DPPA2/DPPA4在牛着床前胚胎发育过程中的作用及机制

多能发育相关因子2和4(developmental pluripotency-associated 2 and 4,DPPA2/DPPA4)是激活类2细胞期胚胎干细胞(2-cell-like embryonic stem cells,2CL ESCs)基因组的重要调控因子,同时调控胚胎干细胞的增殖。DPPA2/DPPA4在牛早期胚胎发育过程中的功能和机制尚不清楚。本研究利用RNA干扰技术结合胚胎显微注射技术敲低牛胚胎中的DPPA2/DPPA4后发现,与阴性对照组相比,敲低组中牛胚胎的8—16细胞阶段卵裂率和囊胚阶段囊胚率无显著差异,但是囊胚总细胞数、滋养层细胞数和内细胞团细胞数均显著减少(P<0.001、P<0.05、P<0.01)。进一步通过RNA测序(RNA-sequencing,RNA-Seq)分析发现,与阴性对照组相比,敲低组的晚期桑葚胚中,NOTCH信号通路的核心转录因子RBPJ(recombination signal binding protein gene for immunoglobulin kappa J region)的表达量显著下调(P<0.05),而本课题组前期实验证明,RBPJ敲低会导致牛早期胚胎的囊胚质量严重受损。本研究结果揭示了DPPA2/DPPA4在牛着床前胚胎发育中可能通过调节RBPJ的表达来影响细胞增殖。

瘦素对小鼠着床前胚胎发育影响的体外研究

目的 探讨瘦素在体外对小鼠着床前胚胎发育的影响。方法 1收集小鼠 2 -细胞胚胎 ,在不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎发育情况 ,并进行胚胎移植 ,观察着床率 ;2收集小鼠 2 -细胞胚胎在空白 CZB培养液中体外培养至桑葚胚期 ,再分别置入不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎进一步发育情况。结果 瘦素能提高 2 -细胞胚胎体外发育的质量、发育率和胚胎着床率。当瘦素剂量为 10 ng/ ml时平均胚胎形态学评分 (AES)为 16 .0 8± 0 .37,剂量为 5 0 ng/ ml时 AES为 17.5 7± 0 .4 2 ,两者间差别有统计学意义(P<0 .0 5 )。但剂量进一步增加 ,促进作用不再递增。瘦素对桑葚胚体外进一步发育无显著影响。结论 瘦素参与了小鼠着床前胚胎的发育 ,能提高胚胎发育质量、发育率 ,有利于胚胎的进一步着床。

盐酸西部曲明对小鼠生殖力和着床前后胚胎发育的影响

目的 评价减肥新药盐酸西部曲明对♀亲代动物的生殖毒性和受精卵着床前的发育毒性。方法 持续饮水内给药 ,♂小鼠交配前给药 8周并持续给药至交配成功处死之前 ;♀小鼠交配前给药 2周并持续给药至妊娠d6。设 32、2 83、0 .2 5mg·kg-1·d-13个剂量组及 1个阴性对照组 ,观察亲代动物的一般状况、交配、受孕和妊娠 ,胎仔的着床、存活、体长、体重、外观、内脏和骨骼畸形等检测指标。结果 除相当于人预期摄入量 12 8倍的高剂量引起了亲代雄鼠体重减轻外 ,亲代和子代小鼠均未见其他毒性反应。结论 未见盐酸西部曲明对亲代有生殖毒性和对子代有发育毒性。

HLA-G蛋白在人类着床前胚胎的表达

目的:探讨HLA-G在人类胚胎早期发育和免疫耐受中的作用和意义。方法:以体外受精-胚胎移植技术助孕过程中剩余的、自愿捐赠的人类早期胚胎作为研究对象,采用免疫荧光染色技术,检测人类着床前胚胎HLA-G蛋白的表达。结果:采用MEM-G/9单抗进行了HLA-G免疫荧光染色,20个2-8-细胞期的人类早期胚胎中15个胚胎HLA-G蛋白检测阳性;3个桑椹胚和5个囊胚均为阳性。结论:着床前人类早期胚胎表达HLA-G蛋白。

