米非司酮混悬液灌胃制备小鼠不完全型胚胎着床障碍模型的适宜剂量选择

目的选择米非司酮混悬液制备小鼠不完全型胚胎着床障碍(EID)模型的适宜剂量。方法将32只昆明雌性小鼠随机分为4组,每组8只,低剂量组、中剂量组、高剂量组于妊娠第4天分别灌胃给予0.12、0.14、0.16 mL米非司酮混悬液(1 mg/mL)制备不完全型EID模型,对照组给予适量生理盐水,于妊娠第8天处死小鼠,采用ELLSA法检测血清雌二醇(E_(2))、孕酮(P),肉眼观察子宫形态,计算妊娠率及胚胎着床数,HE染色观察子宫内膜组织,免疫组化法检测子宫内膜组织孕激素受体(PR)。结果各组血清E_(2)、P水平比较,P均>0.05。对照组全部妊娠,双侧子宫均匀增大,子宫血供丰富,胚胎着床点分布紧密且无出血点,胚胎发育良好;低剂量组全部妊娠,双侧子宫外观形态及胚胎发育无异常,子宫血供较对照组差;中剂量组全部妊娠,两侧子宫胚胎着床点分布不规则,部分胚胎着床处有积血,胚胎体积小,未着床处的子宫较细,颜色苍白,血供不佳;高剂量组仅有1只妊娠,双侧子宫形态规则,颜色苍白,血供较差,双侧子宫弹性差。高剂量组妊娠率低于其他3组,P均<0.05。与低剂量组、对照组比较,中剂量组、高剂量组胚胎着床数少(P均<0.05);与中剂量组,高剂量组胚胎着床数少(P<0.05)。对照组子宫内膜间质广泛蜕膜化反应,腺体数量多,腺腔面积大,腺腔内含有分泌物,小血管增生;低剂量组子宫内膜间质蜕膜明显,腺体数量多;中剂量组子宫内膜有蜕膜化改变,间质较致密,腺体较少而小,血管扩张不明显;高剂量组子宫内膜间质区蜕膜化不完全,腺体小而少,分泌不足,内膜间质致密,仍呈增生期样改变,发育明显滞后。与对照组和低剂量组比较,中剂量组、高剂量组PR AOD减少(P均<0.05);与中剂量组比较,高剂量组PR AOD减少(P<0.05)。结论米非司酮制备小鼠不完全型EID模型稳定可靠,适宜剂量为0.16 mL/只(1 mg/mL)。

小鼠胚泡着床障碍模型的建立

目的 建立小鼠胚泡着床障碍动物模型。方法 ①将成年雌性昆明小鼠交配后随机分为对照组和实验组 ,于妊娠d 4实验组于皮下注射不同浓度的米非司酮 ,于妊娠d 8观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数 ,筛选最佳造模剂量。②选用 0 0 8mg·只 -1米非司酮造模 ,采用放免法检测对照组和模型组的血清及子宫组织雌二醇、孕酮的含量 ,利用光镜和电镜观察子宫内膜及卵巢的形态结构。结果 ①当米非司酮的剂量达 0 0 8mg·只 -1以上时 ,着床率和平均着床胚泡数均降低。②与对照组相比 ,模型组子宫内膜的发育明显受抑制 ,而血清及子宫组织的雌二醇和孕酮的含量、卵巢的形态结构均无改变。结论 于妊娠d 4皮下注射米非司酮 0 0 8mg·只 -1,可复制机制明确。

对两种胚泡着床障碍小鼠模型围着床期子宫内膜形态结构的比较研究

目的比较研究米非司酮、吲哚美辛诱导的两种胚泡着床障碍小鼠模型围着床期子宫内膜形态结构。方法将成年♀昆明小鼠交配后随机分为对照组、米非司酮组和吲哚美辛组,于妊娠d8观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,利用光镜和电镜观察子宫内膜的形态结构。结果与对照组相比,米非司酮组和吲哚美辛组其着床率和平均着床胚泡数均降低;米非司酮模型小鼠子宫内膜的发育明显受抑制,吲哚美辛模型小鼠子宫内膜的血管形成受阻。结论米非司酮和吲哚美辛通过对围着床期子宫内膜形态结构不同的影响而复制小鼠胚泡着床障碍模型。

