小鼠外周血和胚胎着床位点中骨髓来源内皮祖细胞在不同妊娠时期的分布和变化规律

目的探究小鼠外周血和胚胎着床位点骨髓来源内皮祖细胞(endothelialprogenitor cell,EPC)在不同妊娠时期的分布和变化规律。方法利用5-氟尿嘧啶(5-FU)制备非性腺毒性骨髓抑制小鼠模型并测定其外周血白细胞(WBC)、血小板(PLT)变化以确定小鼠模型建立成功与否,用内皮细胞特异性酪氨酸激酶-2启动子调控下表达绿色荧光蛋白基因(Tie2-GFP)小鼠作为供体并用荧光显微镜观察外周血中有无GFP表达以确定骨髓移植成功与否,将其骨髓移植给骨髓抑制模型小鼠,ELISA方法检测不同妊娠时期外周血血管内皮生长因子(VEGF)含量变化,流式细胞仪测定不同妊娠时期外周血和子宫胚胎着床部位的含量,Pearson相关性分析比较外周血VEGF与骨髓来源EPCs的关系,免疫荧光组织化学染色来观察妊娠不同时间时骨髓来源EPCs在子宫脱膜层血管上的分布。结果小鼠外周血VEGF和EPCs含量在妊娠前期时达到顶点然后逐渐下降,且小鼠外周血VEGF含量与EPCs含量正相关;小鼠胚胎着床位点EPCs含量随着妊娠过程先升高再下降,在妊娠中期达到顶点;妊娠前,在胚胎着床位点EPCs分布较为分散,在妊娠过程中,妊娠前期组外周血VEGF含量均高于未受孕组、妊娠中期组、妊娠晚期组和产后组(P<0.05);妊娠前期组外周血骨髓来源EPCs含量均高于未受孕组、妊娠中期组、妊娠晚期组和产后组(P<0.05);妊娠期小鼠外周血VEGF含量和骨髓来源EPCs含量呈正相关(r=0.421,P=0.002);妊娠前期组、妊娠中期组小鼠胚胎着床位点骨髓来源EPCs含量均高于未受孕组(P<0.05);未受孕组EPCs分布较为分散,而妊娠前期组、妊娠中期组、妊娠晚期组和产后组EPCs分布开始集中且主要分布于血管上皮细胞周围。结论在外周血VEGF含量与EPCs含量正相关,在外周血和胚胎着床位点EPCs含量的变化与小鼠妊娠期的发展有着紧密的关系,EPCs在胚胎着床位点的分布在小鼠妊娠的不同时期也有所不同,EPCs有潜力作为未来监测妊娠期生理状况的指标。

小鼠胚泡着床相关基因的差减筛选

目的:筛选新的小鼠胚泡着床相关基因。方法:对孕4.5 d小鼠着床和非着床位点的子宫内膜组织进行PCR差减。获得了2个新的在小鼠胚泡着床位点高表达的EST(EST8和EST81)。结果:EST8在孕4.5 d小鼠着床位点、肝脏中表达较高,在非着床位点和卵巢中亦有微量表达。EST81主要在孕4.5 d小鼠子宫着床组织和卵巢中表达,其它各种组织中也有微量表达。用PCR方法获得了相应的全长。cDNA,长度分别为1665bp和1364bp。结论:用差减筛选获得的两种cDNA是孕小鼠着床相关基因,其功能有待进一步研究。

Wnt3a在小鼠孤雌胚胎及正常胚胎早期着床部位的表达变化

目的研究小鼠孤雌激活胚胎和体内正常发育胚胎在子宫中发生着床过程时,在早期着床部位上Wnt3a信号分子的表达变化。方法运用免疫组织化学染色法比较受体子宫中的孤雌胚胎着床位点和体内正常发育胚胎着床位点上Wnt3a的表达状况。结果免疫组织化学染色结果发现:(1)在着床期怀孕第5.5天和6.5天,受体子宫中孤雌胚胎的着床位点处和体内正常发育胚胎的着床位点处,Wnt3a在两种子宫上的表达情况相似,而在两种胚胎上的表达情况不同;(2)Wnt3a信号在空怀假孕母鼠子宫上表达情况与相同怀孕期有正常胚胎着床的子宫上的表达情况相似。结论胚胎着床与否及胚胎正常与否均不影响Wnt3a在小鼠早期着床期子宫上的表达,但在怀孕第5.5天和6.5天时孤雌激活胚胎和体内正常发育胚胎上Wnt3a的表达有差异。