小儿腹腔镜隐睾手术中保留睾丸引带与切断引带术后睾丸发育情况的对比分析

目的:探究小儿腹腔镜隐睾手术中保留睾丸引带对睾丸发育情况的影响。方法:2016年1月~2021年12月收治于青岛大学附属医院小儿外科、行保留睾丸引带的腹腔镜睾丸固定术的98例患儿(3周岁以内)作为观察组,选择同期行传统开放式手术治疗的同类患儿127例作为对照组。收集手术相关指标,随访1年,记录两组患儿睾丸体积变化、并发症及复发情况。结果:两组患儿手术相关情况,其手术时间、住院时间及术中出血量,其差异无统计学意义(P > 0.05)。两组发生术后阴囊血肿并发症的概率差异无统计学意义(P > 0.05),而保留引带组发生术后睾丸回缩、睾丸萎缩并发症的概率小于断引带组,其差异有统计学意义(P 0.05),而两组术后1年患侧睾丸体积,观察组高于对照组,差异有统计学意义(P 0.05)。两组术后1年患侧睾丸增长体积,观察组睾丸体积大于对照组,差异有统计学意义(P 0.05)。结论:腹腔镜保留睾丸引带的隐睾下降固定术较离断睾丸引带的传统手术方式治疗隐睾,通过尽可能多地保留睾丸血运,降低了隐睾术后睾丸萎缩并发症发生率,促进了隐睾患儿术后患侧睾丸发育。

小鼠睾丸引带细胞的培养及己烯雌酚对培养睾丸引带细胞的影响

目的：探讨小鼠睾丸引带细胞体外培养的有效方法,并进行形态学观察。研究经典的外源性雌激素己烯雌酚（DES）体外对小鼠睾丸引带发育的影响。方法：手术放大镜解剖出3日龄雄性昆明小鼠的睾丸引带组织并进行细胞培养。台盼蓝染色检测细胞存活率,HE染色观察细胞形态。传代培养并随机分为空白对照组、溶剂对照组（DMSO组）和实验组（DES 1~4组）共6组。溶剂对照组加入DMSO,实验组分别加入0.01、0.10、1.00以及10.00μg/ml DES。分别于培养12、24、48 h后进行细胞形态学观察,CCK-8法检测睾丸引带细胞的生长情况。结果：培养睾丸引带细胞大部分为成纤维细胞型,有少数的上皮样细胞。原代细胞的存活率为85%~90%。在不同剂量DES作用后的3个不同时间段里,细胞增殖性的检测结果存在时间-剂量效应的显著差异（P〈0.01）。结论：睾丸引带细胞可经一定的方法进行体外培养,外源性雌激素对睾丸引带细胞的生长有抑制作用,且呈现一定的时间-剂量效应。对培养睾丸引带细胞影响的研究是外源性雌激素影响生殖系统发育研究的一条有效的睾丸外途径。

邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯对小鼠胎鼠睾丸及睾丸引带的影响

目的:研究邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对小鼠胎鼠睾丸与睾丸引带形态结构及功能的影响,探讨隐睾发生的可能机制。方法:30只健康KM孕鼠随机均分为3组:空白对照组、玉米油对照组、DEHP组。DEHP组以剂量500mg/(kg.d)的DEHP灌胃作用于怀孕12～19d(GD12～GD19)的KM母鼠,观察DEHP对每胎胎鼠数、雌雄性胎鼠比例、雄性胎鼠体重、睾丸重量、睾丸引带形态结构、位置、睾丸到膀胱颈之间的相对距离(TBD)、颅侧悬韧带残留情况、引带内雄激素受体(AR)、雌激素受体(ER)、肌动蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平的影响。结果:DEHP对每胎胎鼠数、雌雄性胎鼠比例、雄性胎鼠体重无明显影响;DEHP可影响胎鼠睾丸重量及TBD;DEHP组睾丸均有一定程度的下降不全,睾丸引带形态结构无明显差异;光镜下见DEHP组睾丸生精小管、支持细胞存在明显的发育障碍,睾丸Leydig细胞明显增生;DEHP组睾丸引带AR阳性表达率降低(P<0.01)。结论:DEHP可通过抗雄激素效应导致睾丸引带功能障碍,使睾丸下降发生异常而诱导小鼠隐睾;同时造成睾丸Ser-toli细胞、睾丸Leydig细胞和生精细胞的发育障碍和功能改变。