中药助孕方对促排卵和胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的影响

目的研究中药助孕方对促排卵(OS)和胚泡着床障碍(BID)小鼠子宫内膜容受性的影响及其潜在机制。方法 200只正常雌性昆明小鼠,随机分为A组(对照组)、B组(OS)、C组(OS加中药助孕方)、D组(BID)、E组(BID加中药助孕方)、F组(中药助孕方)。OS组腹腔内注射孕马血清促性腺素和人绒毛膜促性腺素(HCG),BID组于妊娠第4天9:00皮下注射米非司酮。3个中药组于妊娠第1-4天8:00灌胃中药1.5mL/100g。妊娠第4天21:00每组取出8只子宫标本固定,运用免疫组化的方法测定标本中白血病抑制因子(LIF)和整合素β3的表达水平。妊娠第8天21:30处死各组妊娠小鼠,取出子宫,计数胚泡数。结果 B组和D组的妊娠率(6.67%,1/15、18.75%,3/16),LIF蛋白OD值(0.18±0.02、0.23±0.02),整合素β3蛋白OD值(0.20±0.05、0.19±0.02),与A组比较差异有统计学意义(P<0.01)。C组和E组的妊娠率(54.55%,12/22、65.22%,15/23),LIF蛋白OD值(0.37±0.09、0.39±0.02),整合素β3蛋白OD值(0.34±0.04、0.38±0.08)分别与B组和D组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 OS和BID对小鼠子宫内膜容受性有负面影响,阻碍胚泡植入。中药助孕方可以通过上调LIF和整合素β3的表达来改善子宫内膜容受性,提高妊娠率。

针刺对胚泡着床障碍大鼠胚泡着床及发育的影响

目的:探讨针刺提高辅助生殖技术成功率的作用机制。方法:将孕鼠随机分为正常组、模型组及针刺组。模型组和针刺组均采用米非司酮造模,针刺组自妊娠第1天连续接受1w针刺治疗。观察各组大鼠妊娠率及平均着床胚泡数,比较其子宫、卵巢重量及单个胚泡大小、重量的差异;并用光镜观察各组大鼠子宫内膜及卵巢的形态结构差异。结果:针刺组妊娠率及平均着床胚泡数较模型组显著提高(P<0.01);模型组子宫、卵巢重量等均较正常组及针刺组轻,且子宫内膜发育不良;针刺组子宫内膜发育与正常组相似。结论:针刺可在一定程度上逆转米非司酮抗着床的作用,促进大鼠胚泡着床及胚泡发育。

补肾安胎方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜HB-EGF及其受体EGFR表达的影响

目的观察中药补肾安胎方对胚泡着床障碍模型小鼠胚泡着床情况及对类肝素结合样表皮生长因子(HB-EGF)及其受体(EGFR)表达的影响。方法将妊娠雌鼠随机分为正常组、模型组、中药组,每组30只,分别于妊娠第5、6天(Pd5、6)用伊文思蓝尾静脉注射后取妊娠子宫。观察妊娠第5天(Pd5)各组对伊文思蓝的着色反应;运用RT-PCR方法检测HB-EGFmRNA的含量,采用免疫组织化学法测定HB-EGF及其受体EGFR的表达。结果Pd5,模型组对伊文思蓝反应和平均反应点数显著低于正常组,中药组与模型组有显著差异。Pd5、6,模型组子宫内膜HB-EGF及其受体EGFR的表达在时间上明显滞后于正常组并且表达量减少,中药组与模型组有显著差异(P<0.05)。结论补肾安胎方改善胚泡着床障碍小鼠胚胎着床可能与提高着床位点的HB-EGF及其受体EGFR的表达有关。