地中海贫血胚胎着床前行遗传学诊断2例报告

目的探讨胚胎着床前遗传学诊断技术（PGD）阻断地中海贫血向下一代遗传的有效性。方法采用常规黄体期长方案促排卵,用卵胞浆内单精子显微注射法授精,第5天或第6天对囊胚活检3~5个细胞后进行冷冻保存,活检细胞采用PCR及反向斑点杂交技术进行β-地中海贫血的遗传学检测。结果根据PGD结果及胚胎质量,对2例患者的可移植囊胚进行解冻并进行移植,均获得了临床妊娠;孕期抽取绒毛或羊水进行产前诊断,其结果与PGD的结果一致。结论 PGD是阻断地中海贫血向下一代遗传的有效手段。

小鼠着床前胚胎发育中调控因子的时序表达及功能

哺乳动物着床前胚胎发育最基本的问题之一是高度分化的卵母细胞如何过渡到全能性的卵裂球。这一转换过程受到了多种调控因子正或负的调控作用,这些特定调控因子在着床前胚胎发育过程中呈现出较为显著的时空表达特征,它们对早期胚胎的进一步正常发育有重要的作用。研究这些调控因子在着床前胚胎发育中的表达模式和调控机制,将有助于我们对早期胚胎发育机制的进一步了解。作者主要对近些年来有关生长因子与细胞因子（如:PAF、IL-1、IGF、MIF）以及特定转录因子（如:SP1、TBP、mTEF、eIF、myc、c-jun等）在小鼠着床前胚胎发育中的时空表达及其相应功能的研究做一简要介绍。

环境污染物对着床前小鼠胚胎的DNA甲基转移酶活性的影响

目的探讨环境污染物对着床前小鼠胚胎发育的直接影响,以及对基因组DNA甲基化的影响。方法着床前小鼠1细胞期胚被放入含有不同的环境污染物的培养液中进行体外培养;观察1细胞期胚发育至胚泡期胚的发育率;测定胚泡期胚的DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase)活性。结果小鼠胚胎着床前期在含有环境污染物的培养液里发育的过程中,其形态没有发生显著的异常变化,各实验组的胚胎发育率在61%～67%。然而,DNA甲基转移酶活性应环境污染物种类而异发生不同变化。与对照组相比,二英2,3,7,8tetrachlorodibenzopdioxin(TCDD)使着床前胚的DNA甲基转移酶活性显著升高;而二乙烯二苯乙烯雌酚Diethylstilbestrol(DES)和多氯联苯中的2,2′,3,3′4,4′polychlorinatedbiphenyl(PCB153)使着床前胚的DNA甲基转移酶活性显著下降。不过,二氯联苯二氯乙烯p,p′dichlorodiphenelethylene(DDE)和苯二甲酸二丁酯dibutylphthalate(DBP)对着床前胚的甲基转移酶活性的影响未达到统计显著水平。结论环境污染物可在体外培养中对着床前胚DNA甲基转移酶活性产生作用,进而可能影响基因组甲基化模式的变化。

小鼠胚着床前线粒体的分布和超微结构变化

为了解小鼠胚着床前细胞中线粒体的分布和超微结构的变化规律，观察了２细胞胚、４细胞胚、８细胞胚、桑椹胚、早期囊胚和晚期囊胚。２细胞期和桑椹胚期，线粒体绕胞核密集，在挤紧的８细胞胚中，线粒体在细胞接触面处的胞质边缘密集。囊胚期，滋养层细胞的线粒体在胞核周围较宽的区域中分布。囊胚经罗丹明１２３染色后，在荧光显微镜下显现为颗粒状。挤紧的８细胞胚，经秋水仙素（１０ｍｇ／Ｌ）处理后，线粒体在胞质中变为弥散分布。电镜下可见从受精卵至４细胞期，线粒体呈球形、无嵴、中央有低电子密度区。８细胞期，线粒体呈球形或圆形，内部出现嵴。桑椹期至囊胚期，线粒体变长，呈杆状。

锗与镉对小鼠着床前胚胎细胞微核的影响

锗与镉对小鼠着床前胚胎细胞微核的影响李莲姬，崔山田，．韩春姬，李永烈，吴国用钢是常见的金属环境污染物之一。钢具有高度生物活性，半衰期长和毒性强的金属元素，有致癌、致畸和致突变作用。动物实验证明，将钢经不同途径投予妊娠的哺乳动物，可引起胚胎吸收，死亡和...

