前列腺癌“劫持”肿瘤相关成纤维细胞通过外泌体MALAT1调控糖代谢重编程的机制研究

目的:阐明外泌体转移性肺腺癌相关转录因子1(MALAT1)介导的前列腺癌(PCa)细胞与癌相关成纤维细胞(CAFs)间相互作用,探究CAFs来源的外泌体MALAT1在PCa糖代谢重编程中的作用及其机制。方法:分析肿瘤基因组图谱(TCGA)资料,探讨MALAT1在多种肿瘤中的表达模式,尤其是其与PCa的临床关联性。运用单细胞RNA测序(scRNA-seq)及相关技术,研究MALAT1在介导PCa细胞与CAFs之间相互作用的机制。过表达CAFs细胞中的MALAT1,提取上清外泌体,并与PCa细胞共培养,通过RNA纯化的染色质分离—质谱(ChIRP-MS)等方法,研究外泌体MALAT1在PCa进展中的功能及作用机制。结果:利用TCGA数据集进行分析,观察到MALAT1与前列腺腺癌、乳腺浸润癌、胆管癌等多种肿瘤恶性程度相关,且与PCa不良预后相关。scRNA-seq分析显示,PCa肿瘤微环境细胞中的CAFs不仅存在PCa分子标记物KLK3,而且MALAT1在CAFs中的表达显著高于PCa细胞,提示PCa细胞能够“驯化”CAFs,并通过CAFs中MALAT1促进PCa进展。进一步地,共培养和ChIRP-MS实验发现外泌体MALAT1通过与PCa糖代谢关键酶的直接结合调控PCa的能量代谢。ChIRP-MS和RNAseq联合分析发现外泌体MALAT1能够与4个糖酵解关键基因(GPI、ALDOC、PGK1、ALDOA)直接结合,从而调控PCa细胞的糖代谢重编程。结论:PCa细胞能够“驯化”CAFs,并通过CAFs释放外泌体MALAT1直接作用于PCa糖酵解关键分子,从而调控糖代谢重编程加速PCa发展。

基于成纤维细胞生长因子1的药物治疗肥胖相关并发症

目前,超重和肥胖的发生率已在全球范围内达到流行病的程度,这对慢性代谢性疾病预防和控制造成了巨大挑战。肥胖是包括2型糖尿病、非酒精性脂肪性肝病、心血管病、神经退行性疾病、睡眠呼吸暂停和某些类型的癌症等在内的一系列代谢疾病的主要危险因素。然而,治疗肥胖及其相关并发症的药物选择仍然有限,大多数抗肥胖药物因严重不良反应而退出市场,迫切需要开发有效的长期治疗方法来应对肥胖相关并发症。成纤维细胞生长因子1(fibroblast growth factor 1,FGF1)是全身能量稳态、糖脂代谢和胰岛素敏感性的重要调节因子。FGF1对于肥胖及2型糖尿病、非酒精性脂肪性肝病、癌症、心脏病等肥胖相关并发症具有一定的治疗益处,但长期使用导致的肿瘤发生风险增加限制了其应用。本综述总结了基于FGF1治疗肥胖相关并发症的生物药物开发的最新进展,强调了临床实施中的主要挑战,并讨论了克服这些障碍的可能策略。

成纤维细胞生长因子21在代谢性疾病中的研究进展

成纤维细胞生长因子21(FGF21)属于成纤维细胞生长因子(FGF)家族成员,分泌到血液后结合到成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)和受体辅助蛋白(KLB)激活下游FGFR1信号通路,从而作用于大脑、肝脏、脂肪、骨骼肌和胰岛等靶组织。FGF21具有降糖、降脂和减重的作用,以FGF21为靶点,针对代谢相关疾病非酒精性脂肪肝炎(NASH)进行了相关药物研发,在人体临床试验中效果显著,靶向激活FGF21/FGFR/KLB信号通路有望用于临床治疗代谢性疾病。FGF21类似物治疗NASH药物开发的临床效果和安全性还有待进一步验证。本文就FGF21在代谢性疾病方面的作用机制和研究现状以及相关临床药物的研究进展进行总结概述,为临床治疗提供参考。

