着色性干皮病C组基因蛋白缺失对膀胱癌细胞自噬的影响

目的探讨膀胱癌细胞中着色性干皮病C组基因(xeroderma pigmentosum group C,XPC)蛋白缺失对自噬的影响。方法利用shRNA策略,建立稳定干扰XPC的膀胱癌T24细胞模型,蛋白印迹技术检测干扰XPC后自噬表征蛋白LC3Ⅱ的表达,瞬时转染GFP-LC3,荧光显微镜观察细胞荧光聚集情况,CCK-8法检测细胞的增殖状况,免疫印迹技术检测自噬及凋亡相关蛋白的表达。结果成功建立干扰XPC的膀胱癌T24细胞模型;干扰XPC后,膀胱癌T24细胞自噬小体的形成[(1.53±0.81)%vs(3.30±0.70)%,P<0.05]明显减少,顺铂作用下膀胱癌T24细胞自噬小体的形成[(2.19±0.37)%vs(3.20±0.29)%,P<0.05]明显减少;顺铂促进XPC缺失后的膀胱癌T24细胞自噬;XPC缺失后的自噬为非保护性自噬。结论 XPC蛋白参与调控膀胱癌T24细胞的自噬。

人着色性干皮病D组基因对白细胞介素-6促进人血管平滑肌细胞增殖作用的影响

目的：探讨人着色性干皮病D组基因（XPD）对白细胞介素-6（IL-6）促进人血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖作用的影响。方法：用脂质体转染法将重组质粒pEGFP-N2/XPD和空质粒pEGFP-N2稳定转染VSMCs,然后给予1×10~5U/L IL-6孵育48h。实验分为6组：（1）空白对照组;（2）pEGFP-N2组;（3）pEGFP-N2/XPD组;（4）IL-6组;（5）IL-6＋pEGFP-N2组;（6）IL-6＋pEGFP-N2/XPD组。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况;用MTT法观察细胞增殖活力;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;用RT-PCR和Western blotting检测XPD、Bcl-2、Bax和野生型P53（wt-P53）表达量的变化。结果：在荧光显微镜下,可在转染了重组质粒pEGFP-N2/XPD或空质粒pEGFP-N2的细胞中观察到绿色荧光,即转染成功;MTT结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染抑制了细胞增殖活力（P〈0.05）,并能抑制IL-6促进VSMCs增殖的作用（P〈0.05）;流式细胞仪结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染引起了细胞G_0/G_1期增加（P〈0.05）、S期减少（P〈0.05）、凋亡率增加（P〈0.01）,并能抑制IL-6促进VSMCs G_0/G_1期减少、S期增加、凋亡率降低的作用（P〈0.01）;RT-PCR和Western blotting检测发现,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染使得XPD表达增高（P〈0.05或P〈0.01）,同时Bcl-2表达降低,Bax和wt-P53表达增高（P〈0.05或P〈0.01）,并能抑制IL-6促进VSMCs的Bcl-2表达增高、Bax和wt-P53表达降低的作用（P〈0.05或P〈0.01）。结论：XPD能抑制VSMCs增殖并促进其凋亡,并能抑制IL-6促进VSMCs增殖和降低其凋亡的作用,有望成为治疗动脉粥样硬化的靶点。

着色性干皮病基因组D和胞苷脱氨酶基因单核苷酸多态性与肺癌易感性的关系

目的探讨着色性干皮病基因组D(XPD)和胞苷脱氨酶(CDA)基因单核苷酸多态性与肺癌易感性及其病理类型的关系,并探讨吸烟与基因多态性的交互作用对肺癌发病风险的影响。方法采用病例-对照研究方法纳入肺癌患者和健康对照者各103人,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法分析两组人群XPD基因外显子10G→A(Asp312Asn)、23A→C(Lys751Gln)以及CDA基因外显子1上79A→C(Lys27Gln)、208G→A(Ala70 Thr)的基因型。结果两组XPD312和XPD751位点的基因分布频率比较差异均无统计学意义(P>0.05);但吸烟合并XPD第751位点突变个体发生肺癌的风险显著增加(P=0.044);同时发生XPD第312和751两个位点突变的肺癌风险增加6.13倍(P=0.047)。两组CDA Lys27Gln和CDAAla70 Thr基因分布频率差异无统计学意义(P>0.05)。XPD和CDA在不同病理类型中的基因分布频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论吸烟可使XPD第751位点发生突变的个体发生肺癌的风险增加,XPD基因第312和751两个位点同时突变使肺癌发生的风险增加。

