绿色荧光标记共培养睾丸体细胞体内、外培养观察

目的:对Wistar大鼠睾丸间质体细胞转染携带绿色荧光蛋白基因的慢病毒,为进一步标记睾丸间质体细胞移植组织工程实验奠定基础。方法:获取Wistar大鼠睾丸间质体细胞,用慢病毒转载绿色荧光对其转染标记,体外培养,在共聚焦荧光显微镜下动态观察细胞生长、增殖等情况。回植于去势鼠体内,培养一定时期后取心脏血进行雄激素的检测。结果:睾丸间质体细胞于90h后,在荧光显微镜蓝光激发波长下,可发出明亮的绿色荧光,转染率达80%。传代后的细胞仍能发出明亮的绿色荧光。回植后血清学检测有明显高于对照组的激素检出。结论:经GFP转染后的睾丸间质体细胞仍具有睾丸间质体细胞的特性。采用携带绿色荧光蛋白基因的慢病毒标记睾丸体细胞中梭形及不规则形细胞(SLCs等)转染细胞效率高且持久、简便有效,且能保持睾丸间质体细胞原有生物学特性。

量子点标记共培养睾丸体细胞体外培养观察

目的 初步验证量子点能否对共培养睾丸体细胞进行标记,为睾丸体细胞的体内外研究提供一种细胞损伤小,且简便、有效的标记手段.方法 取雄性Wistar大鼠的睾丸组织小块,胶原酶消化,差速贴壁法收集睾丸体细胞,取第一代睾丸体细胞以0.25%胰酶蛋白酶-0.02%EDTA消化,制备单细胞悬液,与量子点共同孵育2h后贴壁及传代培养,共聚焦荧光显微镜动态观察细胞生长、增殖情况.结果 相差显微镜下观察,标记细胞形态无明显改变,荧光显微镜下可见摄取量子散在分布于细胞内,主要集中于细胞核周围,分裂细胞及增殖活跃细胞摄取量明显高于老化细胞.传代后仍可见细胞内的量子点分布,荧光强度未见明显衰减.结论 量子点能够被共培养睾丸体细胞摄取,且摄取速度快,荧光显微镜下易于观察.量子点标记法对共培养细胞损伤小,操作简便易行,是共培养睾丸体细胞标记的理想选择之一.

精子发生研究进展

精子发生(spermatogenesis)是遗传信息传递和物种延续的重要环节,受诸多因素的调控。精子发生作为组织胚胎学、分子生物学、遗传学等多学科的交叉领域,是生殖生物学的研究热点之一。本文评述了精子发生相关研究的最新进展,介绍了生精细胞的分子调控、睾丸细胞对精子发生的影响以及精子发生重建技术的应用,以期为探索精子发生机制提供新的思路。