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重组人睫状神经因子(rhCNTF)对谷氨酸钠肥胖大鼠减肥作用机制的实验研究
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作者 郭淑芳 韩国柱 +1 位作者 李卫平 周勤 《实验动物科学》 2011年第6期18-22,28,共6页
目的研究短、长期应用rhCNTF对谷氨酸钠肥胖大鼠的减肥作用机制,为新药开发提供药理动物实验依据。方法建立谷氨酸钠(MSG)大鼠模型。3月龄时将肥胖动物随机分10组,长、短周期各5组分别给药。长周期连续给药33 d,短周期连续给药10 d。末... 目的研究短、长期应用rhCNTF对谷氨酸钠肥胖大鼠的减肥作用机制,为新药开发提供药理动物实验依据。方法建立谷氨酸钠(MSG)大鼠模型。3月龄时将肥胖动物随机分10组,长、短周期各5组分别给药。长周期连续给药33 d,短周期连续给药10 d。末次给药24 h后空腹断头,取生殖器周围同一部位小块脂肪组织经10%福尔马林固定后做光镜检查(400倍),取三个视野计数全视野脂肪细胞数并计算平均值;取空肠固定于电镜液,电镜扫描观察空肠绒毛密度及相对吸收表面积大小。结果 1)造模:正常大鼠体质量为(189.40±38.72)g,谷氨酸钠肥胖大鼠平均体质量为(246.72±36.67)g,(P<0.001);LI(Lee's指数)分别为289.27±9.05和304.42±9.64(P<0.001)。说明造模成功。2)药物实验结果中,短周期给药组:高、中剂量组脂肪细胞体积变小,高剂量组空肠绒毛密度下降,相对吸收面积减小(P<0.01或P<0.05);长周期给药:高、中剂量组脂肪细胞体积变小,空肠绒毛密度下降,相对吸收面积减小(P<0.01或P<0.05)。结论每天皮下注射rhCNTF 30~300μg/kg使谷氨酸钠肥胖大鼠的脂肪细胞变小,减肥作用与减小空肠绒毛膜吸收面积有关,作用呈剂量依赖性。 展开更多
关键词 重组人睫状神经因子 谷氨酸钠肥胖大鼠 减肥作用 绒毛密度
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重组人睫状神经因子的表达、纯化以及聚乙二醇修饰 被引量:2
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作者 王彦 范开 +5 位作者 夏永鹏 张继兰 梅翔 陈海容 李秀梅 邱宗荫 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1181-1184,共4页
目的研究重组人睫状神经因子(rh-CNTF)的表达、纯化及聚乙二醇化修饰、纯化方法。方法重组人睫状神经因子(rh-CNTF)工程菌经37℃培养至对数生长期,加入IPTG诱导4h,经QSepharose F.F凝胶柱纯化和复性后得到纯化的rh-CNTF。以体外培养鸡... 目的研究重组人睫状神经因子(rh-CNTF)的表达、纯化及聚乙二醇化修饰、纯化方法。方法重组人睫状神经因子(rh-CNTF)工程菌经37℃培养至对数生长期,加入IPTG诱导4h,经QSepharose F.F凝胶柱纯化和复性后得到纯化的rh-CNTF。以体外培养鸡胚背根神经节(DRG)方法测定重组蛋白rh-CNTF的神经营养活性。用单甲氧基聚乙二醇丁醛(mPEG-ButyrALD-20k)对rh-CNTF进行修饰,所得修饰产物经DEAESepharose F.F和Superdex 75凝胶分离纯化后获得mPEG-rh-CNTF偶联物。结果目的蛋白占总蛋白30%左右,为包涵体,经QSepharose F.F凝胶柱纯化和复性,获得纯度达90%的rh-CNTF。表达的rh-CNTF能促进培养的鸡胚背根神经节神经突起的生长。修饰后的单聚PEG-rhCNTF经DEAESepharose F.F和Superdex 75凝胶纯化后纯度达到95%。结论确立了rh-CNTF蛋白表达纯化及PEG修饰的方法。 展开更多
关键词 重组人睫状神经因子 表达 纯化 聚乙二醇修饰
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重组人睫状神经因子聚乙二醇化条件的优化 被引量:1
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作者 王彦 范开 +3 位作者 夏永鹏 张继兰 李秀梅 邱宗荫 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第14期1345-1348,共4页
目的对单甲氧基聚乙二醇丁醛(mPEG-ButyrALD,相对分子质量20×103)修饰重组人睫状神经因子(rh-CNTF)的条件进行优化。方法优化了pH值、温度、时间、rh-CNTF与PEG的修饰比例、rh-CNTF浓度等修饰条件,并对修饰产物行分离纯化。鸡胚背... 目的对单甲氧基聚乙二醇丁醛(mPEG-ButyrALD,相对分子质量20×103)修饰重组人睫状神经因子(rh-CNTF)的条件进行优化。方法优化了pH值、温度、时间、rh-CNTF与PEG的修饰比例、rh-CNTF浓度等修饰条件,并对修饰产物行分离纯化。鸡胚背根节培养法检测和比较rh-CNTF和PEG-rhCNTF的体外生物学活性。结果rh-CNTF与PEG的修饰比例、rh-CNTF的浓度和pH值是主要影响因素,最佳pH为6.5,最佳rh-CNTF浓度为1~2 mg/ml,rh-CNTF与PEG的最佳质量比为1∶1,时间和温度影响甚微。rh-CNTF的体外神经营养活性约为PEG-rhCNTF的2倍。结论本法优化了修饰重组人睫状神经因子的条件。 展开更多