着色性干皮病G组基因多态性与喉癌和喉咽癌风险的相关性

目的研究DNA修复基因着色性干皮病G组基因(XPG)Asp1104His多态性与喉癌和喉咽癌风险的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态分析检测175例喉癌或喉咽癌患者和525名无肿瘤正常对照者的XPG基因型,采用多因素logistic回归模型计算各基因型携带者患喉癌和喉咽癌的风险及各基因型对肿瘤病理分级的影响。结果与Asp/Asp基因型比较,XPG1104Asp/His杂合型增加喉癌的发病风险(OR=2.46;95%CI=1.15～5.24,P<0.05),但不影响喉咽癌的发病风险(OR=1.36;95%CI=0.87～2.12,P>0.05);杂合基因型Asp/His增加高分化鳞状细胞癌的发病风险(OR=1.88;95%CI=1.05～3.40,P<0.05)。结论DNA修复基因XPG1104Asp/His多态性与喉癌的发病风险相关。

着色性干皮病C组基因单核苷酸多态性的研究进展

着色性干皮病C组(XPC)基因编码的蛋白质是核苷酸切除修复(NER)通路中关键蛋白质,参与DNA损伤识别和修复,也是NER发挥生物学效应的限速蛋白质。如果XPC基因表达缺失或功能异常,导致损伤的基因组DNA不能被识别修复,将导致一系列的疾病。单核苷酸多态性(SNP)是人类可遗传的基因变异中最常见的一种。本文就近年来DNA修复通路中重要基因XPC常见SNP的研究进行综述。

A组着色性干皮病基因的克隆、表达及重组蛋白的鉴定(英文)

目的 :克隆、表达A组着色性干皮病基因 ,鉴定重组蛋白。方法 :以人扁桃腺的cDNA为模板 ,RT -PCR及巢式PCR扩增A组着色性干皮病基因的全部编码区 ,克隆入pBluescript质粒 ,DNA测序鉴定。酶切并连接到pTrcHisC载体 ,在大肠杆菌TOP10中表达。免疫印迹鉴定表达产物。 结果 :克隆了A组着色性干皮病基因的完整编码序列 ,表达了预期分子量的融合蛋白 ,经免疫印迹法检测具有免疫原性。结论 :成功克隆了A组着色性干皮病基因 ,表达了其编码蛋白。

着色干皮病C基因多态性与鼻咽癌风险的关系

目的研究四川泸州人群着色干皮病C(XPC)A2920C、PAT基因多态性与鼻咽癌风险的关系。方法采用病例-对照研究方法,PCR-RFLP检测220例鼻咽癌病人及性别、年龄相匹配的250例正常人群A2920C、PAT位点多态性分布及与鼻咽癌风险的关系。结果病例组和对照组两多态性位点基因型频率和单倍型频率分布无显著性差异(P>0.05),两多态性位点未增加个体患鼻咽癌的风险(P>0.05)。结论XPC-A2920C和XPC-PAT多态性与鼻咽癌易感性无关。

着色性干皮病基因G组基因多态性与胃癌的相关研究进展

着色性干皮病基因G组(xeroderma pigmentosum group G,XPG)是一种结构特异性内切核酸酶,参与核苷酸切除修复(nucleotide excision repair)和转录,对于纠正切除修复缺陷至关重要。XPG单核苷酸基因多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)可能与胃癌(gastric cancer,GC)的遗传易感性有关。XPG在人体细胞基因组的稳定及细胞周期调控起重要作用。XPGSNP多个位点不仅与GC的发生有关,而且影响到GC的治疗及预后。本综述将XPGSNP与GC的相关研究进展进行综述。

人类着色性干皮病G组基因研究进展

随着细胞融合和互补技术的出现,DE WEERD KASTELEIN等[1]发现XP基因遗传异质性。1979年第1次诊治人类着色性干皮病G组基因（xeroderma pigmentosum group G,XPG）患者,标志着XPG的研究诞生。XPG又叫ERCC5基因（X-ray repair cross-complementing group 5）,

A型着色性干皮病1例XPAC基因的复合无义突变

目的检测1例A型着色性干皮病患者及其父母的XPAC基因的突变情况。方法收集患者及其父母资料,提取外周血DNA,采用PCR扩增XPAC基因编码区的全部外显子,DNA直接测序,明确突变位点,并以50个无关正常人作对照。结果患者XPAC基因分别于第631及第682位发生C→T突变,使第211位及第228位氨基酸均由精氨酸变成终止密码子(R211X,R228X)突变,两突变分别来自其父母。50例健康对照者不存在此两种突变。结论R211X及R228X复合无义突变为引起该患者的A型着色性干皮病的病因。

