氮源和N/P对眼点拟微球藻的生长、总脂含量和脂肪酸组成的影响

报道了NaNO3,NH4Cl和NH4NO3 3种氮源及N/P对海洋微藻眼点拟微球藻(Nannochloropsisoculata)的生长、总脂含量和脂肪酸组成的影响。结果表明 ,N/P从10增加到90 ,对细胞生长的影响不大 ,总脂含量最终都稳定在干重的20 %左右。16∶0、16∶1n 9和20∶5n 3 (EPA)是脂肪酸的主要组分 ,三者之和占总脂肪酸的70 %～80 %。在培养基N/P>20时 ,20∶5n 3和PUFA占总脂肪酸的比例接近30 %和35 %。在3种氮源中 ,使用NaNO3 可获得更高的生长速率 ,并在相对较低的N/P下 (N/P=54)时获得约30 %的EPA ,故NaNO3 是眼点拟微球藻生长、合成和积累EPA的最佳氮源。将培养基中所有营养盐增加4倍 ,EPA含量可提高到35 % ,说明富含氮、磷的培养基可使细胞始终保持旺盛生长、富含EPA的状态 ,这也是该种微藻大规模培养中高产EPA的关键措施。

眼点拟微绿球藻与扁藻在不同接种比例下的竞争

通过对眼点拟微绿球藻和扁藻进行共培养试验,结果表明,在共培养条件下,眼点拟微绿球藻和扁藻的生长速度均受到抑制,即两种藻的最大生长密度均比对照(分别单独培养)有显著降低,而且眼点拟微绿球藻降低的程度要大于扁藻。经计算两种藻的种间竞争系数可知,扁藻的种间竞争能力明显强于眼点拟微绿球藻。

pH对眼点拟微绿球藻的生长、总脂含量及脂肪酸组成的影响

pH对眼点拟微绿球藻(Nannocholoropsisoculata)的生长、总脂含量及脂肪酸组成有明显影响。研究表明 ,眼点拟微绿球藻的生长对pH有较强的适应性 ,在pH6.2～9.8的范围内均能较好的生长 ,但在 pH5.5的条件下生长受到较强的抑制。在不同 pH条件下 ,在同一细胞周期内总脂含量及脂肪酸组成均有相同的变化规律 ,即总脂含量在对数初期略有下降然后逐渐上升 ,在稳定期达到最大值。16∶0,18∶1n9的含量在稳定期显著升高 ,而EPA的含量在稳定期明显下降。在对数初期,藻细胞在pH6.8的条件下含有较高的EPA含量,而在 pH9.8的条件下 。

眼点拟微绿球藻在黑暗胁迫下的超补偿生长响应

采用LRH-GII型光照培养箱培养试验藻种,设置了持续黑暗胁迫(分6个强度处理)和间断黑暗胁迫(分4个模式处理)两项试验,研究了眼点拟微绿球藻(Nannochloropsisoculata)在不同环境胁迫下的生理生态变化和该藻种在黑暗胁迫下的超补偿生长响应情况.两个试验的结果均显示,眼点拟微绿球藻在持续黑暗胁迫和间断胁迫后,均表现出明显的超补偿作用现象.黑暗对眼点拟微绿球藻的生长造成显著抑制,但是适当进行黑暗胁迫以后恢复生长,微藻具有更强的生长繁殖能力,细胞净增率最大可达123%.经SSR测验,不同的胁迫方式、胁迫持续时间和胁迫模式与超补偿现象发生时间及强度密切相关.

培养条件对眼点拟微绿球藻油脂含量和EPA产率的影响

眼点拟微绿球藻（N.oculata）具有生长速度快、含油量高等优点,且其脂肪酸组成中含有大量二十碳五烯酸（EPA）,因此它是微藻生物柴油的良好原料.以眼点拟微绿球藻为对象,研究了培养时间、盐度、pH值等培养条件对眼点拟微绿球藻油脂含量和EPA产率的影响.试验表明：选择稳定5d为眼点拟微绿球藻的最佳采收时间,油脂含量为378.1 mg/g干藻,EPA产率为5.5 mg/（L·d）;当盐度为16.7时,眼点拟微绿球藻的油脂含量和EPA产率均能达到最高,油脂含量为506.0 mg/g干藻,EPA产率为7.37 mg/（L·d）;在适合眼点拟微绿球藻生长的pH值（8.0～10.0）下,保持整个培养过程中pH值为8.0i油脂含量和EPA产率均较高,油脂含量为471.7 mg/g干藻,EPA产率为7.45 mg/（L·d）.