关键词 聚乙二醇修饰 重组人睫状神经因子 优化
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长期应用重组人睫状神经因子(rhCNTF)对谷氨酸钠肥胖大鼠血脂的影响 被引量:3
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作者 郭淑芳 韩国柱 +1 位作者 李卫平 周勤 《实验动物科学》 2009年第1期7-10,18,共5页
目的研究长期应用rhCNTF对谷氨酸钠(MSG)肥胖大鼠血脂的影响。方法建立MSG肥胖大鼠模型。3月龄时将肥胖动物随机分5组:分别皮下注射rhCNTF300μg·kg-1·d-1(高剂量组)、100μg·kg-1·d-1(中剂量组)、30μg·kg-1&... 目的研究长期应用rhCNTF对谷氨酸钠(MSG)肥胖大鼠血脂的影响。方法建立MSG肥胖大鼠模型。3月龄时将肥胖动物随机分5组:分别皮下注射rhCNTF300μg·kg-1·d-1(高剂量组)、100μg·kg-1·d-1(中剂量组)、30μg·kg-1·d-1(低剂量组);西布曲明灌胃8 mg·kg-1·d-1(阳性对照组);模型组和对照组均给予生理盐水1 mL·kg-1·d-1,连续给药33 d。末次给药后24 h,同时动物禁食过夜后,在水合氯醛麻醉下测体重、身长,计算LI;断头后取腹部脂肪称重计算脂肪系数;腹主动脉取血离心后测血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、血糖和血清胰岛素水平。结果(1)造模:正常大鼠189.40±38.72 g,谷氨酸钠肥胖大鼠平均体重(246.72±36.67)g,(P<0.001);LI(Lee’s指数)分别为289.27±9.05和304.42±9.64(P<0.001),说明造模成功。(2)药物实验结果高、中剂量给药组LI、脂肪系数、血总胆固醇、甘油三酯、血糖明显下降,高剂量组胰岛素水平也有所下降,达到统计学要求的显著性。结论rhCNTF30~300μg·kg-1·d-1皮下注射连续用药33 d,对谷氨酸钠肥胖大鼠具有明显的降脂作用,可能对Ⅱ型糖尿病肥胖有效。 展开更多
关键词 重组人睫状神经因子 谷氨酸钠肥胖大鼠 降脂作用 降血糖作用
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睫状神经营养因子受体 被引量:5
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作者 何成 路长林 敖世洲 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1996年第3期205-208,共4页
睫状神经营养因子是一种能够促进感觉、交感和运动神经元存活和分化的细胞因子.睫状神经营养因子受体复合物由三个亚基组成,α亚基是睫状神经营养因子的结合蛋白,它不是跨膜蛋白,而是通过GPI键锚在细胞膜上;信号传递体的两个亚... 睫状神经营养因子是一种能够促进感觉、交感和运动神经元存活和分化的细胞因子.睫状神经营养因子受体复合物由三个亚基组成,α亚基是睫状神经营养因子的结合蛋白,它不是跨膜蛋白,而是通过GPI键锚在细胞膜上;信号传递体的两个亚基分别是gp130和LIFRβ.随状神经营养因子受体复合物的形成是一个有序过程、Jak/Tyk家族的激活与细胞内信号传导有关. 展开更多
关键词 神经营养因子 睫状神经因子 受体
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用PCR方法从基因组DNA中扩增人睫状神经营养因子基因
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作者 杜方勇 甘思德 +1 位作者 范明 刘淑红 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 1995年第2期188-189,共2页
用PCR方法从基因组DNA中扩增人睫状神经营养因子基因杜方勇,甘思德,范明,刘淑红(北京军事医学科学院基础医学研究所100850)PCR方法具有操作方便、对模板要求不高、能快速高效地从原材料中得到微克水平的基因片段等... 用PCR方法从基因组DNA中扩增人睫状神经营养因子基因杜方勇,甘思德,范明,刘淑红(北京军事医学科学院基础医学研究所100850)PCR方法具有操作方便、对模板要求不高、能快速高效地从原材料中得到微克水平的基因片段等优点,但用它从基因组DNA扩增长片... 展开更多
关键词 聚合酶链反应 睫状神经因子 hCNTF 基因 基因组
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p44/p42激酶磷酸化在丹参注射液定向诱导成肌细胞分化为神经元样细胞过程中的作用
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作者 曾祥一 王伟 +2 位作者 孙亮 张力 曾令达 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第19期3656-3660,共5页