补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体凋亡的影响

目的观察补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体凋亡的影响。方法复制小鼠胚泡着床障碍模型,分为对照组、模型组和治疗组,每组30只。观察小鼠妊娠率和着床胚泡数,分析子宫内膜腺体的凋亡情况,检测子宫内膜腺体的增殖细胞核抗原(PCNA)、bax、bcl-2和激活型Caspase-3蛋白表达情况。结果模型组妊娠率和平均着床胚泡数均显著降低,治疗组两者均较模型组显著提高(P<0.05或P<0.01)。模型组子宫内膜腺体增殖指数(PI)明显高于对照组(P<0.01),而凋亡指数(AI)则明显低于对照组(P<0.05);治疗组与模型组比较,腺体PI明显降低而AI明显增高(P<0.01),两者与对照组比较差异均无统计学意义。模型组子宫内膜腺体中bax和激活型Caspase-3蛋白显著低于对照组(P<0.01);治疗组两者则显著高于模型组(P<0.01);治疗组与对照组差异无统计学意义。结论促进子宫内膜腺体中bax蛋白的表达和Caspase-3的激活,调节植入窗期腺体细胞增殖和凋亡的平衡,可能是补肾益气和血方促进子宫内膜接受性建立和改善胚泡着床障碍的机制之一。

调经助孕胶囊对着床障碍小鼠胚泡着床位点数和雌、孕激素及其受体的影响

目的:研究调经助孕胶囊对着床障碍小鼠胚泡着床位点数和雌、孕激素及其受体(ER、PR)的影响。方法:将48只妊娠小鼠随机分为正常对照组(生理盐水)、病理模型组(生理盐水)与调经助孕胶囊组(24 g/kg),每组16只,ig给药,每天1次,连续3 d。第4天上午9:00,除正常对照组小鼠外,剩余小鼠均sc米非司酮溶液0.1 ml复制着床障碍模型。第5天处死小鼠,观察各组小鼠胚泡着床位点数;放射免疫法测定血清雌二醇(E_2)、孕酮(P)水平;免疫组化法测定子宫内膜ER、PR蛋白表达水平。结果:妊娠第5天,病理模型组小鼠胚泡着床位点数显著少于正常对照组,血清E_2、P水平与子宫内膜ER、PR蛋白表达水平均显著低于正常对照组(P<0.05);调经助孕胶囊组小鼠胚泡着床位点数显著多于病理模型组,血清E_2、P水平与子宫内膜ER、PR水平均显著高于病理模型组(P<0.05)。结论:调经助孕胶囊可显著提高小鼠血清E_2、P水平和ER、PR水平,增加胚泡着床位点数。

应用正交设计探讨肾虚胚胎着床障碍小鼠病症结合模型制作中药物的最佳配比

目的探索羟基脲及米非司酮在肾虚胚胎着床障碍小鼠病症结合模型制作中的最佳配比。方法以羟基脲、米非司酮作为影响因素,选择L9(34)表安排实验,观察羟基脲及米非司酮不同剂量配比组合对小鼠肾虚胚胎着床障碍模型的影响。结果研究范围内,当羟基脲因素A取1水平、米非司酮因素B取1水平时(AⅠBⅠ),妊娠第5天、第8天时子宫内胚胎着床点数、子宫指数是最少的。在肾虚胚胎着床障碍小鼠模型的制作中,米非司酮的贡献度最大,羟基脲的贡献度次之,一定程度上,胚胎的着床点和子宫指数与羟基脲和米非司酮的用量成反比。结论综合多项指标,在研究范围内,AⅠBⅠ较为合适作为肾虚胚胎着床障碍小鼠模型用于药物干预研究。

