DNA2基因变异所致进行性眼肌麻痹伴线粒体DNA缺失症6型1例患儿的临床特征及遗传学分析

目的探讨1例常染色体显性遗传的进行性眼肌麻痹伴线粒体DNA缺失症6型(PEOA6)患儿的遗传学病因。方法选取2023年8月7日就诊于宁波大学附属妇女儿童医院的1例PEOA6患儿作为研究对象,回顾性分析患儿的临床资料。对患儿进行全外显子组测序(WES),并对候选变异进行Sanger测序家系验证。本研究通过宁波大学附属妇女儿童医院医学伦理委员会的审查(伦理号:EC2020-048)。结果患儿为7岁女性,表现为四肢肌肉痛、肌无力、血清肌酸激酶水平明显升高、先天性膈疝和反复呼吸道感染。WES检测提示患儿携带DNA2基因c.1590G>C(p.L530F)杂合错义变异,Sanger测序验证其为新发变异。根据美国医学遗传学和基因组学学会相关指南评级为可能致病性变异(PS2+PM2_Supporting+PP3)。结论DNA2基因c.1590G>C(p.L530F)新发变异可能是PEOA6患儿的遗传学病因。

新TMEM67基因突变致眼-脑-肝-肾综合征的诊断及家系研究

目的探讨眼-脑-肝-肾综合征(COACH综合征)的临床及家系特点。方法以1例COACH综合征患者(先证者)及其3代内家系成员作为研究对象,收集先证者的临床资料[包括病史、体格检查、肝功能、肝脏弹力纤维检测、眼部学相干断层成像(OCT)检查、颅脑磁共振成像(MRI)检查等]及其3代内家系成员的病史及体格检查,分别取先证者及其3代内家系成员外周血各2 mL,采用全外显子组捕获测序技术进行基因测序。结果先证者有智力发育落后、并趾畸形、先天性肝纤维化(CHF)、眼部视网膜外层结构缺损,MRI呈现典型的“磨牙征”和“蝙蝠征”;先证者大舅幼年发热后出现智力发育落后,余家属无类似症状;基因测序检测出先证者8号染色体跨膜蛋白67基因(TMEM67)c.725A>G(p.N242S)和c.1288+1G>A(splicing)双重杂合突变,其中c.725A>G(p.N242S)突变为父系遗传、为已有报道的突变,c.1288+1G>A(splicing)突变为母系遗传、为新发现的致病突变。结论确诊患儿为COACH综合征,并诊断其家系遗传特点为常染色体隐性遗传,同时检测出COACH综合征新TMEM67突变位点。

Eya3通过Hippo信号通路调控胶质瘤细胞化疗耐药的研究

目的探讨眼缺失同源物3(eyes absent homolog 3,Eya3)蛋白是否通过调控Hippo通路进而影响胶质瘤细胞的化疗耐药。方法应用免疫组化及Western blotting检测Eya3在胶质瘤组织及细胞中的表达水平;MTT实验检测过表达或沉默Eya3对U87细胞化疗耐药性的影响;3D成球及迁移/侵袭实验分别检测过表达或沉默Eya3对U87细胞干性及迁移/侵袭能力的影响。采用Western blotting实验检测Eya3对Hippo通路磷酸化的影响;染色质免疫共沉淀实验检测Sox2和Slug基因转录水平。结果Eya3在胶质瘤组织和细胞中高表达。过表达Eya3的U87细胞耐药性、干性及迁移/侵袭能力显著增强,沉默Eya3则反之。Eya3抑制Hippo通路磷酸化并促进YAP入核,入核增加的YAP增强Sox2和Slug基因转录。结论Eya3通过调控Hippo通路活性影响胶质瘤细胞的化疗耐药。

EYA4通过抑制NF-κB依赖的RAP1反式激活抑制肝细胞癌的生长和侵袭

背景与目的我们之前研究表明,眼缺失蛋白同源物4(eyes absent homolog 4,EYA4)是果蝇眼部发育相关的眼缺乏蛋白家族成员之一,在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)标本中常发生甲基化和沉默,并与患者生存期短密切相关。本研究旨在探讨EYA4在HCC中作为肿瘤抑制因子的作用机制。方法转染EYA4表达质粒(pEYA4)构建稳定表达EYA4的人HCC细胞系Huh-7和PLC/PRF/5(PLC)。通过BALB/c裸鼠皮下注射稳定转染细胞建立异种移植肿瘤。组织标本来自75例病理诊断为HCC的患者。采用实时定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)、蛋白质免疫印迹和免疫组织化学的方法检测EYA4在细胞系、异种移植物和临床标本中的表达;研究了稳定转染细胞系的细胞增殖、克隆形成、侵袭性和肿瘤形成。利用基因表达芯片筛选EYA4调节的基因。通过共转染EYA4和带Flag标签的RAS相关蛋白1A(RAS-related protein 1A,RAP1A)基因的表达质粒(pEYA4和Flag-RAP1A)、功能研究、染色质免疫共沉淀、免疫荧光染色和细胞泛素化分析等方法,研究了EYA4对核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)/RAS相关蛋白1(RAS-related protein 1,RAP1)信号通路的影响。结果恢复HCC细胞系中EYA4的表达可抑制细胞的增殖、抑制克隆形成、降低细胞的侵袭性和抑制异种移植肿瘤生长,在体外实验中Flag-RAP1A可逆转pEYA4的抑制作用。用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)激活NF-κB通路可增加p65与RAP1A基因启动子的结合并上调RAP1蛋白的表达。用BAY 11-7085和p65 siRNA抑制NF-κB通路,成功阻断了TNF-α诱导的RAP1上调。EYA4拮抗了TNF-α诱导的NF-κB抑制因子α(inhibitor of NF-κBα,IκBα)的磷酸化和泛素化以及p65的核易位和反式激活,进而抑制了NF-κB的活性和RAP1的表达。用calyculin A阻断EYA4的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶活性可显著消除其对NF-κB活性的抑制作用。此外,EYA4的表达与HCC临床标本中IκBα/RAP1活性呈负相关。结论我们的研究结果为明确EYA4是真正的肿瘤抑制因子提供了功能和机制的理论基础,该肿瘤抑制因子可抑制NF-κB/RAP1信号通路的异常激活,从而抑制HCC生长和侵袭。

DIODE LASER CYCLO-ABLATION IN SIL- ICONE OIL GLAUCOMA

Ciliary body ablation with the diode laser is well established as a treatment for neovascular and other refractory glaucomas. Glaucoma secondary to intra-ocular silicone oil for vitreo-retinal surgery is one such glaucoma that can be difficult to control. We reviewed a series of cases where cyclodiode laser is applied for silicone oil-induced glaucoma and demonstrate that it is