己烯雌酚致胚胎期睾丸引带形态结构发育异常的研究

背景与目的 :研究环境外源性雌激素己烯雌酚(Diethylstilbestrol,DES)对胚胎小鼠睾丸引带形态发育的影响 ,探讨DES影响睾丸以及生殖系统发育的机制。 材料与方法 :昆明雌性小鼠60只 ,随机分成6组 ,于孕9～17d每天分别给予DES25、50、100、200μg·kg-1·d-1和等体积的DMSO、生理盐水作空白和正常对照。孕l9d处死母鼠 ,取出活胎、取其下腹部 ,分别作光镜和电镜固定。观察睾丸引带的组织形态学及细胞超微结构变化。结果 :DES可致睾丸引带发育不良 :体积缩小 ,形态异常 ,组织结构紊乱 ,细胞内肌丝细小 ,排列紊乱 ,密体不明显 ,胞浆中细胞器散在分布。DES剂量越大 ,睾丸引带形态异常及组织细胞结构紊乱现象越明显。 结论 :DES可致胎鼠睾丸引带形态异常、组织细胞结构紊乱 ,且有剂量效应关系。

环境雌激素影响雄性胎鼠睾丸下降及睾丸引带肌动蛋白表达的实验研究

目的:探讨环境雌激素(EEs)对雄性胎鼠睾丸下降以及睾丸引带肌动蛋白表达的影响。方法:成熟雌性昆明小鼠140只随机分为14组,孕9～17d每天分别给予己烯雌酚、17α雌二醇和17β雌二醇[每种药物分别给予不同剂量25、50、100、200μg/(kg·d)],对照组、正常组分别给予等体积的二甲基亚砜、NS。孕17d处死母鼠后观察雄性胎鼠睾丸下降情况,应用透射电镜观察睾丸引带细胞超微结构,应用免疫组化检测睾丸引带组织中肌动蛋白的表达。结果:EEs可致睾丸发育较差,下降不全,与对照组比差异有统计学意义(P<0.05)。透射电镜观察发现正常组及对照组睾丸引带细胞内肌丝粗大,密体明显,胞浆中细胞器丰富;实验组睾丸引带细胞内肌丝明显细小,密体不明显,胞浆中细胞器较少,随EEs剂量增大此表现更明显。实验组肌动蛋白含量降低,EEs剂量越大,肌动蛋白含量越低(P<0.05),有显著的剂量效应关系。结论:孕期应用EEs可影响雄性胎鼠睾丸下降、睾丸引带细胞超微结构以及肌动蛋白的表达,这些改变可能是EEs导致多种生殖系统畸形的直接或间接原因。

在腹腔镜下保留睾丸引带行小儿腹腔型隐睾手术的护理

目的探讨在腹腔镜下保留睾丸引带行小儿腹腔型隐睾手术的疗效及护理。方法回顾分析2008年5月～2011年6月为38例腹腔型隐睾患儿行腹腔镜睾丸阴囊肉膜囊固定术的临床资料,术中保留睾丸引带和精索双向血供。术前重视患儿及家长的心理护理和皮肤准备,术后重点做好病情观察及切口护理,同时做好并发症护理及出院指导,保证手术效果。结果 38例患儿均成功完成腹腔镜1期睾丸下降固定,无一例中转手术,手术时间45～60min,平均55min。本组有2例发生切口渗血,由于护士发现及时,处理恰当,患儿恢复良好。无其他并发症发生,术后随访6～36个月,平均16个月,无一例睾丸回缩,萎缩。结论在腹腔镜下保留睾丸引带行腹腔型隐睾1期睾丸下降固定术,患者创伤小、手术时间短、术后睾丸血供良好。而精心细致的护理是手术成功的重要保障。