补肾固黄汤改善胚泡着床障碍小鼠子宫内膜组织形态的实验研究

目的观察中药补肾固黄汤对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜组织学形态的影响。方法将45只雌性昆明小鼠随机分为中药组、模型组、正常组。中药组在孕前预防性行补肾固黄汤灌胃2次,孕后每天灌服补肾固黄汤;其余两组给予等体积生理盐水。妊娠第4天中药组、模型组皮下注射米非司酮溶液造成小鼠胚泡着床障碍。妊娠第5天,收集各组小鼠子宫,应用光学显微镜观察小鼠子宫内膜组织形态学变化。结果妊娠第5天,模型组小鼠子宫内膜腺体数量少、腺腔小而直,间质细胞体积小,间质紧密;而正常组则表现为腺体数目多,腺腔扩张、弯曲,腺腔、宫腔均有较多分泌物,间质疏松、水肿;中药组与正常组相似。结论补肾固黄汤可以改善胚泡着床障碍小鼠子宫内膜组织学形态,从而提高子宫内膜容受性。

补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜P21表达的影响

目的:观察补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠着床部位子宫内膜中周期素依赖的蛋白激酶抑制物P21和增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响。方法:采用免疫印迹法观察胚泡植入[即妊娠第6天(pregnancy day 6,Pd6),Pd7和Pd8]时P21在整个子宫中的表达,采用免疫组化法进一步定位观察着床部位子宫内膜中PCNA和P21的表达。结果:与对照组相比,模型组子宫内膜PCNA和P21的出现和消失在时间和空间上均明显滞后;补肾益气和血方能促进PCNA和P21及时有序地表达或消失,从而改善胚泡着床障碍小鼠子宫内膜的蜕膜反应。结论:补肾益气和血方可通过促进子宫内膜的蜕膜反应来改善胚泡着床,其作用机制与其促进子宫内膜PCNA和P21时空有序地表达和消失密切相关。

补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜周期蛋白D3表达的影响

目的 观察补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜cyclinD3表达的影响。 方法 妊娠雌鼠随机分为正常组、模型组、治疗组各 2 0只 ,模型组取非孕子宫和妊娠子宫 ,余两组取妊娠子宫。采用免疫印迹法和免疫组织化学法 ,分别测定雌、孕激素、cyclinD3。 结果 胚泡着床障碍小鼠子宫内膜cyclinD3表达在时空上明显滞后 ,补肾益气和血方能促进胚泡着床障碍小鼠子宫内膜cyclinD3及时有序地表达。 结论 补肾益气和血方可促进子宫内膜cyclinD3的表达 ,并可能与子宫内膜的蜕膜化有关 ,可能有助于胚泡着床。

保胎液对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜降钙素表达的影响

目的:观察保胎液对胚泡着床障碍模型小鼠子宫内膜降钙素水平的影响。方法:采用米非司酮小鼠受精卵着床障碍模型。将孕鼠随机分为正常组、模型组、西药组和保胎液(高、中、低3种剂量)治疗组,从妊娠第1天起分别给予0.9%氯化钠溶液、地屈孕酮和保胎液(高、中、低3种剂量)灌胃治疗。于妊娠第4天上午皮下注射米非司酮,每只0.08mg。正常组不予任何处理。于妊娠第5天取小鼠的子宫组织,运用实时荧光定量PCR技术检测小鼠子宫内膜降钙素的含量。结果:模型组降钙素表达量与正常组、中药高剂量组、中剂量组及西药组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。中药高、中剂量组分别与西药组比较,差异无统计学意义(P>0.05);中药中剂量组与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05);中药中剂量组降钙素水平明显高于高、低剂量组(P<0.05)。结论:保胎液可以调节小鼠子宫内膜降钙素的表达量,特别是中剂量效果最明显,从而改善受精卵着床障碍小鼠子宫内膜容受性,促进受精卵着床。

