羊睾丸提取液对小鼠受损睾丸支持细胞一氧化氮合酶活性的影响(英文)

背景:大量研究证明,一氧化氮合酶/一氧化氮不仅对维持睾丸支持细胞正常功能起重要作用,而且影响精子的发生、活动及受精能力。目的:观察羊睾丸提取液对重金属铅致损小鼠睾丸支持细胞一氧化氮合酶活性的影响。设计:随机对照动物实验。单位:吉林医药学院组织胚胎学教研室。材料:实验于2004-03/2005-08在吉林医药学院组织胚胎学实验室(解放军总后勤部重点实验室)完成。选用健康昆明种雄性小鼠30只,按随机数字表法分为3组,即对照组、睾丸损伤模型组和羊睾丸提取液组,每组10只。方法:睾丸损伤模型组和羊睾丸提取液组小鼠给予100g/L醋酸铅0.2mL/(只·d),5次/周,连续2周,停药1周。羊睾丸提取液组同时腹部皮下注射羊睾丸提取液0.5mL/(只·d)。对照组给予与实验组溶剂等量的重蒸馏水。染毒期满禁食12h后,称体质量后断头处死,解剖取出双侧睾丸,立即称质量,甲醛固定后切片,应用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸-黄递酶组织化学方法结合显微图像分析,观察各组小鼠睾丸支持细胞的一氧化氮合酶活性变化。主要观察指标:染毒期满后各组小鼠的体质量、双侧睾丸质量及睾丸支持细胞一氧化氮合酶吸光度值。结果:30只小鼠全部进入结果分析,无脱失。①染毒期满后羊睾丸提取液组小鼠的体质量、双侧睾丸质量及一氧化氮合酶A值均显著高于睾丸损伤模型组[(22.47±3.49)g,(0.113±0.021)g,0.236±0.020;(19.13±3.46)g,(0.089±0.017)g,0.146±0.023(t=2.151～3.314,P<0.05～0.01)]。②睾丸损伤模型组睾丸一氧化氮合酶阳性支持细胞肿胀变性;羊睾丸提取液组的一氧化氮合酶阳性支持细胞形态接近对照组。结论:羊睾丸提取液可以提高重金属铅致损小鼠睾丸支持细胞的一氧化氮合酶活性,对睾丸损伤有一定的修复和保护作用,可为临床治疗男性不育提供新思路。

电磁辐射后大鼠睾丸类固醇激素合成急性调节蛋白和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶mRNA的变化(英文)

背景:电磁辐射在应用到许多领域的同时,对人体健康也构成一定的威胁。男性生殖系统也是电磁辐射的敏感靶器官,睾酮在电磁辐射条件下的变化及其机制目前还不清楚。目的:探讨电磁辐射对成年大鼠睾丸组织中类固醇合成急性调节蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)的作用,初步揭示电磁辐射影响睾酮合成的分子机制。设计:随机对照研究。单位:解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所核医学科和劳动卫生学教研室。材料:本研究于2003-06/2004-05在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所核医学科和劳动卫生学教研室完成。选择二级清洁级雄性成年Wistar大鼠75只,随机分为5组,即对照组以及电磁辐射后3,6,24,72h组,每组15只,体质量180～220g。方法:采用峰值功率为90W/cm2的微波连续辐照15min,辐照完毕后,动物均存活。采用放射免疫方法(RIA)分别测定电磁辐照后3,6,24,72h及对照组血清睾酮含量,同时运用RT-PCR方法测定睾丸组织中StAR、P450sccmRNA水平。主要观察指标:电磁辐照后3,6,24,72h组与对照组血清睾酮含量和StAR,P450sccmRNA的水平。结果:辐照后3h血清睾酮含量和StAR、P450sccmRNA水平均明显低于对照组,分别较对照组降低83.1%,57.3%,53.6%(P<0.01);6h略有回升,但仍明显低于对照组,分别较?