保留睾丸引带在腹腔镜小儿腹腔型隐睾手术中的应用

目的:探讨保留睾丸引带在腹腔镜小儿腹腔型隐睾手术中的疗效。方法:回顾分析2007年6月至2010年8月为24例腹腔型隐睾患儿行腹腔镜睾丸阴囊肉膜囊固定术的临床资料,术中保留睾丸引带和精索双向血供。结果:24例均成功完成腹腔镜Ⅰ期睾丸下降固定术,无一例中转手术,手术时间45～60 min,平均55 min,无并发症发生。术后随访6～36个月,平均16个月,睾丸无回缩、萎缩。结论:腹腔型隐睾腹腔镜保留睾丸引带Ⅰ期睾丸下降固定术患者创伤小,手术时间短,术后睾丸血供良好,值得推广应用。

己烯雌酚对小鼠睾丸引带中LGR8表达的影响

目的:通过体内实验研究己烯雌酚(DES)对小鼠睾丸引带中胰岛素样因子3受体LGR8的影响,从而探讨外源性雌激素对小鼠睾丸下降的影响。方法:8～10周龄KM孕鼠随机分为正常组、空白对照组和实验组(0.1、1.0、10、100μg/kg DES 4个剂量组),共6组,每组20只。于孕9～17 d每天分别给予实验组妊娠小鼠不同剂量的DES(0.1、1、10、100μg/kg),空白对照组给予等体积DMSO+生理盐水,正常组不给药。应用免疫组化和RT-PCR分别检测胎鼠和幼鼠睾丸引带中LGR8蛋白和mRNA的表达。结果:HE染色可见胎鼠正常组、对照组睾丸引带发育良好,中间的间叶组织和外周的肌源细胞之间分界清楚;实验组可见睾丸引带发育不良,间叶组织和肌源细胞之间无明显分界,组织结构紊乱。幼鼠正常组和实验组睾丸引带发育未见明显不同。LGR8表达于睾丸引带肌源细胞和间叶组织细胞,以肌源细胞表达为主。实验组LGR8阳性表达较正常组弱,胎鼠各实验组和幼鼠DES 1、10、100μg组与同发育阶段的正常组相比均有统计学意义(P<0.05)。DES高剂量(10、100μg)组与同发育阶段的正常组相比LGR8 mRNA表达增加(P<0.05)。各实验组PCR产物测序均未见明显突变。结论:DES可影响小鼠睾丸引带LGR8 mRNA和蛋白的表达,DES可能通过影响INSL3-LGR8信号系统干扰睾丸引带的发育,进而影响睾丸正常下降。

GPER-ERK通路在DES影响小鼠睾丸引带发育中的作用

目的:检测G蛋白偶联雌激素受体(GPER)在小鼠睾丸引带上的存在情况,并进一步探讨已烯雌酚(DES)影响小鼠睾丸引带细胞的非基因效应,从睾丸外因素初步了解外源性雌激素影响雄性生殖系统的可能机制。方法:应用免疫组织化学方法了解GPER在不同发育时期(孕17、19 d,生后0、3、7、14和21 d)小鼠睾丸引带上的表达分布情况,并利用免疫电镜进行亚细胞水平的定位。将培养传代的小鼠睾丸引带细胞随机分为3组:实验组(DES组),经典雌激素核受体阻断剂亦是GPER激动剂ICI 182780干预组(ICI 182780-DES组)和GPER阻断剂G15干预组(G15-DES组)。利用Western Blot方法检测不同组别中DES对其ERK通路的影响。结果:GPER存在于不同发育时期的小鼠睾丸引带内层疏松间叶组织区,主要表达于引带细胞的细胞膜及细胞浆上;免疫电镜显示GPER颗粒主要锚定在小鼠睾丸引带细胞的粗面内质网上,表达量少。Western blot方法发现DES对ERK通路上p-ERK1/2的抑制作用可被GPER阻断剂G15阻断,但预先加入ER阻断剂ICI 182780后没有得到类似的反转现象。结论:GPER持续存在小鼠睾丸引带的各个发育阶段,表达于引带细胞的膜性结构上;DES对小鼠睾丸引带的快速非基因效应至少部分是通过GPER介导的。以睾丸引带为研究对象,探讨DES影响雄性生殖系统发育的可能机制,可为其他迫切需要进行效应评价研究的环境雌激素提供一个新的实验参考系统。