针刺后三里、三阴交对胚泡着床障碍大鼠子宫VEGF表达的影响

目的:观察针刺后三里、三阴交对胚胎着床障碍大鼠子宫血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:早孕大鼠随机分为正常组(N)、模型组(M)、针刺腧穴组(A)、针刺非穴位组(C),M组、A组、C组均采用米非司酮造模。于妊娠第八天处死大鼠,观察各组大鼠妊娠率及平均着床胚泡数;免疫组化及RT-PCR方法检测各组大鼠子宫VEGF蛋白和mRNA表达的差异。结果:A组妊娠率及平均着床胚泡数较M组、C组显著提高(P<0.05),但A组妊娠率及平均着床胚泡数仍低于N组(P<0.05);A组子宫VEGF蛋白及mRNA表达水平较M组、C组显著提高(P<0.05),与N组比较差异无统计学意义。结论:针刺足三里、三阴交可在一定程度上改善米非司酮诱导的胚泡着床障碍,促进大鼠胚泡着床,其作用机制可能与针刺增加胚泡着床障碍大鼠子宫VEGF的表达有关。

保胎液对胚泡着床障碍小鼠雌孕激素的影响

目的:观察保胎液对胚泡着床障碍模型小鼠的雌、孕激素的影响。方法:采用米非司酮小鼠胚泡着床障碍模型。将孕鼠随机分为正常组、模型组、西药对照组和中药(高、中、低3种剂量)治疗组。从妊娠第1天起分别给予生理盐水、地屈孕酮和保胎液(高中低3种剂量)灌胃治疗。于妊娠第4天上午皮下注射米非司酮,每只0.08 mg。正常组不予任何处理。于妊娠第5天处死小鼠留取血清,运用罗氏电化学发光法检测血清雌激素(E2)和孕激素(P)的含量。结果:与模型组比较,保胎液各治疗组均有利于改善血清雌孕激素水平(P<0.05),与西药对照组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:保胎液可以调节血清雌激素(E2)和孕激素(P)的含量,从而改善着床障碍小鼠子宫内膜容受性,促进胚泡着床。

不同工艺制备的补肾益气活血汤治疗小鼠胚胎着床障碍效果比较

目的 比较2种工艺制备的补肾益气活血汤治疗小鼠胚胎着床障碍的疗效,评价工艺的合理性。方法 将妊娠小鼠随机分成4组,从妊娠第1d开始,传统组、改进组分别灌服不同工艺制备的补肾益气活血汤,模型组、正常组则灌服等量生理盐水,除正常组外,其余3组小鼠于第3、4d每天皮下注射吲哚美辛溶液(44mg/kg)2次,各组于第5d各取3只小鼠制作子宫切片,观察子宫内膜腺体上皮、间质及血管的组织形态和超微结构,于第8d,观察胚胎着床率和着床位点数。结果 传统组组织形态与模型组相似,而改进组则与正常组相似;改进组胚胎着床率和着床位点数明显高于模型组(P<0.05),且胚胎着床率高于传统组。结论 改进工艺制备的汤剂作用效果明显高于传统工艺制备的汤剂。

针刺对胚胎着床障碍大鼠子宫内膜CCR2的影响

目的观察针刺对胚胎着床障碍大鼠子宫内膜趋化因子受体CCR2表达的影响。方法将72只孕鼠随机分为正常组(N)、胚胎着床障碍组(M)、针刺治疗组(A)和黄体酮治疗组(W),每组随机再分为第6天组(D6)、第8天组(D8)、第10天组(D10)。其中M组、A组和W组大鼠妊娠第1天给予米非司酮麻油溶液造模,N组仅给予等量麻油溶液。同时,A组固定并每天针刺三阴交、后三里,N组和M组仅固定,W组肌肉注射黄体酮,直至处死。用免疫组织化学法、Western blot和Real-time PCR等方法测定着床点子宫内膜CCR2的表达。结果与N组相比,M组大鼠子宫内膜CCR2蛋白和mRNA的表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与M组相比,A组和W组大鼠子宫内膜CCR2蛋白和mRNA的表达则明显增高(P<0.05)。结论针刺能上调胚胎着床障碍大鼠母胎界面CCR2的表达,从而促进胚胎的着床和胎盘的形成。