应用荧光原位杂交技术(FISH)对罗伯逊易位携带者进行胚胎着床前遗传学诊断

目的用FISH对罗伯逊易位携带夫妇行胚胎着床前遗传学诊断,选择正常/平衡核型的胚胎移植。方法对14例罗伯逊易位携带者(男性9例,女性5例)行IVF/ET/PGD共15周期。9例男性和2例女性罗伯逊易位携带者体外受精后第3天卵裂球活检,3例女性携带者极体活检或极体活检加卵裂球活检;用特异位点探针或全染色体涂抹探针荧光原位杂交,选择信号正常或平衡的胚胎移植。结果15个PGD周期,共活检胚胎或MII卵母细胞120枚;取出卵裂球120个、第一极体18个,固定成功率92·8%(128/138);杂交成功率为96·1%(123/128)。活检后胚胎继续发育69·2%(83/120);15例PGD周期中,移植13例;6例获得妊娠(6/13);其中女性携带者妊娠4例(4/4),男性携带者妊娠2例(2/9),二者差异具有显著性(P<0·05)。结论1.对存在不孕因素的罗伯逊易位携带者做胚胎着床前遗传学诊断,选出正常/平衡核型的胚胎移植可有较好的临床预后。2.对女性罗伯逊易位携带者可首选极体活检,使患者有机会避免罗伯逊易位携带者出生。

缺氧诱导因子1和缺氧诱导因子2在人类着床前胚胎的表达

目的研究缺氧诱导因子1(HIF-1)和缺氧诱导因子2(HIF-2)在人类着床前胚胎各个阶段的表达,探讨这两个氧调节基因在人类早期胚胎发育过程中的作用和意义。方法收集不育症患者捐赠的胚胎,采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR分别定性和定量在5%和20%O2条件下体外培养的人胚胎的HIF-1α和HIF-2αmRNA。采用免疫荧光染色检测人胚胎的HIF-1α和HIF-2α蛋白。结果巢式RT-PCR分别检测了5%和20%O2体外培养的2、4、6、8细胞胚胎和囊胚发现,所有34个胚胎均表达HIF-1α和HIF-2αmRNA。实时荧光定量PCR5%O2培养的人囊胚HIF-1α与18SrRNA的Ct比值为(1.22±0.05);20%O2培养的人囊胚,这一比值是(1.02±0.07);两者比较差异显著(P<0.05)。人胚胎在体外常氧培养条件下的HIF-1αmRNA水平显著高于低氧培养。5%O2培养的人囊胚HIF-2α与18SrRNA的Ct的比值为(1.29±0.04);20%O2培养的人囊胚,这一比值是(1.19±0.11);两者比较无显著差异(P>0.05)。人胚胎在体外低氧培养条件下的HIF-2αmRNA水平与常氧培养无显著差异。5%和20%O2体外培养的2、4、6、8细胞,各个发育阶段人胚胎的HIF-1α和HIF-2α免疫荧光染色均阳性。结论研究结果显示人类着床前胚胎在体外常氧和低氧培养时均表达HIF-1α和HIF-2α。二者可能通过广泛的靶基因系统参与早期胚胎的生长发育和着床过程,在早期胚胎的调控可能不在转录水平,而在转录后水平。

哺乳动物胚胎着床前的基因表达与调控

综述近年来哺乳动物胚胎着床前这一发育阶段基因表达与调控的研究进展。早期胚胎发育受母源型 ,即卵母细胞内 m RNA和蛋白质的调控 ,随着母型 m RNA的消耗 ,合子型基因取而代之进行合子型调控 ;其中合子型基因激活是调控过渡的关键事件。

着床前胚胎遗传学诊断的进展

着床前胚胎遗传学诊断(PGD)于90年代初确立,该技术使遗传病的诊断提前至胚胎着床前,不仅避免了流产术,也使早期基因治疗成为可能。PGD材料可来自极体、卵裂球或胚泡,PCR和FISH是PGD中使用的二种主要分析技术。PGD目前应用于性别、单基因病和染色体病的诊断。PGD有一定的误诊率,未来的目标是提高其准确件和有效性。