胰岛素样激素3与睾丸引带发育和睾丸下降

睾丸下降是生殖系统发育过程中的重要阶段,其机制尚未阐明。睾丸引带发育与睾丸下降关系密切。睾丸下降不全常常伴随睾丸引带发育异常,它们除了可引起隐睾和睾丸发育不良等疾病外,还是生殖系统先天畸形以及以后生殖功能、性功能异常和高比例生殖系统肿瘤发生的原因。胰岛素样激素3是近年来倍受关注的影响睾丸引带发育和睾丸下降的重要因素,本文就相关进展进行综述。

新生小鼠睾丸引带形态结构及其异常的显微连续研究

目的：应用新生小鼠生殖系统整体原位固定、横断面连续组织切片显微观察的研究方法，整体展现正常及异常状态下新生小鼠睾丸引带的形态结构，以探讨应用整块组织固定、连续切片显微研究的方法在判定生殖系统形态异常中的适用性。方法：正常及孕期（9-17d）接触不同剂量外源性雌激素己烯雌酚（DES）的新生雄性昆明小鼠，切取其腹部（自膈下）固定、包埋，作连续切片、染色。显微镜下顺序摄像，分析睾丸引带的形态结构，并测算其相应位置和大小。结果：显微连续观察显示新生小鼠睾丸引带的结构清晰，形态结构各段变化较大且左右不对称，DES对睾丸引带形态结构发育的影响各段不尽相同，而且明显影响整个引带的长度。结论：孕期接触DES对新生小鼠睾丸引带的发育有明显影响，其影响是整体性的。整块组织切片显微连续研究对睾丸引带或及其它相关生殖系统器官的形态结构评价能够比较全面和精确。

保留睾丸引带在200例腹腔镜小儿隐睾手术中的应用体会

目的 探讨在小儿腹腔型隐睾手术中保留睾丸引带的意义及手术的成功率和疗效.方法 选取本院2005年1月至2013年8月200例保留睾丸引带行腹腔隐睾手术的腹腔型隐睾患儿的临床资料,进行严谨地回顾和分析.结果 患者手术时间50～65 min,平均时间60 min,良好160例,一般40例,术后随访未见术后腹膜粘连、睾丸回缩或者萎缩等不良情况.结论 在保留睾丸引带的情况下行小儿腹腔型隐睾手术不仅缩短了手术时间,减少了对患者的损伤,更是有效地避免了并发症的发生,而且患儿术后恢复快且非常好,建议临床推广应用.

影响睾丸引带发育的内分泌因素研究进展

睾丸引带与睾丸下降关系密切,它的分化发育和多种因素有关,特别是雄激素、降钙素基因相关肽、胰岛素样因子3、苗勒管抑制物质、表皮生长因子以及环境雌激素(EEs)等,其中降钙素基因相关肽、胰岛素样因子3和EEs对生殖系统的影响是目前研究的热点。从影响睾丸引带发育的角度探讨EEs对睾丸及生殖发育的影响很有意义。

昆明小鼠胎鼠睾丸引带发育过程受己烯雌酚影响模型的建立

目的:建立己烯雌酚(DES)对昆明小鼠胎鼠睾丸引带发育过程影响的动物模型,以备进一步探讨环境雌激素(EES)影响生殖系统发育的机制.方法:孕鼠60只随机分成6组,于孕9～17 d分别给予DES 0、25、50、100、200 μg/(kg·d),对照组给予等体积NS.孕17 d处死母鼠取出胎鼠腹部,标本依据不同检查目的分别固定,作光镜和扫描电镜检查.观察死胎率变化及睾丸下降程度.结果:DES致死胎率明显增高,胎鼠引带球发育较差,体积较小,呈圆锥状,引带索细长,组织结构紊乱,睾丸发育较差,下降不全,与对照组比有统计学意义(P<0.05).结论:DES对胎鼠睾丸引带形态、组织结构影响明显.该模型成功建立可供深入研究EES影响睾丸引带、生殖系统的机理所用.