补肾安胎方及其拆方对着床障碍小鼠胚泡着床疗效观察

目的:观察补肾安胎方及其构方中补肾组分、益气活血组分对胚泡着床障碍小鼠胚泡着床位点数的影响。方法:将妊娠小鼠随机分为正常组、模型组、补肾安胎组、补肾组及益气活血组。妊娠第3、4天,正常组小鼠每天2次皮下注射麻油0.12ml,其余四组皮下注射吲哚美辛油剂0.12ml,造成小鼠胚泡着床障碍的动物模型。分别收集妊娠第5、6、8天小鼠子宫,计数着床位点个数并比较其大小形态。结果:补肾安胎组小鼠着床位点数与模型组比较显著提高(P<0.05),补肾组和益气活血组小鼠着床位点数较模型组多,但无统计学意义;补肾组和益气活血组小鼠着床位点数较补肾安胎组少,但无统计学意义。第5、6天着床位点胚泡,正常组和补肾安胎组左右两侧子宫分布均匀,胚泡大;模型组胚泡分布明显不均,且比正常组及补肾安胎组小;补肾组和益气活血组胚泡分布尚均匀,比正常组及补肾安胎组稍小。妊娠第8天正常组和补肾安胎组胚泡大而且各胚泡大小均等,形状规则,胚泡间界限清楚,无相互融合现象;模型组胚泡大小形状不一,各胚泡之间发生融合;补肾组和益气活血组胚泡大小较均匀,但有融合现象。结论:集补肾和益气活血为一体的补肾安胎方可以明显提高小鼠着床位点数,改善胚泡的形态和宫内的分布。

大鼠胚泡着床障碍动物模型的建立

目的建立大鼠胚泡着床障碍动物模型。方法将与雄性大鼠交配后的成年雌性SD大鼠随机分为正常组、小剂量组(5mg/kg)、中剂量组(6mg/kg)、大剂量组(8mg/kg),小剂量组、中剂量组、大剂量组于妊娠第3天皮下一次性注射不同剂量的米非司酮,于妊娠第8天观察大鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,筛选最佳造模剂量。结果与正常组相比,小剂量组和中剂量组着床率和平均着床胚泡数均显著降低(P<0.01)。中剂量组的着床率和平均着床胚泡数低于小剂量组组,差异无统计学意义(P>0.05)。当剂量达到8mg/kg时,胚泡着床被完全抑制。结论于妊娠第3天皮下注射5mg/kg的米非司酮,可建立稳定可靠的大鼠胚泡着床障碍模型。

保胎液对胚泡着床障碍小鼠着床位点数及分布形态影响的实验研究

目的观察保胎液对胚泡着床障碍模型小鼠着床位点数及分布形态的影响。方法采用米非司酮小鼠胚泡着床障碍模型。将孕鼠随机分为正常组、模型组、西药对照组和中药(高、中、低三种剂量)治疗组,从妊娠第1天起分别给予生理盐水、地屈孕酮和保胎液(高、中、低三种剂量)灌胃治疗。于妊娠第4天上午皮下注射米非司酮,每只0.08 mg。正常组不予任何处理。于妊娠第5天腹腔静脉注射1%浓度的Trypan Blue 0.3 mL,观察10 min,取出子宫,观察蓝染点,计算胚泡着床位点数。结果中药高、中、低治疗组,西药对照组,模型组小鼠胚泡着床位点数均低于正常组(P<0.05);与模型组比较,中药各治疗组、西药组小鼠着床位点数明显提高(P<0.05)。结论保胎液能够增加着床障碍小鼠的胚泡着床位点数,从而有利于胚泡的着床,提高妊娠率。