P<0.05),体重和螯肢长也有所增长(P>0.05)。电镜观察发现卵母细胞从发育Ⅱ期迅速度过Ⅲ期进入到Ⅵ期阶段,卵母细胞体积变大,变圆;液泡压缩变小;卵黄颗粒加速积累,逐渐占满整个胞内空间;滤泡细胞胞质从黏稠变稀薄。这些结果表明,切除眼柄在短期内显著加快卵母细胞内卵黄颗粒的积累,并且加快个体生长。

血清素在斑节对虾催熟过程中的作用

在斑节对虾Penaeus monodon催熟催产过程中,常用的方法是切除眼柄。此实验选用体重为149.5±25.8g的自然海区斑节对虾,比较了注射血清素(serotonin)和切除眼柄2种处理方法对斑节对虾的催熟效果。血清素注射剂量为50μg.g-1体重,在实验的第1、5和10天注射,共计3次。结果显示,2种方法处理后,受试亲虾性腺指数(gonad somatic index,GSI)显著高于对照组,同时注射血清素的实验组亲虾的存活率及其卵子孵化率显著高于切除眼柄的实验组。实验结果表明,血清素对斑节对虾催熟有促进作用,但发挥效应所需要的时间较长;从切除眼柄手术到第一次产卵所需时间较短,但是手术后的亲虾死亡率较高。

不同处理条件对日本囊对虾亲虾卵巢发育及几种生化组分浓度的影响

在水温(23.5±1.5)℃,pH 7.0～8.0,盐度30～32,光强约为1 000lx的条件下,对来自台湾海峡的日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)(体质量为(83.26±1.47)g/ind)进行饥饿和切除眼柄的处理,研究亲虾性腺发育及卵巢发育过程中葡萄糖、胆固醇和甘油三酯的质量浓度变化情况.采用形态解剖称量法和酶学法测定亲虾卵巢发育过程葡萄糖、胆固醇和甘油三酯的质量浓度变化情况.结果表明:葡萄糖的质量浓度在对照组和切除眼柄组中呈现上升趋势,而在饥饿组中处于很低水平,交并组则是前2次取样有上升趋势,后2次取样时质量浓度下降;胆固醇的质量浓度在对照组和切除眼柄组积累呈显著递增趋势,饥饿组和交并组胆固醇质量浓度先上升后下降;甘油三酯的质量浓度将切除眼柄组与其余3组相比,整个实验期间都维持较高水平,但与对照组差异不太显著(p>0.05),饥饿组和交并组先上升后极显著降低(p<0.01).分析认为,日本囊对虾性腺发育过程,切除眼柄组的葡萄糖、胆固醇和甘油三酯质量浓度均有一定程度的积累上升,表明切除眼柄可以促进肝胰腺、血淋巴中营养物质活跃地转移到卵巢以保证卵黄积累,有利于亲虾的生殖能力的提高.该研究为进一步开展虾蟹类性腺生理学研究提供参考资料.

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)foxl2基因功能初探及相关miRNA分析

foxl2在脊椎动物卵巢分化、发育和功能维持等方面具有重要作用,然而其在三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)卵巢发育中的功能尚不明确。本研究首先克隆了三疣梭子蟹foxl2(Ptfoxl2)基因cDNA全长序列,该基因5′和3′非编码区域(UTR)长度分别为701 bp和211 bp,开放阅读框的长度为1590 bp。基因表达分析结果显示,foxl2在三疣梭子蟹不同组织中均有表达,但在卵巢中表达量最高;其在卵巢发育不同时期的表达存在显著差异,在V期表达量最高;切除眼柄后,该基因的表达出现显著下降;干扰该基因表达后,卵巢vtg基因的表达显著上调。上述结果表明,foxl2可能在三疣梭子蟹卵巢发育调控中发挥重要功能,能够抑制卵巢组织中卵黄蛋白的合成。为进一步分析该基因的表达调控方式,利用生物信息学方法,预测了靶向foxl2的miRNA,并通过双荧光素酶报告基因检测实验,从细胞水平验证了这些miRNA对Ptfoxl2的调控作用;分析了其在卵巢发育不同时期以及切除眼柄后的表达模式。结果显示,共转染miR-9类似物和包含foxl23′UTR的pmirGLO质粒组,萤火虫酶与海肾荧光素酶活性比值出现显著下降,且在卵巢发育过程及切除眼柄后与foxl2表达模式相反。该结果初步证实miR-9可以从转录后水平调控三疣梭子蟹foxl2基因的表达。