成纤维细胞生长因子21与妊娠期代谢性疾病的研究进展

妊娠期代谢性疾病(gestational metabolic diseases,GMD)是影响孕产妇及新生儿结局最主要的原因,目前其作用机制仍不清楚。成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)是由多种器官合成的多肽激素,其作用机制复杂,在体外和体内调节一系列代谢过程,主要以内分泌方式参与葡萄糖、脂质、能量调节及胆汁酸的肝肠循环等代谢活动,还在细胞增殖与分化、神经元发育、血管生成及伤口愈合过程中发挥关键作用。因此,FGF21的释放障碍、信号失调和功能异常与GMD如妊娠期糖尿病、妊娠期高血压疾病和妊娠期肝内胆汁淤积症等密切相关。综述FGF21在GMD中作用机制的最新研究进展,以期及早、精确地发现GMD及其隐匿病情,达到早诊断、早干预的目的,最终改善母儿预后。

机械应力对人子宫旁韧带成纤维细胞增殖及胶原代谢的影响

目的探讨人子宫旁韧带成纤维细胞增殖及胶原代谢受到机械应力的影响。方法选取2020年2月-2020年5月于上海市第一妇婴保健院医院妇科因良性肿瘤行子宫全切手术的5例患者,年龄43~49岁,均无盆底功能障碍疾病,均未绝经,使用酶消化法获得人子宫旁韧带成纤维原代细胞并鉴定。对子宫旁韧带成纤维细胞进行不同时间(12 h及24 h)及不同大小(6%、12%及18%)周期性拉伸应力加载,检测成纤维细胞的增殖能力及细胞胶原代谢相关基因MMP-2、TIMP-1、CollagenⅠ、CollagenⅢ及LOXL1的RNA水平的表达变化,以未加力细胞组作为对照组,进行对照分析。结果与对照组相比,6%、12%及18%的拉伸应力都可以抑制成纤维细胞的增殖能力,且在一定范围内随着应力增加(6%~12%)及作用时间延长(12~24 h)其抑制作用增加。与对照组相比,6%的拉伸应力使成纤维细胞MMP-2、TIMP-1、CollagenⅠ、CollagenⅢ及LOXL1的RNA水平出现轻度上调趋势,但差异不显著(P>0.05)。12%及18%的拉伸应力使成纤维细胞MMP-2、TIMP-1、CollagenⅠ、CollagenⅢ及LOXL1的RNA水平下调。且随作用力加大(12%~18%),MMP-2、TIMP-1、CollagenⅠ、CollagenⅢ及LOXL1 mRNA表达都有进一步下降的趋势,其中LOXL1 mRNA表达有明显的下降(P<0.05);随着作用时间延长(12~24 h),MMP-2、TIMP-1、CollagenⅠmRNA的表达明显下降(P<0.05),而CollagenⅢ及LOXL1 mRNA的表达差异无统计学意义。在各基因中,CollagenⅢ和MMP-2 mRNA表达水平的最大下调幅度为21.1%和24.8%,TIMP-1、CollagenⅠ及LOXL1 mRNA分别达到43.6%、40.1%及47.9%。结论较短时间的轻度的拉伸应力似乎具有促进子宫骶韧带成纤维细胞的增殖及上调胶原相关基因表达的趋势,但仍需进一步实验验证;较大及较长时间的拉伸应力可以抑制成纤维细胞的增殖并使胶原相关基因表达下调,但各基因的下调具有不一致性。