切除修复交叉互补基因1和着色性干皮病基因多态性与晚期非小细胞肺癌铂类药物化疗敏感性的关系研究

目的探讨切除修复交叉互补基因1(ERCC1)、着色性干皮病基因(XPD)多态性与晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者含铂二药方案化疗敏感性的关系。方法采用PCR-RFLP方法检测130例以铂类药物为基础化疗方案的晚期NSCLC患者ERCC1 118C/T、C8092A与XPD Asn312Asp、Lys751Gln基因多态性,分析其与化疗敏感性的关系。结果化疗2个周期后,130例患者的客观缓解率(ORR)为33.8%(44/130),其中部分缓解(PR)44例(33.8%),疾病稳定(SD)54例(41.6%),疾病进展(PD)32例(24.6%)。ERCC1 118C/T+T/T基因型化疗ORR(52.4%)是C/C基因型(41.8%)的3.300倍[95%CI(1.104,9.864),P=0.003]。XPD Asp312Asn、Lys751Gln(或Gln751Gln)基因型化疗ORR(62.5%)是其他基因型的(29.2%)的3.922倍[95%CI(1.320,11.649),P=0.010]。ERCC1 118C/T(或T/T)、XPD Asp312Asn与Lys751Gln(或Gln751Gln)基因型化疗ORR(58.0%)是ERCC1 118C/C、XPD Asp312Asp与Lys751Lys基因型的(31.8%)的3.571倍[95%CI(1.082,11.793),P=0.032]。应用SHEsis分析软件发现以其他单体型组为参照,A-C单体型化疗ORR显著提高(P=0.039)。结论 ERCC1 118C/T和XPD Asp312Asn、Lys751Gln多态性与晚期NSCLC患者铂类药物化疗敏感性密切相关。

人着色性干皮病基因D对HepG2细胞Mdm2和Mdm4表达的影响

目的:探讨人剪切修复基因着色性干皮病基因D(xeroderma pigmentosum D,XPD)对肝癌细胞鼠双微体2(murine double minute 2,Mdm2)和鼠双微体4(murine double minute 4,Mdm4)表达的影响。方法:用脂质体转染法将重组质粒pEGFP-N2/XPD和空载质粒pEGFP-N2转染进入人肝癌细胞株HepG2,实验分为3组:(1)空白对照组;(2)pEGFP-N2组;(3)pEGFP-N2/XPD组。用MTT法观察细胞的增殖活力;用流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;用RT-PCR和Western blotting检测XPD、Mdm2、Mdm4和P53表达量的变化。结果:MTT结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染抑制了肝癌细胞的增殖活力;流式细胞术结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染引起了G1期细胞增加,S期减少,凋亡率增加。RT-PCR和Western blotting检测发现,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染使得XPD表达增高,同时使得Mdm2和Mdm4表达降低,P53表达增高。结论:XPD能下调肝癌细胞中Mdm2和Mdm4的表达,上调P53表达,并能抑制肝癌细胞增殖及诱导其凋亡。

一例着色性干皮病(XP)伴眼周角化棘皮瘤患者的XP基因突变及角化棘皮瘤组织病理学特征

目的:探讨着色性干皮病(XP)伴眼周角化棘皮瘤患者的XP基因突变以及角化棘皮瘤组织病理学特征。方法:手术切除该患者眼周角化棘皮瘤并行组织病理学检查。提取该患者外周血白细胞DNA,PCR扩增XP系列基因的编码外显子区域,通过直接测序比较该患者与正常人序列差异以确定致病突变。用MutationTaster在线生物信息学软件分析变异是否有害。结果:术后切除皮损组织送组织病理学检查结果示,表皮角化过度,真皮浅层慢性炎性细胞浸润,肿物与周围界限清楚。经过手术后,电话随访半年恢复良好。基因序列分析结果显示,该患者XP系列基因存在7个错义突变,5个无义突变。错义突变分别位于XPB基因第14外显子的第260位碱基,c. 260A 】G (p. Lys 87 Arg);XPC基因第9外显子的第506位碱基,c. 506T 】C (p. Leu169Ser);第16外显子的第211位碱基,c. 211A 】C (p. Ser 71 Arg);XPF基因第11外显子的第488位碱基,c. 488C 】T (p. Pro 163Leu);XPG基因第2外显子的第50位碱基,c. 50C 】T (p. Thr17Met);第8外显子的第706位碱基,c. 706C 】G (p. Leu 236Val);第15外显子的第346位碱基,c. 346C 】G (p. Thr117Met)。无义突变分别位于XPB基因第14外显子的第312位碱基;XPC基因外显子第8外显子的第39位碱基;XPD基因外显子第6外显子的第108位碱基;XPG基因第4外显子的第48位碱基;XPI基因第3外显子的第33位碱基。经MutationTaster在线生物信息学软件分析结果显示:XPC基因第9外显子,c. 506T 】C (p. Leu169Ser),以及XPC基因第16外显子,c. 211A 】C (p. Ser 71 Arg)变异为有害突变。结论:该患者确诊为着色性干皮病伴眼周角化棘皮瘤。XPC基因突变(第9外显子,c. 506T 】C (p. Leu169Ser),以及XPC基因第16外显子,c. 211A 】C (p. Ser 71 Arg))可能为该患者的致病突变。