睾丸支持细胞对异基因T淋巴细胞的毒性作用

目的:分析睾丸支持细胞(塞尔托利氏细胞)对异基因T淋巴的细胞毒性作用。方法:实验于2006-01/07在解放军广州军区武汉总医院实验科完成。睾丸支持细胞取材于二三周龄SPF级Wistar雄性大鼠,由湖北省实验动物中心提供(许可证号:SCXK(鄂)-2003-005)。T淋巴细胞取材于体质量为200-250g的SPF级SD雄性大鼠脾脏,由湖北省实验动物中心提供(许可证号:SCXK(鄂)-2003-005)。将Wistar大鼠睾丸支持细胞与异基因SD大鼠T淋巴细胞共同培养。按睾丸支持细胞含量将实验分6组:对照组(0个睾丸支持细胞+DMEM/F12培养基100μL)、睾丸支持细胞1×103组(100μL)、睾丸支持细胞1×104组(100μL)、睾丸支持细胞1×105组(100μL)、睾丸支持细胞1×106组(100μL)及FasL单抗处理的睾丸支持细胞1×106组(经0.2μg抗FasL单克隆抗体封闭过的睾丸支持细胞1×106,100μL),每组均加1×105T淋巴细胞,6复孔培养48h,应用噻唑蓝比色法测定睾丸支持细胞对T淋巴细胞的毒性作用,用酶标仪于570nm处测各孔吸光度(A值),细胞毒性百分比(%)=(对照组A值-试验孔A值)/对照组A值×100%。结果:睾丸支持细胞1×103组、睾丸支持细胞1×104组、睾丸支持细胞1×105组及睾丸支持细胞1×106组对T淋巴细胞的细胞毒性百分比显著高于对照组、FasL单抗处理的睾丸支持细胞1×106组(8.75%,20.37%,65.07%,62.96%;0,3.85%,P<0.01);睾丸支持细胞1×103组-睾丸支持细胞1×105组随睾丸支持细胞数量增加,对T淋巴细胞的毒性作用也明显增加,当睾丸支持细胞数增加至1×105,杀伤作用的增加不再显著。FasL单抗处理的睾丸支持细胞1×106组与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论:睾丸支持细胞对异基因T淋巴细胞有明显毒性作用,随着睾丸支持细胞增加,对异基因T淋巴细胞的抑制和杀伤作用也越大;但是当睾丸支持细胞达到一定数量后,其毒性作用不再增加;这种作用也可以被抗FasL单克隆抗体阻断。表明睾丸支持细胞FasL的表达是发挥免疫豁免作用的主要作用途径。

羊睾丸提取液对小鼠受损睾丸支持细胞的修复作用

目的:探讨羊睾丸提取液对重金属致损睾丸支持细胞的修复与保护作用,以期为干预男性生育功能障碍提供新思路。方法:选用健康昆明种雄性小白鼠30只,随机将其分为对照组、模型组、给药组,每组小鼠10只。采用醋酸铅制备睾丸受损模型,还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸-黄递酶(NADPH-d)组织化学方法结合显微图像分析,观察各组小鼠睾丸支持细胞一氧化氮合酶(nitricoxidesyn-thase,NOS)活性。结果:模型组睾丸支持细胞肿胀变性,模型组NOS活性(A值:0.146±0.023)明显低于对照组(0.298±0.031);给药组支持细胞形态接近对照组,给药组NOS活性(0.236±0.020)明显高于模型组(P<0.01)。对照组体质量明显高于模型组(P<0.01);给药组体质量明显高于模型组(P<0.05);对照组与给药组无明显差异(P>0.05)。对照组睾丸质量明显高于模型组(P<0.05);给药组睾丸质量明显高于模型组(P<0.05)。结论:羊睾丸提取液对铅等重金属所致的睾丸损伤有一定的修复和保护作用。

ES细胞体外定向分化为睾丸间质样细胞模型的建立

目的:建立小鼠胚胎干(embryonic stem,ES)细胞体外分化为睾丸间质样细胞(leydig-like cells)的模型。方法:采用脂质体转染方法将含类固醇生成因子1(steroidogenic factor 1,SF-1)基因片断的质粒转入小鼠ES-D3细胞,并在RA和8Br-cAMP作用下,体外诱导ES-D3细胞分化为睾丸间质样细胞,以空质粒转染组做阴性对照;通过光镜观察转染SF-1的ES-D3细胞定向分化为睾丸间质样细胞过程中的形态变化;用RT-PCR及Western Blot法检测分化过程中类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR),胆固醇侧链裂解酶P450scc(CYP11A1)和3β-羟甾脱氢酶1(3β-HSD1)表达情况;免疫荧光法检测睾丸间质样细胞特异性蛋白P450scc及3β-HSD1表达。结果:ES-D3细胞转染SF-1质粒24 h,即检测到SF-1基因表达。转染成功的ES-D3细胞在RA和8Br-cAMP诱导分化48 h后出现睾丸间质样细胞。分化而来的睾丸间质样细胞胞体大而圆润,长有触角,呈纺锤形;且表达睾丸间质样细胞特异性蛋白P450scc和3β-HSD1,同时StAR表达显著增加,而对照组细胞未表达睾丸间质样细胞特异性标志物StAR、P450scc和3β-HSD1。结论:通过对ES-D3细胞转染SF-1质粒并予以RA和8Br-cAMP诱导,成功建立ES-D3细胞定向分化为睾丸间质样细胞模型。