妊娠期糖尿病患者血清葡萄糖依赖性促胰岛素释放肽、成纤维细胞生长因子-23水平与产后糖代谢异常的关系

目的 探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者血清葡萄糖依赖性促胰岛素释放肽(GIP)、成纤维细胞生长因子-23(FGF23)水平与产后糖代谢异常的关系。方法 选取82例确诊GDM患者为研究对象,并采集静脉血检测血清GIP、FGF23水平。产后12周采用75 g葡萄糖耐量试验(OGTT)评估患者糖代谢状态,并根据结果将GDM患者分为糖代谢正常组66例和糖代谢异常组16例。采用多因素Logistic回归模型分析影响GDM患者产后糖代谢异常的因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清GIP、FGF23预测GDM患者产后糖代谢异常的价值。结果 糖代谢异常组血清GIP水平低于糖代谢正常组,FGF23水平高于糖代谢正常组,差异有统计学意义(P<0.01)。孕前高体质量指数(BMI)、高FGF23是GDM患者产后糖代谢异常的危险因素(P<0.05),高GIP是保护因素(P<0.05)。GIP、FGF23、孕前BMI预测GDM患者产后糖代谢异常的曲线下面积(AUC)分别为0.717、0.625、0.699, GIP、FGF23、孕前BMI联合预测GDM患者产后糖代谢异常的AUC为0.890,高于GIP、FGF23、孕前BMI单独预测价值(P<0.05)。结论 GDM产后糖代谢紊乱患者血清GIP水平降低,FGF23水平增高,且与产后糖代谢异常有关。血清GIP和FGF23可预测GDM患者产后糖代谢异常风险。

根皮素对白细胞介素-1β诱导Graves眼病眼眶成纤维细胞中炎症反应和氧化应激的抑制作用及其机制

目的观察根皮素对白细胞介素(IL)-1β诱导的Graves眼病(GO)患者眼眶成纤维细胞(OFs)中炎症反应和氧化应激的抑制作用及其机制。方法收集2019年1月至2020年12月于河南省立眼科医院确诊为非活动期GO并行眼眶减压术的患者6例6眼的眼眶脂肪及结缔组织。采用组织块培养法分离原代OFs并传代,细胞免疫荧光法鉴定OFs。将细胞分为对照组、IL-1β诱导组以及不同浓度根皮素处理组。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测25、50、75、100和200μmol/L根皮素处理24和48 h后OFs的活性。采用IL-1β诱导OFs模拟GO体外炎症环境。采用荧光探针H2DCF-DA法检测正常对照组、IL-1β诱导组、50μmol/L根皮素组和100μmol/L根皮素组细胞内活性氧簇(ROS)水平。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测正常对照组、IL-1β诱导组以及25、50、75、100μmol/L根皮素组细胞培养上清液中促炎细胞因子IL-6、IL-8和MCP-1质量浓度。采用Western blot法检测正常对照组、IL-1β诱导组及100μmol/L根皮素组细胞内血红素加氧酶1(HO-1)、核因子NF-E2相关因子Nrf2和MAPK信号通路蛋白P38、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及其磷酸化蛋白表达。结果原代分离培养的OFs表达vimentin,证明为间充质来源,desimin、S-100、cytokeratin-18表达阴性,鉴定为成纤维细胞。CCK-8结果显示,25、50、75和100μmol/L根皮素组细胞处理后24和48 h吸光度(A)值与对照组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。50μmol/L根皮素组和100μmol/L根皮素组细胞内ROS水平分别为21.95±1.71和10.01±1.03,明显低于IL-1β诱导组的39.27±4.01,差异均有统计学意义(均P<0.01)。ELISA结果显示,25μmol/L、50μmol/L、75μmol/L和100μmol/L根皮素组细胞培养上清液中IL-6质量浓度分别为(4544.25±572.98)、(1000.25±133.96)、(724.25±98.63)和(519.50±118.02)pg/ml,均显著低于IL-1β诱导组的(7581.75±565.93)pg/ml,差异均有统计学意义(均P<0.01);50μmol/L、75μmol/L和100μmol/L根皮素组细胞培养上清液中IL-8质量浓度分别为(3679.50±676.76)、(2143.75±616.20)和(1174.75±284.18)pg/ml,显著低于IL-1β诱导组的(8411.00±939.67)pg/ml,差异均有统计学意义(均P<0.01);50μmol/L、75μmol/L和100μmol/L根皮素组细胞培养上清液中MCP-1质量浓度分别为(3783.25±610.24)、(1565.75±457.89)和(745.75±227.01)pg/ml,显著低于IL-1β诱导组的(5533.00±602.87)pg/ml,差异均有统计学意义(均P<0.01)。100μmol/L根皮素组HO-1、Nrf2蛋白相对表达量明显高于IL-1β诱导组,p-P38、p-ERK、p-JNK蛋白相对表达量明显低于IL-1β诱导组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论根皮素可降低IL-1β诱导的GO患者OFs细胞内氧化应激水平,抑制促炎细胞因子产生,其作用机制与Nrf2/HO-1的激活及MAPK信号通路的抑制相关。