建立鼠胚着床前诊断模型的初步研究

目前严重的先天出生缺陷影响与威胁着１３．０７‰的新生儿，其中大部分是遗传病。产前诊断作为预防出生缺陷的手段对优生起着重要作用。但也不能忽视妊娠早期作出诊断，尤其是采用人工授精（ａｒｔｉｆｉｃｉａｌｉｎｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ，ＡＩ）辅助妊娠的夫妇。国外在...

哺乳动物着床前胚胎的体外培养营养体系的研究

胚胎的体外培养是哺乳动物胚胎工程的基础环节。近年来,为了克服胚胎体外发育所存在的缺陷,国内外对不同动物胚胎的体外发育所需营养进行了系统的研究,大力地推动了胚胎体外生产的进程,对保护濒危野生动物种质资源也具有重要的意义。本文就哺乳动物着床前胚胎体外发育培养液中的重要成分进行了分析。

母鼠有机磷农药暴露对着床前期小鼠胚胎的细胞遗传学及生长发育的影响(英文)

[目的 ]研究妊娠初期有机磷农药暴露对母体生殖功能 ,对子代细胞遗传学及生长发育的影响。 [方法 ]以有机磷农药敌百虫为受试物 ,以着床期胚胎为研究对象 ,以反映染色体异常的微核形成和反映胚胎生长发育状况的构成细胞数为指标。孕鼠腹腔注射 10 0或 2 0 0mg/kg剂量的敌百虫溶液 ,3d后 ,在体视显微镜下从其子宫中取出胚胎 ,进行其形态学分析 ,微核试验及胚胎构成细胞数的分析。 [结果 ]敌百虫暴露组的胚胎微核发生率明显高于对照组 ,分别为 2 0 0mg/kg暴露组为16 9% ,10 0mg/kg暴露组 16.1% ,对照组为 5 .3 % ,并有明显的剂量 反应关系。此外 ,母鼠暴露于敌百虫 ,可造成子代生长发育迟缓 ,表现为胚胎构成细胞数明显下降 ( 2 0 0mg/kg组 44 .1,对照组 5 4.7)。 [结论 ]妊娠初期有机磷农药暴露对着床前期胚胎的细胞遗传学及生长发育有明显影响。着床前期小鼠胚胎的微核试验是评价母体早期暴露有机磷农药导致子代细胞遗传学改变的简便、灵敏的指标 ,本结果为进一步对着床后胚胎的研究 。

哺乳动物胚胎着床前发育及外源性化学物质引起的损伤

哺乳动物自受精至着床这一发育阶段日益受到重视。本文综述了哺乳动物胚胎着床前发育状况，包括胚胎早期细胞形态学改变、胚胎早期发育的调控过渡和基因编码产物，以及胚胎着床前因外源性化学物质引起的损伤和常用检测方法等方面的研究进展。

牛卵母细胞及着床前胚胎发育的蛋白质组学研究进展

蛋白质组学作为一种能够全景式展示特定生物学过程的蛋白质表达谱的高通量研究手段,正被应用到越来越多的研究领域。牛的卵子发生以及着床前胚胎的生长发育都离不开蛋白质的一系列变化,通过蛋白质组学的研究手段可对牛卵母细胞成熟以及胚胎发育分子机制进行研究。前人通过构建成熟前后的卵母细胞或不同时期的着床前胚胎等的蛋白质组表达谱,来获得与卵母细胞成熟相关的标志蛋白,并对这些标志物进行验证和分析,将有利于理解牛卵母细胞成熟、体外受精及着床前胚胎发育的分子机制,为提高牛卵母细胞的成熟率以及胚胎的发育率及提高牛繁殖率等奠定基础。主要从双向聚丙烯酰胺凝胶电泳、色谱技术以及质谱技术等蛋白质组学研究手段为切入点,对蛋白质组学在牛卵母细胞和着床前胚胎发育过程中的研究进展进行综述,为进一步研究牛卵母细胞及附植前胚胎提供参考。