响应面法优化眼点拟微绿球藻酶法提油工艺研究

采用纤维素酶酶解眼点拟微绿球藻提取胞内油脂。在单因素实验的基础上,以酶用量、酶解时间、酶解温度、酶解p H为自变量,油脂提取效率和EPA提取效率为响应值进行响应面法优化酶解反应条件。结果表明:对油脂提取效果影响的主次顺序为酶解温度>酶解p H>酶用量>酶解时间,在酶用量1.59 g/kg(以干藻粉质量计)、酶解时间2.11 h、酶解温度39.3℃、酶解p H 4.17的条件下,油脂提取效率达到最大值98.72%#0.15%;对EPA提取效果影响的主次顺序为酶解温度>酶解时间>酶解p H>酶用量,在酶用量1.60 g/kg(以干藻粉质量计)、酶解时间1.86 h、酶解温度37.9℃、酶解p H 4.10的条件下,EPA提取效率达到最大值97.86%#0.12%。

盐度及其调节方式对眼点拟微球藻的生长和EPA积累的影响

本文研究了盐度对海产眼点拟微球藻的生长和EPA积累的影响,同时比较了天然海水、粗海盐和NaCl三种物质在调节培养基盐度、影响藻细胞生长和EPA积累方面的作用,结果表明:盐度处于14.5‰～33.5‰之间对EPA的含量没有显著影响,但对细胞比生长速率的影响更为显著。藻细胞生长和EPA积累的最适盐度范围在27.0‰～29.0‰。用NaCl实现海水中的盐度不能有效促进细胞的生长和EPA积累,而用粗海盐实现海水中的盐度能发挥与海水基本相同的作用。

三种抑制剂对眼点拟微球藻的生长及脂肪酸组成的影响

研究了 DCMU、氟哒酮及亚油酸对眼点拟微球藻的生长、总脂含量及不饱和脂肪酸组成的影响。结果表明 :(1)当 DCMU的浓度在 0 .8μmol/ L以上时 ,眼点拟微球藻的生长抑制率达80 % ,其总脂占干重的百分含量减少了近 30 % ;在 1.0 μmol/ L 时 ,EPA占其总脂肪酸的相对百分含量增加了 10 8.6 1%。 (2 )当氟哒酮的浓度在 8.0μmol/ L以上时 ,眼点拟微球藻的生长抑制率为82 .9% ,其总脂占干重的百分含量下降了 2 1% ,而 EPA占其总脂肪酸的相对百分含量增加了6 0 %。(3)当亚油酸的最终浓度在 4 0 0 μmol/ L 以上时 ,眼点拟微球藻的抑制率达 6 4 %以上 ;大于30 0 μmol/ L、4 0 0 μmol/ L 时 ,EPA占其总脂的相对百分含量在 4 .77%以下 ;在 5 0 μmol/ L 以下时 ,EPA占其总脂肪酸的相对百分含量从对照组的 2 0 .96 %下降到 19.4 9%以下。结果表明 ,眼点拟微球藻在养殖中 ,当生物量增加到一定的程度时 ,可以用加入一定浓度的 DCMU或氟哒酮的方法来大幅度提高 EPA的含量。

眼点拟微绿球藻生长的生态因子分析

眼点拟微绿球藻(Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓｏｃｕｌａｔａ)是重要的海水经济藻类,本文研究了温度,光强,盐度,碳因子对藻体生长的影响,并采用正交实验的方法研究了Ｎ,Ｐ,Ｆｅ三因子对其生长的影响。试验表明:眼点拟微绿球藻的生长适温范围０－３０℃,最适温度为２０℃;适光范围较广,喜强光,最适光强５ ０００－７ ０００ ｌｘ;在盐度为１３．７－３３．４范围生长率差别不明显,最适盐度为２６．９;碳源偏喜重碳酸盐。Ｎ浓度为１０μｍｏｌ·Ｌ－１,Ｐ浓度为２μｍｏｌ．Ｌ－１,Ｆｅ浓度为０．２μｍｏｌ·Ｌ－１时对该藻生长最有利。

富含EPA的海洋微藻眼点拟微球藻的大规模培养

采用“随机设计”软件优化了海洋微藻眼点拟微球藻 (Nannochloropsisoculata)的工业培养基 ,细胞在配方 1中的EPA含量占总脂肪酸的 4 0 %以上 ,平均比生长速率高达 0 .32d- 1。 1999年 10月间在 83.5m2 户外池中大规模获得生物量的平均面积产率为 1.0 9g/m2 ·d ,藻粉中含有 4 9.5 0 %的蛋白质、2 0 .30 %的总脂和3.0 0 %的EPA。 2 0 0 0年 8月 ,在 6 .12m2 、2 8.0 2m2 和露天 83.5m2 跑道池中采用耐高温生产藻种 ,生物量面积产率分别为 5 .4 4、9.96和 7.6 6g /m2 ·d ,藻粉中含有 2 .5 0 %的EPA。这表明富含EPA的眼点拟微球藻的工业化生产是完全可行的 。

