细胞外基质蛋白和转化生长因子β_2共同作用诱导人视网膜色素上皮细胞向肌纤维母细胞转化

目的了解转化生长因子β2(TGFβ2)和细胞外基质(ECM)调节人胚胎视网膜色素上皮(hfRPE)细胞向肌纤维母细胞分化的作用,确定这种调节的信号传导机制。方法hfRPE细胞培养于由ECM包被或未包被的培养皿上,培养液中加入或不加入TGFβ2,用免疫组织化学、流式细胞仪、蛋白印迹技术检测α-平滑肌机动蛋白(α-SMA)的表达。在培养液中分别加入calphostinC,染料木黄铜(genistein),PD98059和渥曼青霉素(Wortmannin),测定α-SMA的表达。结果hfRPE细胞培养于ECM包被的培养板上,培养液中加入TGFβ2后,出现明显的形态学改变,包括细胞伸展变长,可见肌动蛋白微丝的形态。流式细胞仪及免疫细胞化学检测结果显示,培养液中加入TGFβ2可明显增加α-SMA的表达,并与剂量成正相关。当TGFβ2的刺激浓度为50ng/ml时,与培养于未包被的培养板上的hfRPE细胞相比,用纤维连接蛋白(FN)包被培养板后,总的平均荧光强度(TMFI)增加(38.01±1.14)%(P<0.05)。蛋白印迹技术检测显示同样的结果。而上述效应可以大部分被蛋白激酶C(PKC)通路抑制剂calphostinC(10nmol/L)抑制(P<0.01)。结论TGFβ2可诱导hfRPE细胞向肌纤维母细胞转化,并与其剂量成正相关,这种作用可被FN加强。TGFβ2和ECM的这种调节作用可能是通过PKC细胞内信号传导通路而发挥作用。