己烯雌酚影响新生小鼠睾丸引带相关基因表达的初步研究

目的:通过不同剂量己烯雌酚(DES)孕期染毒,了解其对新生仔鼠睾丸引带中雄激素受体(AR)、雌激素受体α(ERα)、增殖细胞核抗原(PCNA)和肌动蛋白α1(ACTα1)mRNA表达的影响,以期窥探DES影响睾丸引带的作用途径。方法:将发现雌性昆明小鼠阴道栓当天记为孕第0天(GD0),在GD9~GD17分别给予不同剂量DES[0.02、0.1、0.5、10、50μg/(kg·d)]作为实验组,给予等体积二甲基亚砜及生理盐水分别作为溶剂和空白对照组。生后第1天处死雄性仔鼠获取睾丸引带,通过RT-PCR检测AR、ERα、PCNA和ACTα1 mRNA的表达量。结果:随着DES浓度的增加,ERαmRNA的表达逐渐增加,各实验组与溶剂对照组比较差异有统计学意义(RE^2=0.825,P<0.05);AR、PCNA和ACTα1 mRNA的表达都呈下降趋势,高剂量组[10、50μg/(kg·d)DES组]与溶剂对照组比较差异有统计学意义(RA^2=0.713,RP^2=0.946,RT2=0.960,P<0.01)。结论:正常新生昆明小鼠睾丸引带中存在ERα、AR、PCNA及ACTα1 mRNA的表达。孕期不同剂量DES染毒对新生小鼠睾丸引带细胞受体蛋白(ERα和AR)及功能蛋白(PCNA和ACTα1)mRNA表达的影响不同。外源性雌激素可能通过影响ER和或AR的代谢而影响睾丸引带细胞的增殖和收缩等功能,从而影响睾丸甚至整个雄性生殖系统的正常发育。

修正型时间响应式在预测胎儿睾丸引带形态发生中的应用

本文通过对胎儿睾丸引带形态发生变化过程中实测资料的分析，应用灰色系统理论探讨其形态与胎龄之间的关系，进而提出了修正型时间响应式，通过计算机拟合结果表明：应用前者的拟合度左、右分别为ＲＬ＝０．９１８３和Ｒｒ＝０．９２４０，而应用修正型时间响应式则拟合度左、右分别为ＲＬ＝０．９７０８和Ｒｒ＝０．９７９４。

环境雌激素对新生仔鼠睾丸引带中Notch信号通路的影响

目的探讨己烯雌酚(DES)对孕期仔鼠睾丸引带组织中Notch信号通路的影响。方法将45只8～10周龄健康雌性SD大鼠采用随机数字表法分为对照组、实验1组、实验2组,每组15只。实验1、2组分别给予DES0.1、25.0μg/(kg·d),按常规雌雄比例2∶1合笼。每组均以仔鼠出生当天记为生后0 d(PD_0),分别于生后1 d(PD_1)和生后7 d(PD_7)时取雄鼠睾丸引带,采用RT-PCR和Western blot测定Notch1、Hes1、表皮生长因子受体(EGFR)和转化生长因子-α(TGF-α)的表达。结果在PD_1和PD_7时,实验1组中Notch1、Hes1、EGFR和TGF-αmRNA表达水平均较对照组和实验2组增高(P <0.05),而实验2组中只有TGF-αmRNA表达水平较对照组增高(P <0.05)。在PD_1时,实验1组中Notch1、Hes1、TGF-α蛋白表达水平较对照组增高,实验2组中Notch1、EGFR、Hes1蛋白表达水平较对照组增高(P <0.05);在PD_7时,实验1组中Hes1、EGFR蛋白表达水平较对照组增高,实验2组中Notch1、Hes1、EGFR蛋白表达水平较对照组增高(P <0.05)。与实验1组比较,实验2组PD_1时EGFR蛋白表达水平增高,PD_7时Notch1、Hes1、TGF-α蛋白表达水平增高(P <0.05)。结论环境雌激素可影响仔鼠睾丸引带Notch信号通路的表达,可能是外源性雌激素影响睾丸引带发育和增殖的机制之一。