Fe对眼点拟微球藻的生长和脂肪酸组成的影响

研究了铁对眼点拟微球藻（Nannochloropsis oculata）的生长和脂肪酸组成的影响。结果表明：Fe^2＋浓度在0～0．5mmol／L的范围内，细胞比增长速率随Fe^2＋浓度的升高而降低。与对照组相比，随着Fe^2＋浓度的升高，细胞中主要的饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸占总脂肪酸的比例有所降低，而多不饱和脂肪酸占总脂肪酸的比例则有较大的提高。另外，在一定范围内（0～0．3mmol／L），Fe^2＋浓度的升高则会促使细胞内积累二十碳五烯酸（EPA）。细胞生长和EPA积累的最适Fe^2＋浓度是0．05mmol／L，在这一浓度下细胞比增长速率为0．236±0．020d^-1，细胞中EPA质量分数比对照组提高约24％。

眼点拟微绿球藻对抗生素的敏感性及其无菌藻株的培养

研究了5种抗生素在不同浓度下对眼点拟微绿球藻(Nannochloropsis ocutala)生长的影响。结果表明:浓度为50μg·mL-1时,氯霉素对眼点拟微绿球藻生长的抑制作用最明显,抑制率高达85.30%,2d和4d的Ic50分别为293.64μg·mL-1和67.69μg·mL-1。其次为青霉素、硫酸庆大霉素和硫酸卡那霉素,4d的抑制率分别为8.95%、7.62%和3.84%,其中硫酸庆大霉素2d的Ic50为316.40μg·mL-1。链霉素对藻细胞生长的抑制作用最轻,抑制率仅为3%。按照抗生素对眼点拟微绿球藻生长抑制作用,由强到弱依次加入50μg·mL-1青霉素,50μg·mL-1硫酸庆大霉素,100μg·mL-1硫酸卡那霉素和50μg·mL-1链霉素,获得了无菌藻株。

N/P比及氮盐浓度对眼点拟微绿球藻培养密度和油脂含量的影响

研究N/P比及Na NO3浓度对眼点拟微绿球藻生长密度和油脂含量的影响。设计4个不同N/P比(=1∶1,4∶1,16∶1,32∶1)和6个不同Na NO3浓度(0.025、0.075、0.225、0.450、0.900、1.350 g/L)。实验结果表明:N/P比及Na NO3浓度均对眼点拟微绿球藻的生长密度和油脂含量有很大影响。当Na NO3浓度为0.225 g/L,N/P比为4∶1时,其油脂含量和生物量最高,分别为41.20%和2.53 g/L。实验找到眼点拟微绿球藻高油脂含量和高生长密度的N/P比和Na NO3浓度的最佳结合点,为眼点拟微绿球藻能够用来生产生物柴油提供实验依据。

光照对眼点拟微绿球藻和三角褐指藻生长及总脂的影响

研究了不同光照强度及单、双侧光照对眼点拟微绿球藻(Nannochloropsis oculata)和三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)的生长、总脂及叶绿素a的影响。结果表明:眼点拟微绿球藻的生物量随光照强度的增加而升高,相同光照强度下单侧光照优于双侧;三角褐指藻的生物量受光照强度及单、双侧光照的影响不明显。眼点拟微绿球藻的总脂含量随光照强度的升高先增加后减少;三角褐指藻的总脂含量随光照的增强呈上升趋势。两种藻的叶绿素a含量随藻体总脂含量的升高而降低。综合考虑,眼点拟微绿球藻较三角褐指藻进行油脂生产更有优势。

一种提取眼点拟微球藻(Nannochloropisis oculata)DNA的简便方法

用氯化锂法从眼点拟微球藻 (Nannochloropisisoculata)中提取DNA并对其提取条件进行了优化。新鲜藻细胞在提取液 (0.6mol/LLiCl,0.8%Sakosyl,20mmol/LEDTA(pH8.0) ,0.4%PVP,10mmol/LTris HCl(pH8.0) ,5% β 巯基乙醇 )中经过55℃温育30min,每mg鲜藻可提取20～40ngDNA ,提取的DNA分子量在23kb左右 ,可用于PCR、限制性酶切等。