肿瘤坏死因子α对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞的去分化作用及调控机制

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞(OF)分化的影响及其机制。方法收集2019年12月至2020年8月在天津医科大学眼科医院诊断为TAO且拟行眼眶减压术的患者6例6眼,术中收集眼眶脂肪结缔组织,组织块培养法分离培养OF并进行波形蛋白免疫荧光鉴定。诱导OF成脂分化并油红O染色鉴定。分别采用含0、0.1、1.0、10.0μg/L TNF-α的完全培养液诱导眼眶成熟脂肪细胞去分化。分别收集原代、分化14 d和去分化20 d细胞,通过实时荧光定量PCR检测过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)、细胞外调节蛋白激酶1(ERK1)、ERK2及脂肪包被蛋白1(perilipin1)mRNA相对表达量;采用Western blot法检测PPARγ、P-ERK1/2、perilipin1蛋白相对表达量。结果体外成功培养人TAO来源OF,细胞呈梭形或多角形,呈旋涡状紧密排列,波形蛋白免疫荧光染色呈阳性。OF成脂分化诱导后,部分细胞的细胞质中可出现脂滴样结构,油红O染色可见细胞质内被着染的脂滴结构,证实分化后所得到细胞为脂肪细胞。0.1μg/L、1.0μg/L、10.0μg/L TNF-α诱导脂肪细胞发生去分化,且随诱导时间的延长,细胞质中的脂滴体积缩小,含脂滴细胞数量也逐渐减少,并在去分化20 d胞质内脂滴基本消失,细胞变为长梭形,紧密排列,去分化为成纤维样细胞。实时荧光定量PCR检测结果显示,分化14 d组细胞PPARγ、ERK1、ERK2、perilipin1 mRNA相对表达量分别为4.26±0.09、2.01±0.09、3.23±0.10和8.69±0.33,明显高于原代组的1.00±0.09、1.05±0.19、1.00±0.10和1.05±0.07以及去分化20 d组的1.06±0.03、1.15±0.11和6.27±0.09,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Western blot检测结果显示,分化14 d组PPARγ、ERK1/2、perilipin1蛋白表达量分别为1.07±0.03、1.00±0.03和1.13±0.02,明显高于原代组的0.37±0.02、0.29±0.02和0.00±0.00以及去分化20 d组的0.20±0.02、0.38±0.06和0.00±0.00,差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论TNF-α对TAO眼眶脂肪细胞有去分化作用,其机制可能与下调ERK1/2-PPARγ-perilipin1信号通路有关。

基于代谢组学分析碱性成纤维细胞生长因子对糖尿病小鼠肝损伤的作用

目的:基于1H NMR的代谢组学方法探究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在糖尿病肝损伤中的代谢调控作用。方法:将C57BL/6J小鼠设为wt组,db/db小鼠分为糖尿病肝损伤组(db/db组)和bFGF给药组(b FGF组)。给药10周后处死,收集肝脏组织,一部分做HE染色观察肝组织形态,另一部分采集1H NMR谱,采用偏最小二乘判别分析(PLS-DA)比较3组小鼠肝脏的代谢模式变化以及差异代谢物水平。结果:HE染色结果表明,wt组小鼠肝小叶和肝窦结构清晰,db/db组小鼠肝细胞脂肪变性明显,bFGF干预后,bFGF组脂滴和炎性细胞明显减少,细胞坏死损伤减轻。PLS-DA结果表明,3组小鼠肝脏的代谢模式存在明显差异。代谢物定量分析结果显示,db/db组小鼠肝脏中亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、乳酸、琥珀酸、肌酐、甘氨酸、三磷酸鸟苷和苯丙氨酸的代谢水平较wt组显著降低,但给予bFGF治疗后其代谢水平显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:b FGF可以改善糖尿病肝损伤肝脏组织的代谢紊乱,主要涉及到能量代谢、氨基酸代谢和核苷酸代谢。

