中心体相关蛋白55、睾丸表达基因14在结直肠癌组织中表达及其临床意义

目的回顾性分析中心体相关蛋白55(CEP55)、睾丸表达基因14(TEX14)在结直肠癌组织中表达及其临床意义。方法选取2015年10月至2016年10月在南阳市中心医院行手术治疗的78例结直肠癌病人癌组织及其癌旁组织为研究对象。利用Ualcan数据库分析CEP55和TEX14在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测CEP55和TEX14 mRNA表达;免疫组化染色法检测CEP55和TEX14蛋白表达;分析CEP55和TEX14蛋白表达与病人临床病理特征的关系;对病人随访5年,使用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析CEP55和TEX14蛋白表达与结直肠癌病人5年生存率的关系;使用Cox回归模型分析影响结直肠癌病人预后的因素。结果Ualcan数据库分析结果显示,结直肠癌组织中CEP55和TEX14表达量均明显高于癌旁组织(P<0.05)。结直肠癌组织中CEP55、TEX14 mRNA水平(2.34±0.70比1.00±0.26、1.57±0.44比0.98±0.25)及蛋白阳性表达率均明显高于癌旁组织(P<0.05)。CEP55和TEX14蛋白表达与分化类型、有无淋巴结转移、TNM分期、有无神经浸润、有无肝转移有关(P<0.05)。结直肠癌组织中CEP55蛋白阳性病人生存率为52.73%,明显低于CEP55蛋白阴性病人生存率78.26%(P<0.05);TEX14蛋白阳性病人生存率为52.63%,明显低于TEX14蛋白阴性病人生存率80.95%(P<0.05)。低分化、淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、CEP55蛋白阳性、TEX14蛋白阳性是影响结直肠癌病人5年预后的独立危险因素(P<0.05)。结论CEP55和TEX14在结直肠癌组织中呈高表达,CEP55和TEX14蛋白阳性病人5年生存率低于阴性病人,这些指标的临床意义,值得进一步研究。

人睾丸组织特异表达新基因HSD-9的克隆及其编码蛋白质功能

目的利用本室建立的人睾丸组织中不同细胞特异表达的ESTs文库克隆新基因HSD-9,初步研究HSD-9蛋白的特性及功能。方法采用电子克隆手段获得新基因HSD-9,生物信息学手段分析基因及编码蛋白质的特点,Northern blot研究HSD-9基因的表达谱,原核表达方法得到HSD-9蛋白并制备特异性多克隆抗体,免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术研究HSD-9蛋白在生精细胞中的定位及在哺乳动物细胞中的表达特点。结果HSD-9基因在人睾丸组织特异表达,其大鼠同源物可在大鼠各级生精细胞中表达;HSD-9-EGFP在CHO细胞和S4细胞中表达呈现沿细胞膜分布的小颗粒和偏心分布于胞内一侧的粗大颗粒;HSD-9-EGFP和网格蛋白clathrin可以部分共定位。结论HSD-9是人睾丸组织特异表达新基因,其编码蛋白质在CHO细胞和S4细胞中表达特点非常类似于内吞小体蛋白的表达特点,推测其可能参与了细胞中内吞过程的调节。

TSEG-2基因在小鼠睾丸扭转复位模型中的表达特征

目的 探讨睾丸特异表达基因2（testis specific expressed gene 2,TSEG-2）在小鼠睾丸扭转复位模型中的表达特征.方法 昆明小鼠36只,随机分组为对照组（6只）、假手术组（6只）、单侧睾丸扭转复位实验组（24只）.实验组分为2组,每组12只,左侧睾丸扭转720°维持2 h,分别于复位后1、7 d取扭转侧睾丸.采用HE染色、原位末端标记技术（TUNEL）观察睾丸组织形态改变;黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸比色法测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）活性;原位杂交法观测TSEG-2在睾丸生精细胞内的表达定位;实时定量PCR法检测TSEG-2基因在睾丸组织中的表达水平.结果 对照组和假手术组生精上皮排列规则,扭转复位后1、7 d的睾丸组织内生精上皮结构松散,出现生精细胞凋亡,Johnsen＇s评分分别降低23.4%、64.1%（P〈0.01）,SOD活性降低11.6%、22.2%（P〈0.05）,MDA活性升高69.6%、93.2%（P〈0.01）.TSEG-2基因表达定位于小鼠睾丸生精小管的精原细胞和精母细胞.与对照组比较,扭转复位1、7 d后睾丸组织内TSEG-2表达水平分别上调2.2倍、6.6倍（P〈0.01）.结论 成功建立小鼠睾丸扭转复位模型,TSEG-2表达上调可能与抗氧化酶活性下降、生精细胞凋亡有关.

睾丸特异表达基因-1在小鼠隐睾模型中的表达及其意义

目的 探讨睾丸特异表达基因-1（TSEG-1）在小鼠隐睾模型中的定位、定量表达变化及其意义.方法 将46只雄性昆明新生小鼠随机分为对照组（n=10）、丙二醇（溶剂）注射组（n=15）、17β-雌二醇注射组（n=21）,应用苏术素-伊红（HE）染色观察睾丸组织形态学改变,原位杂交、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和实时定量PCR检测TSEG-1 mRNA的定位和定量变化.结果 17β-雌二醇注射组发生隐睾,而对照组和丙二醇注射组睾丸位置正常.与对照组比较,17β-雌二醇组睾丸组织80%曲精小管管腔消失,Ⅰ～Ⅳ级生精细胞数目减少,60%精母细胞或精子细胞核皱缩,90%精子发生障碍.在对照组睾丸组织中,TSEG-1 mRNA表达水平是模型组25倍,主要定位于精母细胞和早期精子细胞,而隐睾组TSEG-1 mRNA表达水平显著下调.结论 17β-雌二醇诱导小鼠隐睾模型是制作隐睾模型的有效方法 ,新基因TSEG-1可能参与雌激素诱导隐睾模型的发生过程.