着色性干皮病基因D和p53对HBV复制的影响

目的:探讨人着色性干皮病基因D(XPD)和p53对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法:使用脂质体转染法把重组质粒pEGFP-N2/XPD和空载质粒pEGFP-N2转染进入人肝癌细胞株HepG2.2.15细胞,转染后的第2天用20μmol/L pifithrin-α(p53抑制剂)孵育细胞24 h。实验共分为空白对照组、pEGFP-N2组、pEGFPN2/XPD组、pEGFP-N2/XPD+pifithrin-α组和pifithrin-α组。使用RT-PCR法检测XPD、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)及乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)mRNA表达的变化;使用ELISA法检测培养上清液中HBsAg和HBeAg含量的变化;用荧光定量PCR法检测培养上清液中HBV-DNA含量的变化;用bDNA法检测细胞内核心颗粒中HBV-DNA含量的变化。结果:RT-PCR结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染可使得XPD mRNA表达增高,XPD表达增高能使得HBsAg、HBeAg和HBx mRNA表达明显减少,而pifithrin-α能抑制XPD的这一作用(均P<0.01)。ELISA结果显示,XPD表达增高能使得培养上清液中HBsAg和HBeAg含量明显减少,而pifithrin-α能抑制XPD的这一作用(均P<0.01)。荧光定量PCR结果显示,XPD表达增高能使得培养上清液中HBV-DNA含量明显减少,而pifithrin-α能抑制XPD的这一作用(均P<0.01)。bDNA结果显示,XPD表达增高使得细胞内核心颗粒中HBV-DNA含量明显减少,而pifithrin-α能抑制XPD的这一作用(均P<0.01)。结论:XPD能通过p53通路抑制HBV复制,所以XPD和p53可能成为乙型肝炎抗病毒治疗的作用靶点。

着色性干皮病基因D和X线交叉互补修复基因1的多态性与肺癌的相关性分析

目的：探讨着色性干皮病基因D（Xeroderma pigmentosum gene D ，XPD）和X线交叉互补修复基因1（X-ray repair cross complementing gene 1，XRCC1）的多态性与肺癌之间的相关性。方法：采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polyme-rase chain reaction-restriction fragment length polymorphism ，PCR-RFLP）技术，对150例肺癌患者（肺癌组）以及150例健康志愿者（健康对照组）的XPD-751、XRCC1-399两个多态位点进行基因型分析。结果：肺癌组及健康对照组XPD-751的基因型频率及突变等位基因频率差异有统计学意义（P分别为0．046、0．003）；肺癌组及健康对照组的XRCC1-399基因型频率及突变等位基因频率则差异无统计学意义（P分别为0．395、0．105）。非小细胞肺癌组和小细胞肺癌组XPD-751的突变等位基因频率差异有统计学意义（P＝0．012），鳞癌组、腺癌组及其他类型非小细胞肺癌组XPD-751的突变等位基因频率差异亦有统计学意义（P＝0．023）。吸烟和XPD-751多态性两个危险因素共同存在时，罹患肺癌的相对危险度为2．812（95％ CI：0．956～6．415），P＝0．336。结论：XPD-751基因多态性与肺癌的发生相关，尤其与非小细胞肺癌中的鳞癌关系密切；而XRCC1-399基因多态性则与肺癌的发生无关；吸烟和XPD-751多态性在肺癌的发生中无交互作用。