眼眶黏液炎性成纤维细胞肉瘤1例

47岁男性,因“左眼球突出2个月”入院。体格检查发现左眼球前突,向外下方移位,结膜轻度充血,余查体阴性。影像学示左眼眶球后、视神经鼻侧软组织占位,肿块涉及肌锥内外,与视神经、内直肌、滑车等结构紧密相连。入院后予双重睑联合睑纵向切口入路行左眼眶占位完整切除,病理提示黏液炎性成纤维细胞肉瘤。讨论体会:对于特殊类型的眼眶肿瘤,如肉瘤、孤立性纤维瘤等应避免活检,尽可能完整切除;对于视神经鼻侧较大的眼眶肿瘤采取睑纵向切口可充分暴露术野,术后效果满意。

成骨细胞代谢重编程与早期肾性骨病发生发展的研究进展

慢性肾脏病矿物质和骨骼疾病(CKD-MBD)对患者的生活质量、住院率和骨折风险有直接影响。近年来成骨细胞及骨细胞成为CKD-MBD病理生理学研究的中心,成骨细胞通过合成成纤维细胞生长因子23(FGF-23)、硬化素等,与其他器官相互作用,使骨骼成为内分泌器官。因此,成骨细胞分化失调是慢性肾脏病发病过程中重要的早期事件。本文系统讨论了成骨细胞的代谢途径及早期CKD-MBD病理状态下成骨细胞代谢重编程改变的相关机制,表明Wnt家族分泌蛋白/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)、FGF-23、尿毒症毒素、代谢性酸中毒等信号通路及代谢物异常可改变成骨细胞代谢活性,引起成骨谱系成熟障碍,进而影响骨重塑,对于解释肾性骨病病理改变及临床治疗方案提供新思路。

胰岛素样生长因子-1对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞的促生长作用

背景甲状腺相关眼病（TAO）是一种自身免疫性疾病，目前对其发病机制的研究主要集中在共同抗原上。胰岛素样生长因子-1（IGF．1）功能的发挥需要IGF-1受体（IGF-1R）的参与，IGF-1在促甲状腺激素受体（TSHR）的信号传导通路中也起着重要作用。目的探讨IGF-1对TAO患者眼眶成纤维细胞（OFs）增生及IGF-1R、TSHR表达的影响，探讨IGF-1在TAO发病机制中的作用。方法收集2016年3-6月于四川大学华西医院行TAO眼眶脂肪切除术取得的眶组织标本17例17份及正常人美容手术取得的眼眶组织4人4份，采用含体积分数5％胎牛血清的DMEM／F12培养液培养OFs。分别于培养液中加入不同质量浓度（O、50、100、125μg／L）的IGF-1，采用MTS比色法绘制OFs生长曲线，评估IGF-1对TAO和正常来源OFs增生的影响；采用流式细胞术测定不同质量浓度IGF-1对TAO和正常来源OFs中IGF-1R、TSHR表达水平的影响。结果TAO患者与正常人来源的OFs均生长良好，呈梭形，细胞质丰富，TAO患者与正常人来源的OFs形态学特点一致。培养的OFs波形蛋白呈阳性反应，结蛋白、S-100、肌红蛋白和角蛋白均呈阴性反应。不同质量浓度IGF-1作用后TAO组和正常组OFs增生均呈逐渐上升趋势，总体比较差异有统计学意义（F分组=219．639，P〈0．001；F质量浓度=17．752，P〈0．001），以100μg／LIGF-1的促进作用最强。0、50、100、125μg／LIGF-1作用后TAO组OFs中IGF-1R表达量分别为（0．0091±0．0087）％、（0．0953±0．0233）％、（0．0837±0．0227）％和（0．0709±0．0241）％，正常组OFs中IGF-1R表达量分别为（0．0023±0．0006）％、（0．0093±0．0012）％、（0．0073±0．0015）％和（0．0083±0．0012）％，其中50、100和125μg／LIGF-1作用后各组OFs中IGF-1R表达量均高于无添加IGF-1者，TAO组OFs细胞中IGF-1R的表达量均明显高于正常组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；0、50、100和125μg／LIGF-1作用后TAO组和正常组OFs中TSHR表达量的总体比较差异均无统计学意义（F分组=0．133，P〉0．05；F质量浓度=0．004，P〉0．05）。结论IGF-1对TAO患者和正常人OFs的生长均有促进作用并能上调OFs中IGF-1R的表达，但其对OFs中TSHR的表达变化无明显影响。