背景:睫状神经因子通过细胞表面的受体可以使成肌细胞去分化而转变为多能性干细胞,而p44/p42激酶可以进一步激活睫状神经因子下游基因的表达,与细胞去分化密切相关。目的:观察丹参注射液诱导成肌细胞分化成神经元的细胞模型中p42/p44激... 背景:睫状神经因子通过细胞表面的受体可以使成肌细胞去分化而转变为多能性干细胞,而p44/p42激酶可以进一步激活睫状神经因子下游基因的表达,与细胞去分化密切相关。目的:观察丹参注射液诱导成肌细胞分化成神经元的细胞模型中p42/p44激酶磷酸化的情况。设计、时间及地点:细胞分子水平实验,于2008-03/06在辽宁医学院附属第二医院口腔科学实验室完成。材料:清洁级新生1周SD大鼠1只,由辽宁医学院实验动物中心提供。丹参注射液为四川三精升和制药有限公司产品,批号080717,主要成分为丹参。睫状神经营养因子为Sigma产品。方法:体外分离培养大鼠成肌细胞,传至第5代接种于6孔板内,诱导组使用50μg/L睫状神经因子预诱导72h,再更换含复方丹参注射液的无血清DMEM培养基诱导10h;对照组使用不含复方丹参注射液的无血清DMEM培养基处理。取诱导后的成肌细胞,加入p44/p42激酶抑制剂PD98059进行干预处理。主要观察指标:Western blotting法检测诱导后成肌细胞蛋白标记物MyoD,Myf5的表达,神经元蛋白标记物酪氨酸羟化酶、神经丝的表达,以及p44/p42激酶在成肌细胞蛋白标记物下调过程中的作用。结果:与未诱导的对照组比较,培养的成肌细胞经睫状神经因子预诱导、再加入丹参注射液诱导的过程中,成肌细胞蛋白标记物MyoD,Myf5的表达均明显下调;而诱导后期神经元特异蛋白标记物酪氨酸羟化酶、神经丝的表达增高。丹参诱导后成肌细胞p44/p42激酶发生磷酸化,同时MyoD和Myf5的表达量下调;在p44/p42激酶抑制剂PD98059存在情况下,p44/p42激酶磷酸化及MyoD,Myf5表达量下调均被抑制。结论:经睫状神经因子预诱导后逐渐去分化的成肌细胞,在丹参注射液的诱导下能够成功分化为表达神经元特异蛋白标记物的神经元样细胞,p44/p42激酶通过磷酸化参与了成肌细胞的再分化过程。 展开更多
关键词 成肌细胞 分化 丹参注射液 睫状神经因子 p42/p44激酶
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Effect of ciliary neurotrophic factor on activation of astrocytes in vitro
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作者 吴艳 刘仁刚 周洁萍 《Neuroscience Bulletin》 SCIE CAS CSCD 2006年第6期315-322,共8页
Objective To observe the activating effect of ciliary neurotrophic factor (CNTF) on astrocyte in vitro. Methods Astrocytes cultured purely from newborn rats. Cerebral cortex was raised in normal and serum deprivatio... Objective To observe the activating effect of ciliary neurotrophic factor (CNTF) on astrocyte in vitro. Methods Astrocytes cultured purely from newborn rats. Cerebral cortex was raised in normal and serum deprivation condition with different concentrations (in ng/ml: 0, 2, 20, or 200) of CNTF. After cultured for 24 h, the shape and the cell cycle of astrocytes were examined by immunocytochemistry and flow cytometer, respectively. Results The immunoactivity of glial fibrillary acidic protein (GFAP) and the nuclear size of astrocytes were increased when CNTF was applied, whether cells were cultured in medium with or without serum. CNTF promoted astrocytes to enter the cell cycle in medium with serum, but had no this effect in medium without serum. Conclusion In medium without serum, astrocytes could differentiate into activated state ceils with CNTF application, but could not proliferate; in medium with serum, astrocytes could proliferate with aid of CNTF. 展开更多
关键词 ciliary neurotrophic factor ASTROCYTE ACTIVATION PROLIFERATION cell cycle
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