L-肉碱对眼点拟微绿球藻种群增长及生化组成的影响

【目的】探究L-肉碱对眼点拟微绿球藻(Nannochloropsis oculata)种群增长及生化组成的影响,为L-肉碱对眼点拟微绿球藻营养调控作用和调控机理研究提供参考。【方法】分别采用不同质量浓度(0(对照组),5,50,100 mg/L)的L-肉碱强化培养眼点拟微绿球藻6 d,每组3个重复。每天检测眼点拟微绿球的种群密度,试验结束时收集样品并检测眼点拟微绿球的生化组成。【结果】5 mg/L L-肉碱组眼点拟微绿球的种群密度显著高于其他组(P<0.05)。5和50 mg/L L-肉碱组眼点拟微绿球藻总糖含量无显著差异,但均显著高于对照组(P<0.05),而显著低于100 mg/L L-肉碱组(P<0.05)。5 mg/L L-肉碱组眼点拟微绿球藻的总脂含量显著低于其他3组(P<0.05),而其他3组间无显著差异,但以100 mg/L L-肉碱组最高。5 mg/L L-肉碱组眼点拟微绿球藻的可溶性蛋白含量最高,显著高于其他3组(P<0.05)。5 mg/L L-肉碱组眼点拟微绿球藻的叶绿素a含量最高,虽与对照组无显著差异(P>0.05),但均显著高于50和100 mg/L L-肉碱组(P<0.05),而50 mg/L L-肉碱组显著高于100 mg/L L-肉碱组(P<0.05)。5和50 mg/L L-肉碱组眼点拟微绿球藻的∑SFA含量显著低于对照组和100 mg/L L-肉碱组(P<0.05)。5 mg/L L-肉碱组眼点拟微绿球藻的∑MUFA含量显著高于其他3组(P<0.05),其他3组间无显著差异(P>0.05)。5和50 mg/L L-肉碱组眼点拟微绿球藻的∑PUFA、∑EPA+DHA和∑n-3含量均显著高于对照组和100 mg/L L-肉碱组(P<0.05)。5和100 mg/L L-肉碱组眼点拟微绿球藻的∑n-6含量显著低于对照组和50 mg/L L-肉碱组(P<0.05)。【结论】在本试验条件下,添加5 mg/L L-肉碱能显著促进眼点拟微绿球藻的种群增长,提高其可溶性蛋白和总糖含量,并能显著改善其脂肪酸组成。

反应器培养眼点拟微绿球藻时摆向、光程对产量的影响

在内蒙古达拉特旗地区(N 40°,E 110°)户外自然条件下利用板式反应器培养眼点拟微绿球藻并进行产量研究。通过对9、11、13、17cm光程反应器对比,确定13cm光程反应器养殖产量最高,并在存在反应器间距的情况下,得到13cm光程反应器南北摆放时单位占地面积产量要高于反应器东西摆放时单位占地面积产量,从6月到8月分别高16.3%、8.7%和3.0%。同时本研究给出可根据养殖当地的地理位置,预测反应器的摆放方向以及反应器间距等参数设置的方法,以获得养殖产量的最大值。

眼点拟微绿球藻养殖过程中致死细菌的分离鉴定与治理

对户外受到细菌污染的眼点拟微绿球藻藻液进行致病菌分离和鉴定分析,获得了一个可以导致藻细胞死亡的细菌菌株Algoriphagus sp.。对该细菌的治理方法进行了研究,发现0.030 g/L的有效氯虽然对该细菌有明显的杀灭效果,但对藻细胞也有一定程度的伤害;而硫酸庆大霉素对该细菌无明显的杀灭作用。最终选用0.020 g/L有效氯作为户外眼点拟微绿球藻养殖中嗜冷菌污染的最佳治理药剂。

眼点拟微绿球藻养殖过程中细菌污染的治理方法

[目的]以进入中国饲料原料目录的眼点拟微绿球藻为研究对象,研究其在户外自然培养过程受到细菌污染时的污染治理方法及方法的应用。[方法]在硫酸庆大霉素、四环素、青霉素、红霉素和氯霉素为代表的5大类抗生素中筛选最佳的抗生素种类,并对藻液中抗生素残留进行氧化、紫外方法单独使用或结合使用等处理方法的研究。[结果]综合抗生素对藻细胞本身的影响和对细菌的治理效果结果,硫酸庆大霉素治理细菌效果最优,其次为四环素;红霉素对细菌无明显抑制作用;青霉素和氯霉素对藻细胞生长有明显的抑制作用。去除残留庆大霉素的有效方法为:在不含藻细胞的水体中可单独通入2 h的臭氧或加入100 mg/L高浓度有效氯溶液的方法可将硫酸庆大霉素去除95%以上,该方法可用作养殖清液或废液中硫酸庆大霉素的处理方法;在藻液中可使用15 mg/L的有效氯+紫外照射0.5 h的组合方法联合处理形式效果佳,藻液中的硫酸庆大霉素去除率在90%以上;藻细胞生长仅在初期受到轻微抑制作用,但细胞性状很快得到恢复,总体藻细胞的性状基本未受到明显的影响。[结论]针对户外眼点拟微绿球藻养殖过程中细菌污染可以使用硫酸庆大霉素进行治理,并可利用15 mg/L有效氯+紫外照射0.5 h将残留在藻液中的庆大霉素较好地去除,上述2种方法的结合使用可以保证户外养殖的持续进行,为眼点拟微绿球藻的规模化稳定养殖提供一种污染治理技术支撑,有利于该藻株的产业化进程。