睾丸特异表达基因-1在乙醇致小鼠睾丸损伤模型中的表达及意义

目的 探讨睾丸特异表达基因-1（TSEG-1）在乙醇致小鼠睾丸损伤模型中的表达变化及意义。方法 首先建立乙醇致睾丸损伤模型,将12只雄性昆明小鼠随机分为对照组和实验组,每组6只,用生理盐水稀释无水乙醇为15%浓度。实验组小鼠每天按3 g乙醇（15%,V/V）/kg体质量,腹腔内注射14 d,对照组为等体积生理盐水。应用苏木素-伊红（HE）染色鉴定睾丸组织形态学变化,实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测TSEG-1 mRNA变化,采用免疫组织化学和Western blot检测其蛋白变化。结果 乙醇组睾丸HE染色结果提示,与对照组比较,乙醇组睾丸组织85.6%曲精小管管腔消失,I-Ⅳ级生精细胞数目减少,78.2%精母细胞或精子细胞核皱缩。在乙醇组睾丸组织中,TSEG-1 mRNA表达水平（7.500±0.657,n=6）较对照组（0.985±0.231,n=6）显著增加,差异有统计学意义（t=22.915,P〈0.01）。同时,乙醇组TSEG-1蛋白质较生理盐水组显著增加,经Quantity One软件分析灰度值后,与管家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）比较,乙醇组TSEG-1蛋白（1.360±0.202,n=6）较生理盐水组（0.330±0.112,n=6）表达增加达4倍,差异有统计学意义（t=10.69,P〈0.01）。结论 乙醇致小鼠睾丸损伤模型是研究睾丸损伤的可靠模型,TSEG-1可能参与乙醇致睾丸损伤模型的分子发生过程。

TSEG-2基因真核表达载体的构建及其在细胞内的表达

目的构建睾丸特异表达基因2（TSEG-2）的真核表达载体，探讨TSEG-2存细胞中的表达及其生物学功能。方法以小鼠睾丸组织cDNA为模版，设计携带HindⅢ和BamHI酶切位点的引物序列，聚合酶链反应（PCR）扩增基因片段，克隆至携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的真核表达载体pEGFP—N1；在阳离子聚合物聚乙烯亚胺（PEI）的介导下，重组质粒转染体外培养的精母细胞株GC-2spd48h后，荧光显微镜下观察TSEG-2基因在细胞内的表达定位，噻唑蓝（MTT）比色法测定细胞生长活性，AO／EB荧光染色法、Hoechst33258荧光染色法、AnnexinV—FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡，实时定量PCR测定Fas、bcl-2、bax表达水平。结果成功构建了TSEG-2与EGFP的融合表达载体pEGFP—TSEG2，转染GC-2spd细胞后可见胞质内绿色荧光蛋白表达。转染pEGFP—TSEG248h后，GC-2spd细胞生长抑制39．2％（P〈0．05），出现细胞凋亡形态学改变，凋亡率为28．3％（P〈0．05）；GC-2spd细胞中Fas和bcl-2的表达分别下调17．9％、64．8％（P〈0．05），而bax的表达上调25．1％（P〈0．05）。结论成功构建TSEG-2基因的真核表达载体，能在精母细胞株中表达并促进细胞凋亡。

中药复方对来航公鸡精液品质的影响

为探讨中药复方对公鸡精液品质的影响,24只来航公鸡随机分为3组,中药复方Ⅰ、Ⅱ组和对照组,每组8只,中药复方组分别添加中药复方Ⅰ、Ⅱ,对照组饲喂基础日粮,预试期7 d,正试期70 d。分别于试验前和试验结束称量鸡体质量,并记录每日采食量;分别于正式试验61,63,65,67,69 d采集试验鸡精液,检测精子密度、活力和畸形率,通过试剂盒检测公鸡精浆抗氧化性能;试验结束后采集翅下静脉血,并处死试验鸡摘取脾脏、肝脏及睾丸计算其脏器指数,全自动血液生化分析仪检测血清生化指标,qRT-PCR检测睾丸组织AR、Bcl-2、Bax基因mRNA表达水平。结果表明,与空白对照组相比,添加中药复方Ⅰ、Ⅱ对公鸡生产性能及血清生化指标无显著影响(P>0.05);2组中药复方均能显著提高试验公鸡的精子密度(P<0.05),其中,复方Ⅱ极显著提高精子活力(P<0.01);中药复方Ⅰ、Ⅱ均能提高精浆超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)含量,其中,复方Ⅰ可显著升高精浆GSH含量(P<0.05);中药复方Ⅰ极显著提高公鸡睾丸AR基因表达水平(P<0.01),显著升高Bcl-2/Bax的比值(P<0.05),中药复方Ⅱ可显著升高公鸡睾丸Bcl-2的表达水平(P<0.05),Bax基因表达水平均无显著性差异(P>0.05)。本研究可为应用中药复方提高公鸡精液品质提供参考。