高糖环境中雄激素受体对心肌成纤维细胞增殖和脂质合成能力的影响

目的探究雄激素受体(androgen receptor,AR)对高糖环境下心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖和脂质合成能力的影响及可能的分子机制。方法解剖新生乳鼠的心脏进行CFs原代培养,镜下观察CFs生长状态,并通过波形蛋白的免疫荧光鉴定细胞属性。细胞贴壁后分为空白对照组、高糖模型组、阴性对照组,过表达AR组,除空白对照组葡萄糖浓度为5.5 mmol·L^(-1)外,其余各组葡萄糖浓度均为33.0 mmol·L^(-1)。培养24 h后通过Western blot和RT-qPCR检测AR、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)、PCNA、cyclin D1、α-SMA、collagenⅠ的表达情况。油红O和CCK-8分别检测脂质合成和细胞增殖能力的改变。结果与空白对照组相比,高糖模型组中CFs的脂质合成和增殖能力增强。Western blot和RT-qPCR结果显示AR的蛋白和mRNA的表达降低,而FASN、增殖标志蛋白PCNA、cyclin D1和纤维化标志蛋白α-SMA、collagenⅠ的蛋白和mRNA的表达增加。在过表达AR质粒载体转染高糖模型组CFs后,过表达组CFs中的FASN、PCNA、cyclin D1、α-SMA、collagenⅠ蛋白和mRNA同空载体组相比表达下降。同时,油红O染色和CCK-8结果分别表明过表达AR组的脂质合成和增殖能力相比空载体组减弱。结论高糖环境下心肌成纤维细胞的增殖和脂质合成能力增强,其作用机制可能AR调控脂质合成有关。

黄芪甲苷通过激活短链酰基辅酶A脱氢酶抑制Ang Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原表达

目的观察黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)诱导的大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖和胶原表达的影响。方法原代提取并体外培养大鼠CFs,用短链酰基辅酶A脱氢酶(short-chain acyl-CoA dehydrogenase,SCAD)的沉默基因SiRNA1186预处理CFs 12 h后,加入Ang Ⅱ和AS-Ⅳ共同处理36 h。Western blot检测SCAD、α-SMA、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ的蛋白表达水平;荧光定量PCR检测SCAD、α-SMA、collagen Ⅰ、collagen Ⅲ的mRNA表达水平;检测各组CFs中SCAD酶活性、ATP、羟脯氨酸和游离脂肪酸含量变化。结果Ang Ⅱ作用CFs 36 h后,与空白对照组比较,Ang Ⅱ组CFs增殖率,α-SMA、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ的蛋白和mRNA表达水平明显增加(P均<0.01),SCAD表达和酶活性均明显降低(P<0.01,P<0.05),ATP生成减少(P<0.01),羟脯氨酸和游离脂肪酸含量升高(P均<0.01);AS-Ⅳ给药处理后,CFs增殖和胶原表达明显减少(P均<0.01),SCAD表达和酶活性明显升高(P均<0.01),ATP生成增加(P<0.01),羟脯氨酸和游离脂肪酸含量减少(P均<0.01);然而,与Ang Ⅱ+NC组相比,Ang Ⅱ+SiRNA1186+AS-Ⅳ组各项指标均无差异,在SCAD SiRNA1186的干扰下,AS-Ⅳ对Ang Ⅱ诱导的CFs增殖和胶原表达的保护作用被取消。结论AS-Ⅳ可能通过激活SCAD,从而抑制Ang Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原表达。