己烯雌酚影响培养的睾丸引带细胞收缩及其信号机制

目的 探讨JNK信号转导通路在外源性雌激素对胎鼠睾丸引带细胞影响中的作用。方法 3日龄雄性昆明小鼠的睾丸引带组织,进行原代细胞培养后传代。将传代细胞随机分组。实验组分DES(浓度10μg/L;0.02μg/L)两组;DES(浓度10μg/L;0.02μg/L)+SP600125(JNK抑制剂)两组,持续作用24h,应用细胞免疫荧光技术检测细胞内F-actin的表达。结果 引带细胞在浓度10μg/L的DES作用后形态变小,胞质突起明显减少,F-actin显示在细胞周边肌动蛋白丝带模糊,结构紊乱,明显解聚。在DES作用同时加入JNK抑制剂后,浓度10μg/L的DES组细胞形态变化小。且在DES(浓度10μg/L;0.02μg/L)组中F-actin显示在胞质内呈局部性表达增强,应力纤维排列紊乱或部分解聚断裂消失。结论 JNK信号通路参与了DES对细胞作用后的细胞形态的维持和骨架构建。

己烯雌酚对人类高位和低位隐睾睾丸引带细胞的影响

目的研究外源性雌激素己烯雌酚(DES)在体外对高位和低位隐睾患儿睾丸引带细胞的影响。方法以麻醉下未降睾丸的位置位于内环口以上的腹腔型隐睾为高位组,已出内环口但未出外环口的腹股沟管型隐睾为低位组,分别收集高、低位隐睾患儿术中的废弃引带,经IV型胶原酶消化后原代培养、比较其形态和细胞骨架的差别;将两组细胞分别培养于溶剂对照组(DMSO)和DES浓度梯度为0.01、0.1、1及10μg/ml的培养基内24 h。以鬼笔环肽标记法示DES作用前后细胞的形态学改变;CCK-8法检测其增殖能力的变化;荧光定量PCR法检测RXFP2基因相对表达量的差异。结果人类高位和低位隐睾睾丸引带细胞大部分为成纤维细胞样,其中低位组的细胞可自发融合成多核肌管样细胞。高浓度DES(10μg/ml)可抑制人类高、低位隐睾的睾丸引带细胞的增殖、改变细胞的光镜特征和微丝骨架,但是其对两组细胞的影响没有统计学差异。高浓度DES上调两组细胞RXFP2的表达水平。结论人类高、低位隐睾的睾丸引带细胞具有不同的形态特征;高浓度外源性雌激素可改变高位和低位隐睾的睾丸引带细胞骨架、抑制细胞的增殖活力并上调人类引带RXFP2基因的表达。

戊酸雌二醇对大鼠胎鼠睾丸及睾丸引带的影响

目的研究戊酸雌二醇对大鼠胎鼠睾丸与睾丸引带形态结构及功能的影响,探讨睾丸下降不全的原因。方法30只健康SD受孕大鼠随机均分为4组:对照组及低、中、高剂量组。戊酸雌二醇以剂量0.8~2.0 mg/(kg·d)灌胃作用于怀孕6~15 d SD母鼠,分娩后正常喂养雄性子代,出生60 d测量附睾、睾丸的脏器系数(附睾、睾丸重量/大鼠体重100),进行睾丸组织学切片观察生精小管的形态学变化,测量生精小管直径。结果中、高剂量组睾丸均有一定程度的下降不全,光镜下睾丸生精小管、支持细胞存在明显的发育障碍,睾丸Leydig细胞明显增生;附睾、睾丸脏器系数、睾丸生精小管直径较对照组及低剂量给药组差异有统计学意义(P<0.05)。结论雌激素可导致睾丸引带功能障碍,使睾丸下降发生异常而诱导隐睾发生;同时造成睾丸Sertoli细胞、睾丸Leydig细胞和生精细胞发育障碍及功能改变。