着色性干皮病基因B对白介素-6介导血管平滑肌细胞增殖作用的影响及机制

目的探讨着色性干皮病基因B(xeroderma pigmentosumB,XPB)对白介素-6(IL-6)介导人血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及凋亡的影响。方法用脂质体转染法将重组质粒pcDNA3.1-XPB和空载质粒pcDNA3.1稳定转染VSMC,然后给予100 U/mL的IL-6孵育48 h。实验分为6组:空白对照组;pcDNA3.1组;pcDNA3.1-XPB组;IL-6组;IL-6+pcDNA3.1组;IL-6+pcDNA3.1-XPB组。用RT-PCR和Western blot法检测XPB、Bcl-2、Bax和野生型p53(wtp53)表达量的变化;用MTT法观察细胞增殖活力;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果 RT-PCR和Westernblot检测发现,重组质粒pcDNA3.1-XPB的转染使得细胞XPB表达增高(P<0.05或P<0.01),同时使得Bcl-2表达降低、Bax和wt-p53表达增高(P<0.05或P<0.01),并能抑制IL-6促进VSMC的Bcl-2表达增高、Bax和wt-p53表达降低的作用(P<0.05或P<0.01);MTT结果显示,XPB高表达抑制了细胞增殖活力(P<0.05),并能抑制IL-6促进VSMC增殖的作用(P<0.05);流式细胞仪结果显示,XPB高表达引起了细胞G_0/G_1期增加(P<0.05)、S期减少(P<0.05)、凋亡率增加(P<0.01),并能抑制IL-6促进VSMCG_0/G_1期减少、S期增加、凋亡率降低的作用(P均<0.01)。结论 XPB基因能抑制VSMC增殖并促进其凋亡,并能抑制IL-6促进VSMC增殖和降低其凋亡的作用,有望成为治疗动脉粥样硬化的靶点。

人类着色性干皮病基因D基因多态性与前列腺癌易感性的Meta分析

目的：评价人类着色性干皮病基因DAsn312Asp和Gln751Lys多态性位点对于前列腺癌患病风险的影响。方法检索2004年至2014年间在PubMed、Embase、万方、中国知网、维普等数据库中所有相关文献，提取其中数据进行统计学分析。以比值比和95％可信区间评价该位点与前列腺癌易感性的关系。分析软件使用STATA10．0。结果最终筛选出9项研究，分别有3165例前列腺癌患者和3539例对照人群涉及Gln751Lys基因多态性，2555例及3182例对照涉及Asn312Asp基因多态性。总体上，未发现XPDGln751Lys基因多态性与前列腺癌易感性相关。另一方面，在种族亚组中发现Asn312Asp多态性能增加亚洲（如：Asnvs．Asp：OR＝1．54，95％CI＝1．24～1．91）及非洲人群（如：Asnvs．Asp：OR＝1．36，95％CI＝1．00～1．83）罹患前列腺癌的易感性。结论我们的荟萃分析证实，XPDAsn312Asp基因多态性能增加亚洲人群及非洲人群罹患前列腺癌的易感性。

着色性干皮病基因D对白介素-6促进人血管平滑肌细胞增殖作用的影响

目的血管平滑肌细胞(vascular smooth musclecell,VSMC)过度增殖是促进动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发生发展的一个关键因素。而且在AS损伤中,白介素-6(interleukin-6,IL-6)起到了刺激VSMC过度增殖的作用。有研究发现,着色性干皮病基因D(xeroderma pig-mentosum D,XPD)表达上调能促进某些类型细胞的凋亡。然而,XPD对VSMC的增殖和凋亡是否有影响目前未见相关报道。为此,本研究探讨XPD对IL-6促进人VSMC增殖作用的影响及其与AS之间的关系。方法用脂质体转染法将重组质粒pEGFP-N2/XPD和空载质粒pEGFP-N2稳定转染VSMC,然后给予100 U/mL的IL-6孵育48h。实验分为6组:(1)空白对照组;(2)pEGFP-N2组;(3)pEGFP-N2/XPD组;(4)IL-6组;(5)IL-6+pEGFP-N2组;(6)IL-6+pEGFP-N2/XPD组。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况;用MTT法观察细胞增殖活力;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;用RT-PCR和Western blotting检测XPD、Bcl-2、Bax和野生型P53(wild type P53,wtP53)表达量的变化。结果在荧光显微镜下,可在转染了重组质粒pEGFP-N2/XPD或空载质粒pEGFP-N2的细胞中观察到绿色荧光,即转染成功;MTT结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染抑制了细胞增殖活力(P<0.01)。结论 XPD能抑制VSMC增殖并促进其凋亡,并能抑制IL-6促进VSMC增殖和降低其凋亡的作用,有望成为治疗动脉粥样硬化的靶点。

基因诊断着色性干皮病二例

总结报告2例经基因检测分型的着色性干皮病患者(分别为着色性干皮病C组和变异组)及其4种基因变异,其中2种为新变异:POLH基因c.1403delC(p.P468Qfs*3)移码突变和c.592G>A(p.E198K)错义突变。该研究结果丰富了人类基因突变数据库,为着色性干皮病的基因诊断和遗传咨询提供了重要信息。