肺肌成纤维细胞转化的研究新进展

肺肌成纤维细胞是驱动特发性肺纤维化发生发展的重要效应细胞,但肺肌成纤维细胞转化的分子机制至今仍未阐明。该文将从机械转导、代谢、氧化应激、泛素化、细胞衰老等方面总结近5年关于肺肌成纤维细胞转化分子机制的研究新进展。

甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞CD90表达的研究

目的检测培养的不同来源眼眶成纤维细胞(OF)是否存在表达CD90抗原的差异,为研究眼眶成纤维细胞潜在的功能异质性奠定基础。方法培养甲状腺相关眼病(TAO)患者和正常对照眼眶成纤维细胞,流式细胞术检测CD90的表达。结果正常人、TAO患者的眼外肌、眼眶脂肪/结缔组织来源的成纤维细胞均有部分细胞表达CD90。正常人/眼外肌来源OF、TAO患者/眼外肌来源OF、正常人/眼眶脂肪来源OF、TAO患者/眼眶脂肪来源OF的CD90+细胞的比例分别为82.95%±6.49%,80.83%±7.14%,64.55%±4.45%,59.20%±11.19%。眼外肌来源的成纤维细胞中CD90+的细胞比例高于眼眶脂肪/结缔组织来源的成纤维细胞(P<0.05),而正常人与患者之间差异没有统计学意义(P>0.05)。结论正常人和TAO患者OF表达CD90抗原不一致,且与解剖部位有关。

鼠源成纤维细胞生长因子-21对脂肪细胞糖代谢的作用

成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是FGF家族的成员之一.近年发现FGF-21是一种新的代谢调节因子.从小鼠肝脏克隆FGF-21cDNA,经测序正确后亚克隆至具有羟胺切割位点的小泛素相关修饰物表达载体上,转化宿主菌Rosetta,得到的转化子经IPTG诱导后获得稳定、高效、可溶的表达产物.表达产物经羟胺切割、透析、复性、柱层析纯化后,在每升宿主菌中可获得4mg纯度为95%的成熟鼠源FGF-21蛋白,利用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(POD-GOD)法在小鼠3T3-L1脂肪细胞中进行生物学活性检测.结果表明,鼠源FGF-21具有促进脂肪细胞吸收葡萄糖的作用,短期作用(1h)与胰岛素相似,长期作用(8和12h)明显优于胰岛素.这一结果为以鼠源FGF-21为模型进一步研究FGF-21的生物学活性及其在糖代谢方面的作用机理奠定了基础.

非酒精性脂肪肝患者血浆成纤维细胞生长因子21水平与肥胖、脂代谢及胰岛素抵抗的相关性

目的探讨非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者血浆成纤维细胞生长因子(FGF)21水平与肥胖、脂代谢及胰岛素抵抗(IR)的相关性。方法选择2012年7月至2015年7月该院收治的NAFLD患者132例,根据患者是否合并2型糖尿病(T2DM)分为T2DM合并脂肪肝组(DFI组)与单纯脂肪肝组(FI组),另选择同期该院健康体检者60例为对照组,采用酶联免疫吸附法测定血浆FGF21水平,并检测其各项生理、生化指标,分析FGF21水平与肥胖、脂代谢及IR的相关性。结果 DFI组与FI组患者肥胖比例、体质量指数(BMI)、腰臀比(WHR)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及游离脂肪酸(FFA)水平均显著高于对照组,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著低于对照组,DFI组患者BMI、WHR水平显著低于FI组,TG、空腹胰岛素(FINS)水平显著高于对照组(P<0.05);DFI组与FI组患者空腹血糖(FPG)、IR指数(HOMA-IR)、FGF21水平均显著高于对照组,DFI组FPG、FNS、HAMO-IR水平显著高于FI组,FPG显著高于对照组,DFI组与FI组胰岛素敏感指数(ISI)水平均显对于对照组,DFI组ISI水平显著低于FI组(P<0.05);研究对象血浆FGF21水平与BMI、HOMA-IR、WHR、FFA、TG呈正相关(r=0.261、0.322、0.341、0.310、0.301,P<0.05),与ISI、HDL呈负相关(r=-0.215、-0.281,P<0.05);多重线性回归分析显示,WHR、HOMA-IR及TG对机体血浆FGF21水平存在显著影响,且WHR对患者血浆FGF21水平的影响作用最大。结论 NAFLD患者血浆FGF21水平出现显著升高,机体FGF21水平与肥胖、脂代谢紊乱及IR相关,WHR、HOMA-IR及TG对机体血浆FGF21水平存在显著影响。

成纤维细胞生长因子21对1型糖尿病动物模型的肝糖代谢影响及机制研究

成纤维细胞生长因子(FGF)-21是FGF家族的成员之一.作为近年发现的一种新的糖代谢调节因子,大量研究表明,FGF-21是一种不依赖胰岛素,能够独立降糖的2型糖尿病治疗潜力型药物.但是,能否应用于1型糖尿病的治疗,国内外目前尚无报道.通过改良传统造模方法,诱导小鼠缓慢产生糖耐量异常,研究FGF-21对此类模型的糖代谢影响及肝糖代谢机制.通过检测FGF-21短期注射和长期注射后模型动物血糖的变化,研究FGF-21在模型动物上对血糖的调控效果.采用实时定量PCR检测FGF-21对模型动物肝脏中葡萄糖转运蛋白(GLUT)1、4 mRNA的表达影响.利用蒽酮法检测模型动物肝脏中糖原合成量.实验结果显示,FGF-21能够调节1型糖尿病动物的血糖水平,并呈剂量依赖性.同时,首次在1型糖尿病动物模型上证实了低剂量FGF-21(0.125 mg/kg)与胰岛素的协同作用效果优于相同剂量FGF-21和胰岛素单独注射的效果.治疗结果表明,FGF-21能够维持1型糖尿病动物模型血糖在正常范围,效果优于胰岛素.实时定量PCR结果发现,与胰岛素上调GLUT4 mRNA表达量不同的是,FGF-21作用动物模型8周后,GLUT1 mRNA表达量显著提高,长期的FGF-21与胰岛素协同注射使GLUT1、4 mRNA表达量同时显著提高.长期FGF-21与胰岛素协同注射组和高剂量FGF-21注射均可显著提高模型动物肝糖原的合成.结果表明,FGF-21促进动物模型糖代谢机制与增加GLUT1表达、增加糖原合成作用有关.为临床应用FGF-21治疗1型糖尿病,增加胰岛素敏感性提供了理论依据.

TGF-β1诱导CD90^+和CD90^-眼眶成纤维细胞亚群肌成纤维细胞转化的研究

目的依据培养的甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞是否表达CD90分为两个亚群,分离这两个细胞亚群,分别进行肌成纤维诱导,研究它们在眼外肌纤维化中所起的不同作用。方法免疫磁分离法分离CD90+和CD90-的眼眶成纤维细胞,TGF-β1诱导CD90+和CD90-成纤维细胞亚群转化为肌成纤维细胞(MFB),免疫细胞化学法检测代表MFB标志的平滑肌动蛋白α-SMA的表达情况。结果在TGF-β1的作用下,48 h后部分CD90+细胞开始出现α-SMA弱表达,4 d后大部分细胞呈阳性。CD90-细胞不表达α-SMA。结论CD90+与CD90-眼眶成纤维细胞具有不同的功能,CD90+细胞群具有转化为MFB的潜能,与眼外肌纤维化和细胞外基质积聚有关;CD90-成纤维细胞不能转化为MFB。